卡氏肺孢子胸腺嘧啶核苷酸合酶基因siRNA表达载体的构建和鉴定

目的:构建和鉴定大鼠卡氏肺孢子(Pneumocystis carinii,PC)胸腺嘧啶核苷酸合酶(Thymidylate synthase,TS)基因的siRNA(Short interfering RNA)表达载体.方法:人工合成针对PC TS基因的1对shRNA(Short hairpin RNA)序列并定向克隆到空载体pTZU6+1上,构建siRNA表达重组质粒pPC-TS,并采用双酶切产物凝胶电泳和基因测序法鉴定.结果:酶切电泳和基因测序鉴定得到的产物与预期的目的基因一致.结论:成功构建卡氏肺孢子胸腺嘧啶核苷酸合酶基因siRNA表达载体.     

Construction and expression of the recombinant plasmid pET32α-Sj26GST of Schistosoma japonicum in Escherichia coli BL21(DE3)

Objective To construct and express the recombinant plasmid pET32α-Sj26GST of Schistosoma japonicum(sj)in Escherichia coli(E.coli)B121(DE3).Methods The total RNA was extracted from sj adult worms by ultrasound-breaking,Sj26GST antigen gene was amplified by RT-PCR from the total RNA,then cloned into prokaryotic expression plasmid pET32α(+) and transformed into E.coli B12(DE3)to construct pET32α-Sj26GST;BL21(pET32α-Sj26GST)WaS induced with isopropyl-β-D-thiogalactopyranosid(IPTG),and the expressed products were analyzed and identified by SDS-PAGE and Western blot.Results The 676 bp Sj26GST gene was successfully amplified by RT-PCR and cloned into pET32α(+)by restriction analysis and PCR identification,the recombinant plasmid pET32α-Sj26GST was successfully constructed;the relative molecular mass of the expressed recombinant protein was approximately 49×103 by SDS-PAGE,and the amount of the expressed protein was 24%of the total bacterial proteins;the fusion protein could be recognized by sera from rabbits infected with sj by Western blot.Conclusions The recombinant plasmid pET32α-Sj26GST is successfully constructed and highly expressed in E.coli in fused form with Trx-tag and His-tag,and the expressed fusion protein shows specific antigenicity.     

肝吸虫病患者血清TNF—α及IL—1β及NO水平检测

收集20例肝吸虫病患者和健康志愿者血清，用试剂盒分别检测血清TNF－α，IL-1β和NO水平，结果显示肝吸虫病患者血清TNF－α，IL-1β和NO水平显著升高，说明TNF－α，IL－1β和NO可能在宿主杀伤华支睾吸虫和加重肝胆管炎症方面起重要作用。     

恶性疟原虫裂殖子表面抗原2基因片段的克隆及表达

目的构建恶性疟原虫海南分离株(FCC-1/HN)裂殖子表面抗原2(MSA2)基因片段的重组真核表达质粒pBK/MSA2.方法采用限制性内切酶法从重组的大肠杆菌-分枝杆菌穿梭质粒pBCG/MSA2中分离出经过测序鉴定的MSA2基因片段,将其亚克隆入真核表达载体pBK-CMV,构建重组真核表达质粒pBK/MSA2.经IPTG诱导,重组质粒在大肠杆菌DH5a中进行表达,并进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及免疫印迹(Western-blot)分析.结果从pBCG/MSA2中分离出MSA2基因片段,成功构建pBK/MSA2重组质粒;SDS-PAGE及Western-blot分析结果显示,特异性蛋白条带的分子质量约为31 ku.结论恶性疟原虫MSA2可在大肠杆菌中成功表达.     

