凋亡相关蛋白TFAR19在老年性白内障晶状体上皮细胞中的表达与定位

目的 探讨凋亡相关蛋白TFAR19在老年性白内障晶状体上皮细胞中的表达。方法 以TFAR19蛋白的单克隆抗体为工具，利用过氧化酶标定的链霉卵白素染色试剂盒对老年性白内障晶状体上皮细胞行免疫组化染色，观察TFAR19蛋白在晶状体上皮细胞中的表达及定位。结果 发现正常人晶状体上皮细胞中有TFAR19蛋白低水平的表达，老年性白内障晶状体上皮细胞中有3种高表达的细胞；一种为少部分细胞呈胞浆高表达，胞核不表达；另一种为偶见胞核，胞浆均高表达；第3种为凋亡晚期的细胞仅在凋亡小体上有表达。结论 老年性白内障晶状体上皮细胞中有凋亡相关蛋白TFAR19的特征性表达，该结果对进一步揭示细胞凋亡是否参与白内障的发病有着重要意义。     

eEF1A1基因敲除对Jurkat细胞增殖和凋亡的影响及其机制探讨

本研究旨在探讨真核翻译延长因子1A1(eEF1A1)表达沉默对人急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)细胞株Jurkat增殖、凋亡的影响及其作用机制。应用实时PCR法和Western blot法分别检测Jurkat细胞和3例健康成人外周血单个核细胞(PBMNC)中eEF1A1 mRNA和蛋白的表达。构建eEF1A1-shRNA慢病毒并感染Jurkat细胞,另设空白和阴性对照组,应用实时PCR法和Western blot法分别检测细胞eEF1A1 mRNA和蛋白的表达;应用MTT法、AnnexinⅤ-APC标记法、DNA倍体法分别检测细胞增殖、细胞凋亡、细胞周期,Western blot法检测细胞PI3K/Akt信号通路相关信号分子的表达。结果表明,Jurkat细胞eEF1A1 mRNA和蛋白的表达水平明显高于健康成人PBMNC中的表达(P<0.01,P<0.05);构建的eEF1A1-shRNA慢病毒高效沉默Jurkat细胞eEF1A1的表达。与阴性对照组相比,eEF1A1-shRNA组Jurkat细胞增殖能力明显下降,凋亡明显增多,细胞周期被阻滞于G0/G1期,p-Akt、NF-κB、p-NF-κB、mTOR、p-mTOR蛋白的表达明显下调。结论:eEF1A1在T-ALL细胞中可能具有潜在的致癌作用,其表达沉默可有效抑制Jurkat细胞的增殖并诱导凋亡,其机制可能与下调PI3K/Akt/NF-κB和PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。     

表达γ/δ受体的T淋巴细胞能特异地识别HLA-Ⅰ类抗原多态性决定簇

人类存在两种主要形式的TCRγ/δ,第一种是由Cr_1基因片段编码的γ链,由二硫键与δ链相连;第二种是由Cr_2基因编码的γ链,以非二硫键与δ链连接成异二聚体。本文作者用两种不同类型TCRγ/δ的特异性单克隆抗体(BB_3和δ-Tcs-1单抗)检测结果     

应用小儿头皮针进行小儿胸骨骨髓穿刺36例

[背景 ]探讨小儿行胸骨骨髓穿刺时用头皮针代替传统骨髓穿刺针的优点 .[病例报告 ]用头皮针从 36例小儿胸骨中获取骨髓液 .[讨论 ]用头皮针行小儿胸骨骨髓穿刺的方法简单、安全、成功率高 .     

体外受精-胚胎移植中颗粒细胞凋亡与妊娠率

目的探讨体外受精-胚胎移植中卵泡颗粒细胞凋亡与妊娠率的关系。方法随机选择体外受精-胚胎移植中60例患者,收集其颗粒细胞,采用流式细胞技术检测颗粒细胞亚二倍体的含量和PDCD5的荧光密度;颗粒细胞免疫组化检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、PDCD5的表达。比较妊娠组和非妊娠组年龄、基础FSH值、促性腺激素的用量、取卵总数、受精率、妊娠率和颗粒细胞亚二倍体细胞的百分率、颗粒细胞PDCD5荧光密度、颗粒细胞Bcl-2、Bax、PDCD5蛋白表达的积分光密度值。结果妊娠组和非妊娠组年龄、基础FSH值、促超排卵FSH的用量、取卵数、受精率及免疫组化Bax积分光密度比较,差异无显著性(P>0.05),颗粒细胞亚二倍体百分率、颗粒细胞PDCD5荧光密度、PDCD5蛋白表达的积分光密度值妊娠组低于非妊娠组,颗粒细胞Bcl-2表达的积分光密值妊娠组高于非妊娠组,差异有显著性(P<0.05)。结论体外受精-胚胎移植中卵泡中颗粒细胞凋亡与妊娠率有关,凋亡率高,妊娠率低。     

