人硫氧还蛋白同ASK1的结合与硫氧还蛋白氨基酸位点的关系

目的:通过对硫氧还蛋白（Trx）突变体与凋亡信号调节激酶-1(ASK1)结合能力的研究,揭示Trx的氨基酸位点与其抗氧化抗凋亡性的关系,进一步阐述Trx在细胞凋亡中的作用。方法: 构建人类野生型Trx（pcDNA-hTrx-His tag,TrxA）和人类Trx 49位突变体(pcDNA-hTrx-Y49F-His tag,TrxB)及ASK1质粒(pCDNA-ASK1-HA tag)。用TrxA、TrxB质粒分别与ASK1质粒共转染入HEK-293A细胞。实验分为对照组(CON)、ASK1质粒转染组、TrxA+ASK1质粒共转染组及TrxB+ASK1质粒共转染组。于转染24 h后,裂解细胞,裂解细胞前20 min加入不同浓度的过氧化氢。将裂解产物进行Western blot检测转染的结果,运用免疫共沉淀（co-immunoprecipitation）法检测ASK1与Trx在过氧化物作用下解离的程度,采用TUNEL法及检测Caspase-3的活性法检测HEK-293A细胞的凋亡。结果: 与ASK1转染组细胞的凋亡指数（73.8±6.93）%及Caspase-3活性[（69.3±3.57）nmol/(h·mg蛋白)］相比,TrxA+ASK1共转染组细胞的凋亡率（49.8±4.62）%明显减少,Caspase-3的活性降低[（51.4±3.61）nmol/(h·mg蛋白)］,（P<0.05）。TrxB+ASK1共转染组的凋亡率（22.4±5.07）%更少,Caspase-3的活性降低更明显[（30.1±2.48）nmol/(h·mg蛋白)］（P<0.01）。与TrxA+ASK1共转染组相比,TrxB+ASK1共转染组的细胞凋亡数及Caspase-3的活性下降更明显（P<0.05）。此外,在过氧化氢干预下,TrxB与ASK1的结合同TrxA与ASK1的结合相比较,前者更紧密。结论: Trx中第49位的酪氨酸突变为苯丙氨酸后,Trx与ASK1的结合能力增强,Trx抗凋亡的作用明显增加。说明Trx与ASK1的结合能力与Trx的氨基酸位点明显相关,进而可影响Trx抗细胞凋亡的能力。     

TXNIP介导的NLRP3炎症小体激活在心肌微血管内皮细胞缺氧/复氧损伤中的作用

目的 研究硫氧还蛋白结合蛋白（TXNIP）介导的NLRP3炎症小体激活在心肌微血管内皮细胞（CMECs）缺氧/复氧（H/R）损伤中的作用。方法 分离培养C57BL/6J小鼠CMECs,随机分为对照组、H/R损伤组、H/R+Scrambled siRNA组和H/R+TXNIP siRNA组。各组处理后使用ELISA试剂盒检测细胞IL-1β水平,采用免疫共沉淀的方法检测TXNIP和NLRP3的相互作用,Western blot检测TXNIP和NLRP3的表达水平,乳酸脱氢酶试剂盒检测细胞培养上清LDH释放情况和细胞Caspase-3活性。结果 与对照组相比,H/R后CMECs的NLRP3表达水平明显升高（P<0.05）,NLRP3炎症小体激活（IL-1β水平升高,P<0.01）,且TXNIP和NLRP3的结合效果明显增强（P<0.01）。运用TXNIP siRNA抑制TXNIP表达后行H/R处理,与H/R+Scrambled siRNA组相比,NLRP3炎症小体激活水平明显下降（IL-1β水平降低）,细胞Caspase-3活力和LDH释放水平均显著降低（均P<0.05）。结论 在CMECs发生H/R损伤时,NLRP3炎症小体激活,TXNIP和NLRP3的相互作用增强;抑制TXNIP表达后,NLRP3炎症小体激活水平降低,内皮损伤减轻。说明TXNIP介导的NLRP3炎症小体激活参与CMECs的H/R损伤,可能成为CMECs的H/R损伤的新机制。     

