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2017年中华放射肿瘤治疗技术学学术年会于8月25-27日在湖南长沙市成功召开. 本次会议由中华医学会、中华放射肿瘤治疗学分会主办,中南大学湘雅医院承办. 郎锦义教授、王绿化教授担任大会主席,林承光主任技师、申良方教授担任大会执行主席. 大会共收到论文242篇,来自全国各地的600多名放射治疗师参加了会议. 相似文献
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SARS冠状病毒E蛋白的表达与纯化 总被引:1,自引:0,他引:1
目的研究SARS冠状病毒E蛋白对SARS诊断和预防的价值,利用原核表达系统克隆和表达E蛋白并纯化。方法采用RT—PCR从SARS冠状病毒RNA中扩增出编码N蛋白的基因;经克隆和测序分析后,亚克隆至表达载体DGEX-4T-2,转化大肠杆菌BL21(DE3),PCR和双酶切鉴定;阳性菌株经IPTG诱导,SDS—PAGE分析,进一步以SARS病人血清进行免疫印迹分析;大量诱导表达N蛋白,亲和层析予以纯化。结果RT—PCR扩增出E蛋白基因的特异片段,获得的阳性克隆序列与GenBank中登录的SARS冠状病毒的E蛋白基因序列同源性为100%;E蛋白基因被亚克隆至表达载体pGEX-4T-2,在BL21中获得表达,表达产物能被SARS病人血清识别。表达的E蛋白经亲和层析获得纯化。结论成功构建了SARS冠状病毒E蛋白的重组表达质粒,在大肠杆菌中表达的E蛋白的融合蛋白具免疫活性。 相似文献
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弓形虫GRA4基因真核表达重组质粒的构建与表达 总被引:1,自引:0,他引:1
目的构建弓形虫致密颗粒蛋白GRA4的真核表达质粒,并研究其在体外与体内细胞中的表达情况。方法采用PCR方法及克隆技术,构建pVAC-GRA4重组质粒;利用脂质体介导转染法,将该重组质粒导入HEK-293细胞,用RT—PCR法及Westem-blot法检测其表达情况;利用基因枪导入法将该重组质粒导入BALB/c小鼠体内细胞,测定免疫鼠T淋巴细胞亚群及IFN-γ、IL-4含量,并观察攻毒试验后小鼠存活情况,以评价其免疫保护力。结果从弓形虫RH株基因组DNA中扩增出GRA4基因片段,成功构建重组表达质粒pVAC-GRA4;转染GRA4的HEK-293细胞,RT—PCR检测可见一条约987bp的目的条带,表达产物经Western—blot鉴定,其分子量约为41kD,能被特异性免疫血清所识别;经pVAC-GRA4免疫后的小鼠,其CD4^+T细胞百分率无明显变化(P〉0.05),CD8^+T细胞百分率明显增加(与pVAC对照组比较P〈0.05,与空白对照组比较P〈0.01)。CD4^+/CD8^+比值也较空白对照组明显降低(P〈0.01);pVAC-GRA4免疫鼠IFN-γ的A值比对照组略高,但差异无显著性(P〉0.05)。IL-4A值各组间无明显变化(P〉0.05);pVAC-GRA4免疫鼠存活率显著高于两对照组,死亡小鼠的平均存活时间延长(与空白对照组比较P〈0.05)。结论构建的真核表达质粒pVAC-GRA4能在HEK-293细胞中和小鼠体内细胞中轰基.为弓形出癌苗的进一步研究打下基础. 相似文献
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弓形虫致密颗粒蛋白4的原核细胞表达与纯化 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 构建弓形虫致密颗粒蛋白4(GRA4)的pET原核细胞表达系统,并对其表达产物进行纯化及其免疫学活性测定。 方法 利用PCR扩增弓形虫GRA4基因片段,定向亚克隆入原核细胞表达载体pET-23a(+),转化大肠埃希菌(E.coli BL21 DE3),以组氨酸结合柱亲和层析法纯化表达产物,并对其进行抗原活性分析。将纯化的重组蛋白免疫小鼠,用ELISA检测其特异性抗体滴度。 结果 成功构建了弓形虫pET-GRA4原核细胞表达系统,其表达产物相对分子质量(Mr)约为 40 000,主要以包涵体形式存在,纯化后的重组蛋白能被人工感染弓形虫RH株速殖子的兔血清识别。免疫小鼠后可诱导产生高滴度的特异性IgG抗体。 结论 利用pET原核细胞表达系统成功表达和纯化了弓形虫GRA4重组蛋白,该蛋白具有一定的免疫学活性。 相似文献
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间日疟原虫MSP1 C端基因亚克隆及在大肠埃希菌中的融合表达 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 在大肠埃希菌中融合表达间日疟原虫MSP1 C端编码基因,以获得能作为检测抗原的重组蛋白GSTPvMSP1 C。方法 以限制性内切酶BamH Ⅰ和Sal Ⅰ双酶切质粒pMD/PvMSP1C,获得间日疟原虫MSP1 C端编码基因片段.柱纯化后,插入表达质粒载体的多克隆位点,构建重组体pGEX-4T-2/PvMSP1C,并转化大肠埃希菌BL21(DE3),阳性克隆以限制性酶切分析鉴定后,以IPTG进行诱导表达,表达产物以SDS-PAGE电泳与免疫印迹分析。结果 双酶切质粒pMD/PvMSP1C,获得1 119bp的PvMSP1 C编码基因片段,与预期片段大小相符;所构建的pGEX-4T-2/PvMSP1C重组体阳性克隆经双酶切鉴定与预期结果一致;SDS-PAGE电泳显示,GST-PvMSP1C融合表达蛋白的大小约63 ku,且能够分别被GST抗体与间日疟患者的血清所识别。结论 成功亚克隆并构建了间日疟原虫MSP1 C端编码基因pGEX-4T-2/PvMsP1C表达质粒,诱导表达了GST-PvMSP1C融合蛋白,表达蛋白具有一定免疫活性。 相似文献
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目的 建立用于分析β珠蛋白基因外显子1及相邻片段突变的变性梯度凝胶电泳(DGGE)技术。方法 应用巢式PCR扩增20例β地贫病人的β珠蛋白基因外显1及相邻片段,通过垂直DGGE及time—travel DGGE确定并优化平行DGGE条件,然后对样本进行平行DGGE分析。结果 20例样本β珠蛋白外显子1及相邻片段上的三种突变均能被检出。结论 所建立PCR—DCGE技术可用于准确检测β珠蛋白基因外显子1及相邻片段突变。 相似文献
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