体外受精-胚胎移植中多囊卵巢综合征颗粒细胞凋亡与妊娠结局关系的探讨

目的探讨体外受精-胚胎移植中多囊卵巢综合征（PCOS）患者颗粒细胞凋亡与妊娠结局的关系。方法选择2004年2月至6月在北京大学第三医院体外受精-胚胎移植患者,其中PCOS组30例、对照组30例,收集其颗粒细胞,采用流式细胞技术,检测颗粒细胞亚二倍体的含量及凋亡相关蛋白PDCD5单克隆抗体免疫荧光密度;免疫组化法检测凋亡相关蛋白PDCD5、Bcl-2、Bax在颗粒细胞中的表达情况;同时将两组相应的临床指标进行比较。结果两组年龄、基础卵泡刺激素（FSH）、FSH的用量、大中卵泡数、受精率、优质胚胎率和妊娠率比较差异无显著性意义（P〉0.05）。而PCOS组取卵总数、小卵泡数、HCG日雌二醇水平及颗粒细胞亚二倍体率、PD-CD5荧光密度、免疫组化PDCD5的积分光密度（IOD）值明显增高,免疫组化Bcl-2的IOD值降低,与对照组比较差异有显著性意义（P〈0.05）。PCOS组及对照组的妊娠组颗粒细胞亚二倍体数降低、PDCD5荧光密度降低、免疫组化Bcl-2的IOD值增高,PDCD5的IOD值降低,两组中的妊娠组与非妊娠组比较差异有显著性意义（P〈0.05）。结论PCOS患者颗粒细胞凋亡明显增加,颗粒细胞凋亡增加妊娠率降低。     

新型反义寡核苷酸F951对HL60细胞Bcl-2基因表达及细胞增殖的抑制作用

目的　研究新型反义寡核苷酸F951对白血病细胞Bcl- 2基因表达及细胞增殖的影响。方法　不同浓度的F951与HL60细胞共培养后,采用台盼蓝拒染法、MTT比色法检测HL60细胞增殖,用流式细胞术和RT -PCR法检测Bcl- 2蛋白及其mRNA表达,DNA片段化分析法检测凋亡细胞。结果　5, 10, 20μmol·L-1F951分别与HL60细胞共孵育1~5d,细胞生长明显受抑,这一抑制作用随F951浓度的升高和作用时间的延长而增强。MTTA值与未处理组相比F951 5, 10, 20μmol·L-1组细胞抑制率分别为: 20 .56%、37 .66%、54 .11%与对照组相比差异均有显著性;F951处理后HL60细胞Bcl 2mRNA水平下降,Bcl- 2蛋白减少;凝胶电泳可见典型的梯形带,且随着浓度提高诱导DNALadder的作用更加明显。结论　F951可下调Bcl -2基因表达,促进细胞凋亡而抑制白血病细胞增殖。     

FITC标记单克隆抗体检测icIL-1ra的方法研究

目的 建立用单克隆抗体技术检测细胞IL-1ra的方法。方法 制备异硫氰酸荧光素(FITC)标记的抗人IL-1ra单克隆抗体，使其进入U937细胞内与icIL-1ra结合，然后用流式细胞仪(FACS)检测荧光强度，并比较U937细胞在刺激前后荧光强度的变化情况是否与icIL-1ra表达的变化情况相一致。结果 在一定剂量范围内，经PMA分化和LPS刺激的U937细胞的icIL-1ra表达量增加，其检测荧光强度相应增加。结论 用单克隆抗体检测细胞内icIL-1ra是一种快速、准确的方法，本实验方法能够满足实际研究工作中对icIL-1ra定量检测的要求。     

PHA对人扁桃体T淋巴细胞亚群变化及活化抗原表达的效应

应用FITC和PE双色荧光试剂并经流式细胞计分析了人扁桃腺T淋巴细胞亚群组成,以及用PHA刺激后T淋巴细胞亚群的变化和活化抗原的表达情况。结果表明:1)人扁桃体T淋巴细胞以CD4~+细胞占优势,CD4~+与CD8~+细胞比值约为5.32±0.55;2),经PHA刺激培养72小时,CD4~+CD8~+细胞明显增加;3)经PHA刺激培养后,IL-2受体(CD25)和HLA-DR抗原表达增加。本实验结果为深入研究人扁桃体T淋巴细胞的表型变化提供了客观指标,对进一步探讨其在免疫系统中的作用具有一定的意义。