血红素加氧酶-1基因转染对神经元损伤的保护作用

目的观察腺病毒介导的血红素加氧酶-1（HO—1）基因转染大鼠后对脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法雄性SD大鼠随机分为4组：假手术对照组（SH）、生理盐水组（V）、空载体组（Ad）和Ad—HO-1转染组（HO）。后三组在缺血前3d于右侧脑室部分别注射20μl生理盐水、含1μl空载体腺病毒（1．0×10^10plaque-forming unit／ml,PFU／ml）的生理盐水或含1μl重组HO-1腺病毒（1．0×10^10PFU／ml）的生理盐水,连续注射3d后,采用右侧大脑中动脉栓塞法（MCAO）建立脑缺血再灌注模型。每组大鼠测定神经功能后,处死大鼠并取全脑标本,测定右脑梗死体积及细胞凋亡指标,荧光显微镜下观察脑组织荧光蛋白的表达情况,Western blot检测脑组织HO-1的表达。结果HO组中HO-1表达量明显高于Ad组和V组,Ad组和HO组可见有荧光蛋白表达,转染率为34．5％±3．4％。HO组神经功能显著优于Ad组和V组（P〈0．001）。与SH组比较,V组、Ad组脑梗死体积、神经细胞凋亡明显升高。与V组及Ad组比较,HO组脑梗死体积显著减小（P〈0．01）、神经元凋亡显著减少（P〈0．01）。结论腺病毒携带的HO-1基因能有效的转染脑组织,并在脑内稳定表达;HO-1基因转染显著减轻脑缺血再灌注后神经细胞损伤。     

缺氧前、后处理1-磷酸鞘氨醇对心肌细胞缺氧／复氧损伤拮抗作用的差异及相关机制

目的：探讨1-磷酸鞘氨醇（S1P）缺氧前、后处理对心肌细胞缺氧／复氧（H／R）损伤拮抗作用的差异及相关机制。方法：分离SD乳鼠（1—2d龄）心肌细胞进行体外培养。对培养的心肌细胞进行H／R处理以模拟心脏缺血／再灌注（ischemia／reperfusion,r／R）损伤。将培养的心肌细胞随机分为对照组、H／R组、H／R＋SIP缺氧前处理（H／R’pre—S1P）组及I-I／R＋SIP缺氧后处理（I-I／R＋post—S1P）组,采用四甲基偶氮唑蓝（methylthiazolyltetrazo｜ium。MTT）比色法检测心肌细胞的活力,乳酸脱氢酶（1actatedehydrogenase,LDH）检测试剂盒检测培养基中LDH的水平,caspase-3活性检测试剂盒检测心肌细胞中caspase．3的活性,Westernblot检测ATP激活的蛋白激酶（AMPK）、激活的苏氨酸激酶（Akt）、细胞外信号调节激酶1／2（ERKl／2）蛋白磷酸化水平及SIP裂解酶．1（SIPlyase1,SPLl）蛋白表达的水平。结果：与对照组相比,I-1／R组心肌细胞活力显著降低（P〈0．01）,培养基中LDH的浓度和细胞中easpase-3的活性显著增高（P〈0．01）。S1P缺氧前处理可明显增加H／R处理后心肌细胞的活力（P〈0．01）,减少LDH释放和caspase-3的活性（P〈0．01）;而I-I／R＋post—S1P组的各项指标与H／R组比较均无明显差异。Westernblot检测发现,S1P缺氧前处理可明显增高心肌细胞中AMPK、Akt和ERkl／2磷酸化的水平（P〈0．05）,而SIP缺氧后处理未激活AMPK、Akt和ERKl／2生存信号。Westernblot检测发现,缺氧处理组心肌细胞中SPLl表达的水平较对照组显著升高（P〈0．01）。结论：缺氧前用S1P处理可激活AMPK、Akt、ERKl／2生存信号,显著减少心肌细胞凋亡,增加细胞的存活率,减轻心肌细胞H／R损伤;而S1P缺氧后处理不能发挥以上保护作用,其机制可能是缺氧处理导致心肌细胞SPLl的表达上调,通过降解SIP而减弱了其介导的抗心肌细胞H／R损伤的作用。     

支链氨基酸氨基转移酶1通过P53信号调节脂肪间充质干细胞存活

目的 研究支链氨基酸氨基转移酶1(branched-chain-amino-acid aminotransferase 1,BCAT1)调节间充质干细胞存活的作用并探讨机制。 方法 从雄性Sprague Dawley大鼠附睾白色脂肪中分离脂肪间充质干细胞（adipose-derived mesenchymal stem cells,ADSCs）。腺病毒转染ADSCs中分别过表达或敲低BCAT1表达后给予过氧化氢（hydrogen dioxide,H₂O₂）刺激诱导ADSCs凋亡。利用CCK-8细胞活力分析、cleaved caspase-3表达及TUNEL染色评估ADSCs凋亡。利用P53特异性抑制剂PFT-1α探讨P53信号在BCAT1调节ADSCs生存的分子机制。 结果 BCAT1而不是BCAT2是ADSCs的主要表达亚型。H₂O₂刺激诱导ADSCs凋亡时BCAT1蛋白表达水平显著降低（P<0.01）。使用shRNA敲低BCAT1表达加重而过表达BCAT1显著减轻H₂O₂诱导的ADSCs凋亡（均P<0.01）。敲低BCAT1导致H₂O₂刺激的ADSCs中P53下游靶基因表达水平显著增高,提示P53信号活化（均P<0.01）。PFT-1α可以逆转BCAT1敲低恶化的ADSCs凋亡（均P<0.01）。 结论 BCAT1通过P53信号调节ADSCs生存。BCAT1可作为促进ADSCs存活、增强其心肌保护作用的候选靶点。     

