FITC标记微量抗TCRrδ单抗及应用

<正> 在人外周血淋巴细胞中,有一少部分TCRrδ+T细胞的存在。由于其数量少,用间接免疫荧光法检测时,会出现非特异性阳性细胞增多,造成实验数据误差。为此,我们成功地用FITC直接标记微量抗TCRrδ+单抗(抗-TCRδ_1,美国T细胞科学公司赠送),用直接免疫荧光法检测此类细胞。 取纯化的抗-TCRδ_1IgG1mg,转入2ml体积     

鼠抗人CMTM7单克隆抗体的制备和鉴定

目的:制备鼠抗人CMTM7(CKLF-like MARVEL transmembrane domain containing 7)蛋白的单克隆抗体,探讨CMTM7蛋白的分子结构和生物学功能.方法:通过生物信息学对CMTM7的蛋白序列进行分析,选取了3段序列合成多肽并与钥孔戚血蓝素(keyhole limpet hemocyanin, KLH)偶联,混合后免疫Balb/c小鼠.取免疫小鼠的脾细胞和同系小鼠的骨髓瘤细胞SP2/0进行常规融合,间接ELISA方法进行筛选和有限稀释克隆化,获得鼠抗CMTM7蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,用Western blot、免疫荧光以及免疫细胞化学等方法对其特性进行鉴定.结果:成功地建立了2株稳定分泌抗CMTM7蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为MC9和2C9,其免疫球蛋白亚类均为IgG1.MC9单抗识别的抗原表位位于CMTM7氨基酸残基163～175区域(CMTM7_163-175),可用于Western blot、免疫荧光和免疫细胞化学分析(immunocytochemistry, ICC).2C9单抗识别的抗原表位位于CMTM7氨基酸残基19～44区域(CMTM7_19-44),该单抗只能用于Western blot分析.初步的功能研究提示,CMTM7蛋白在植物血凝素(phytohemagglutinin, PHA)活化早期的外周血淋巴细胞中表达上调.结论:获得了特异性好、能够识别不同抗原表位以及不同用途的鼠抗人CMTM7蛋白的单克隆抗体,为研究CMTM7蛋白的分子结构以及功能特性奠定了基础.     

人LC3蛋白在大肠杆菌中的表达纯化及其抗体的制备与鉴定

目的:制备兔抗人LC3的多克隆抗体,为细胞自噬的研究提供有用的检测工具。方法:构建pET32a(+)LC3的原核细胞表达载体并进行序列鉴定,大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达LC3蛋白,SP-Sepharose XL柱纯化;纯化的人LC3蛋白免疫兔制备抗血清,通过LC3蛋白偶联的Sepharose 4B(LC3-Sepharose 4B)亲和层析纯化兔抗人LC3的多克隆抗体,以间接ELISA和Western blot鉴定其特异性。结果:成功实现了LC3蛋白在大肠杆菌中的高效表达和纯化,并用质谱分析证明表达蛋白相对分子质量(Mr)为15 500。制备的兔抗人LC3多克隆抗体具有很高的特异性,与大肠杆菌成分无交叉反应。Western blot能够特异检测自噬过程中LC3Ⅰ型和Ⅱ型蛋白,观察到自噬发生时LC3Ⅰ向LC3Ⅱ的转化。结论:获得了重组人LC3蛋白,成功地制备了该分子的特异性多克隆抗体,为细胞自噬的检测提供了有用的探针。     

延边地区农村儿童少年体型发育特点

目的：探讨我国农村儿童少年,尤其是朝鲜族儿童体型发育特点与规律。方法：应用Ｈｅａｔｈ－Ｃａｒｔｅｒ体型法,对延边地区农村７～１５岁汉族、朝鲜族儿童少年共３１１１人的体型发育进行了描述性比较分析。结果：汉族男孩在内因子、女孩的外因子、朝鲜族男、女孩在中因子方面各占优势;男孩大多属中、外胚层体型;两民族儿童在体型图上各有不同的分布规律。结论：汉族男孩体脂发育较好,女孩身材修长;朝鲜族儿童身材较短矮但体     

