SLC22A3基因intron7对基因转录的负性调控作用研究

目的：探讨人SLC22A3基因intron7序列及其SNPrs2048327（A/G）位点对基因转录的调控作用。方法：以包含人SLC22A3基因全长序列的细菌人工染色体（bacterial artificial chromosome,BAC）为模板,PCR扩增hSLC22A3 intron7,克隆入荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic和pGL3-Promoter,得到重组质粒pGL3-Basic-SLCi7wt、pGL3-Promoter-SLCi7wt和pGL3-Promoter-SLCi7mut;重组质粒与内参质粒pRL-SV40共转染入人胚肾细胞HEK293T,24 h后检测荧光素酶活性。结果：野生型重组质粒pGL3-Basic-SLCi7wt荧光素酶活性与pGL3-Basic无统计学差异（P=0.986）;野生型重组质粒pGL3-Promoter-SLCi7wt荧光素酶活性（3.514±0.096） 相较于pGL3-Promoter（6.286±0.370）降低（P=0.000）;突变型重组质粒pGL3-Promoter-SLCi7mut荧光素酶活性（2.089±0.332）相对于pGL3-Promoter亦有所下降（P=0.000）,且较野生型重组质粒pGL3-Promoter-SLCi7wt下调（P=0.000）。结论：人SLC22A3基因intron7序列具有负性调节活性,能下调荧光素酶报告基因的表达水平;定位于该序列上的SNP rs2048327（A/G）位点A→G的改变,可能增强该内含子所具有的负性调节作用。