强化他汀治疗对经皮冠状动脉介入术患者冠状动脉无复流及血浆相关因子的影响

目的 研究强化他汀治疗对择期经皮冠状动脉介入术( PCI)患者术中无复流发生率及血浆脂联素( APN)、高敏C反应蛋白(hs-CRP)的影响.方法 84例择期PCI患者随机分为强化他汀组及常规他汀组,强化他汀组患者在术前2天给予阿托伐他汀80 mg/d进行预处理,术后给予阿托伐他汀40 mg/d,1个月.常规他汀组患者术前2天给予阿托伐他汀20 mg/d,术后给予阿托伐他汀20 mg/d,共用1个月.分别检测术前、术后及术后1个月、3个月两组患者的APN、hs-CRP、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)水平;观察术中无复流现象发生率及主要终点.结果 30天内两组患者均未出现重大不良心血管事件,两组患者LDL-C、hs-CRP水平均降低,APN、HDL-C水平均升高.强化他汀组患者LDL-C、hs-CRP水平较常规他汀组明显下降(P＜0.05),APN、HDL-C水平明显升高.强化他汀组患者术中发生无复流现象3例,常规他汀组发生无复流现象6例,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 强化他汀治疗能够降低择期PCI患者血浆炎性因子水平,升高血浆脂联素水平,减少PCI术中无复流的发生率,对择期PCI患者围手术期有很好的疗效和安全性.     

Watchman封堵器左心耳封堵术后器械相关血栓的发生率及临床转归的Meta分析

目的对目前国内外Watchman封堵器置入术后器械相关血栓(DRT)事件发生率及临床转归进行Meta分析。方法利用PubMed、EMbase、中国知网和万方数据库检索1999年12月至2018年12月发表的关于Watchman封堵术后器械相关血栓的国内外研究文献,并按照纳入排除标准对所收集文献进行筛选、资料提取及质量评价后,采用Stata软件进行系统评价。结果经筛选共纳入11篇文献(11项研究,共计4664例患者)。Meta分析结果显示,Watchman封堵术后器械相关血栓发生率为3.0%(95%CI 2%~4%),Watchman封堵器置入术后DRT组患者发生缺血性卒中/短暂性脑缺血发作(TIA)的危险度为3.57(95%CI 2.13~6.00)。结论Watchman封堵术后DRT发生率为3.0%,Watchman封堵术后DRT的发生,增加3.57倍的缺血性卒中/TIA风险。     

低浓度锰焊烟尘对女工肺通气功能影响的测定与分析

近来电焊烟尘对作业工人肺通气功能的影响已有较多报道。但关于低浓度的锰焊烟尘对女工肺功能的改变报道较少。为此我们于2007年9月对某厂61名接触锰作业的女工进行了肺通气功能检查，现将结果报告如下。     

脂联素与冠状动脉慢血流现象的关系

目的 探讨脂联素(APN)与冠状动脉慢血流现象(CSFP)之间的关系.方法 采用校正TIMI帧计数(CTFC)将入选病例分为两组:CSFP组35例及对照组35例.所有患者均于冠脉造影术中肝素抗凝管取血浆5ml,静置离心,-80℃冻存.用酶联免疫吸附法(ELISA)检测APN水平.常规化验血常规、肝、肾功、血脂、血凝全套、空腹血糖、糖化血红蛋白.分析APN与CSFP之间关系.结果 两组基线资料相当,冠脉CSFP组脂联素水平较对照组明显减低.结论 APN水平减低与CSFP密切相关.     

心脏彩超对冠状动脉慢血流患者左室舒张功能的评价

目的 利用脉冲多普勒组织成像技术(DTI)评价冠脉造影正常者及冠状动脉慢血流(CSF)患者左心室功能.方法 采用矫正TIMI帧计数法(CTFC),按CTFC大于冠状动脉正常血流速度的两个标准差诊断为CSF,将入选病例分为两组:CSF组46例及对照组46例.所有患者术前常规行心脏多普勒超声检查,测定其左心室收缩舒张功能指数.结果 CSF组与对照组比较,左室收缩末期内径(LVEDD)、左室舒张末期内径(LVESD)、射血分数(EF)无统计学差异,左室舒张早期的血流峰值速度E峰下降,左室舒张晚期的血流峰值速度A峰升高,E/A比值下降,E/A比值减低患者出现CSF的比例增高(P＜0.05).结论 E/A比值与CSF密切相关,左室舒张功能障碍在CSF组更明显,DTI对评估CSF患者左心室舒张功能有重要的应用价值.