青蒿素衍生物抗卡氏肺孢子虫体外作用的研究

目的 研究不同浓度青蒿素衍生物双氢青蒿素、青蒿琥酯对体外培养卡氏肺泡子虫的作用。方法 接种卡氏肺孢子虫（Pc）于人肝癌细胞系（HepG-2)。4h加入试验药物和对照试剂。双氢青蒿素药物浓度分别为：100、50、10、5、0．5μmol/L;青蒿琥酯药物浓度分别为：100、50、10、5μmol/L;对照药喷他脒：15μmol/L。以后每隔1d取培养液观察,分别作六亚甲基四胺银（GMS）和Diff-Quik(DQ)染色计数Pc包囊和滋养体数目。结果 Pc滋养体和包囊在体外培养细胞上的生长高峰出现于第5d,双氢青蒿素浓度为50μmol／L和100μmol／L时对Pc滋养 的抑制率分别为88．0％与90．1％,与喷他脒15μmol/L的抑制率90．0％相当;而青蒿琥酯浓度为100μmol/L时方可达到Pc滋养体抑制率83．4％。Pc包囊抑制率,双氢青蒿素和青蒿琥酯浓度为100μmol/L分别为67．5％和67．3％,与喷他脒的抑制率75．0％之间无统计学差异。结论 双氢青蒿素和青蒿琥酯在一定浓度时67．3％,对Pc的抑制作用与喷他脒相当;而双氢青蒿素的抑制作用略高于青蒿琥酯。两者对Pc滋养体的抑制率均高于对Pc包囊。     

肺孢子虫分类学的研究进展──虫株的抗原差异及遗传基础

肺孢子虫分类学的研究进展Ｉ．虫株的抗原差异及遗传基础寄生虫学教研室叶彬综述传染病寄生虫病研究所陈雅棠审校中图分类号Ｒ３８２．３卡氏肺孢子虫（Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓｃａｒｉｎｉｉ．Ｐｃ）的分类地位一直存在争议,以往的研究认为它是原虫,然而８０年代后的...     

双氢青蒿素治疗实验大鼠卡氏肺孢子虫肺炎的疗效观察

目的：研究双氢青蒿素治疗实验大鼠卡氏肺孢子虫肺炎的疗效。方法：Wistar大鼠皮下注射醋酸可的松建立卡氏肺孢子虫肺炎动物模型。用双氰青蒿素治疗实验大鼠同时设有感染组和正常组作为对照。通过存活数、存活率、肺重、肺重／体重比、包囊计数和肺组织病理学变化考核药物疗效。结果：治疗组大鼠存活数、存活率均高于感染组,而低于正常组;治疗组大鼠平均肺重、平均肺重／体重比和包囊数均低于感染组,肺组织炎症反应明显减轻。结论：双氢青蒿素是一种治疗大鼠卡氏肺孢子虫肺炎的有效药物。     

肺孢子虫病实验与临床研究 Ⅱ.免疫印迹试验检测…

采用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析鼠源卡氏肺孢子虫包囊可溶性抗原呈现２０条以上多肽区带，主带分子量分别为＞１００、８５－９４、６７、５２和３４ｋＤａ。ＥＩＴＢ检测表明重庆地区健康人血清中存在识别１１０、１０５、８５、６７、５２和４６ｋＤａ的ＩｇＧ型抗体，抗体阳性率为５６．７％（５９／１０４）。其中８５ｋＤａ抗原能与抗人源肺孢子虫单克隆抗体２Ｇ２起反应。健康人血清抗８５ｋＤａ抗原的抗体阳性率为３７．５％（３９     

恶性疟BCG多价疫苗及DNA疫苗的实验研制

本项目在恶性疟疫苗候选分子裂殖子表面蛋白-2（MSA2）及环子孢子蛋白（CSP）的分子生物学特征和免疫原性研究的基础上,构建了CSP、MSA2之DNA疫苗,同时率先在国内外构建CSP、MSA2之重组BCG活疫苗,并对疫苗的免疫保护机制、免疫应答及疫苗     

卷首语

当读者朋友读到这期《重庆医学》杂志时 ,历史已经又翻开了新的一页。令人难忘的二十一世纪第一年— 2 0 0 1年已经和我们告别 ,我们怀着对未来的美好向往迎来了新的一年。在此我谨代表新一届编委向始终关心、爱护、帮助《重庆医学》的广大读者和作者朋友们表示诚挚的谢意和良好的祝愿 !《重庆医学》自从 1972年创刊以来 ,从一本地方性刊物逐步发展成为有一定影响、全国发行的综合性医学期刊 ,从不定期出版、季刊到双月刊 ,从编辑不够规范到进入中国科技论文统计源期刊、中国临床医学类核心期刊和中国引文数据库来源期刊 ,其中浸透着我市几…