bcr-abl融合基因反义寡核苷酸对K562细胞生长的影响

目的: 研究bcr-abl融合基因硫代磷酸反义寡核苷酸(Aspo)对K562细胞生长特性的影响,探讨其在慢性粒细胞白血病(CML)基因治疗中的意义。方法:倒置显微镜下细胞活体观察;Aspo与细胞共同培养24 h、48 h、72 h、96 h及120 h,用0.4％台盼蓝染色计各处理组死活细胞数,甲基纤维素半固体培养法观察其克隆形成率的变化,流式细胞仪测定各处理组细胞P210蛋白表达变化。结果:Aspo处理后细胞仍呈克隆状生长,当Aspo浓度达5μmol/L时,即可产生增殖抑制作用,呈一定的量效关系,其最大抑制效应时间为作用120 h,当Aspo达10μmol/L时,在一定细胞浓度范围内(1×10⁴ /mL~5×10⁵/mL),均有显著抑制作用,当Aspo浓度达5μmol/L以上时,K562细胞P210蛋白表达明显下降甚至不表达。b2a2型Aspo对表达b3a2型mRNA的K562细胞也表现出交叉抑制作用。结论:bcr-abl融合基因反义寡核苷酸对K562细胞具有特异性增殖抑制作用,在慢性粒细胞白血病基因治疗中值得深入研究。     

恶性血液病细胞WT1基因表达及其临床预后相关性研究

近年来不少学者发现 WT1基因在白血病中存在高表达 [1 - 3 ] ,但其作用机理尚不清楚 ,与白血病的预后关系也有争论[4,5 ] 。我们用逆转录多聚酶链反应 (RT- PCR)检测了多种白血病细胞系和淋巴瘤细胞 ,以及 15 2例造血系统恶性疾病患者WT1m RNA表达情况 ,探讨其临床意义。1　研究对象与方法1.1　细胞系　 K5 6 2 (慢性粒细胞白血病急性红白血病变 )、HL- 6 0 (急性髓系白血病 )、HEL(急性红白血病 )、DAMI(急性巨核细胞白血病 )、H9(T细胞淋巴瘤 )及 U937(组织细胞型淋巴瘤 )。1.2　病例组　收集本院 1995～ 1998年住院的造血系统…     

妊高征患者血清白细胞介素-8变化的研究

妊高征患者血清白细胞介素－８变化的研究张英姿陈英玉荣抗美姜秀清李法升（滨州医学院妇产科学教研室）白细胞介素－８（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－８，ＩＬ－８）是由单核巨噬细胞及内皮细胞产生的一种炎症细胞因子（ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｃｅｌｆａｃｔｏｒ），在机...     

腮腺细胞程序性死亡分子5的表达及其与细胞凋亡关系的动物实验

目的 探讨大鼠腮腺主导管结扎后细胞程序性死亡分子5(programmed cell death5,PDCD5)的表达及其与腮腺细胞凋亡的关系,以期了解PDCD5在腮腺萎缩中的作用.方法 对66只Wistar大鼠建立腮腺主导管结扎动物模型,分别在结扎0、1、3、5、7、14、21、30、60、90和120 d(每个时间点6只大鼠)获取腮腺标本,免疫组化法检测腮腺细胞中PDCD5的表达,脱氧核糖核酸末端转移酶介导的原位缺口末端标记法检测腮腺细胞的凋亡.结果 PDCD5蛋白在正常的腺泡细胞和导管细胞中呈低水平表达,均匀分布于胞质.腮腺主导管结扎后,PDCD蛋白的表达水平显著上调,在结扎后3d腺泡细胞中PDCD5的吸光度值达峰值(1.261±0.048),胞质和胞核中均有表达.在结扎后1、3d,腺泡细胞中PDCD5的吸光度值均显著高于导管细胞,二者差异有统计学意义(P＜0.01).细胞凋亡检测结果显示,结扎后3d腮腺细胞凋亡指数显著增高,腺泡细胞凋亡指数[(21.750±0.119)％]显著高于导管细胞[(5.720±0.205)％],二者差异有统计学意义(P＜0.01).PDCD5蛋白的表达水平与腮腺主导管结扎诱导的细胞凋亡呈显著正相关(r=1,P=0.003).结论 大鼠腮腺主导管结扎后PDCD5的表达与腮腺萎缩过程密切相关,PDCD5在腮腺结扎后的细胞凋亡途径中可能发挥重要作用.     

学习障碍儿童父母教育子女方式问题调查分析

[目的]调查分析学习障碍儿童的父母教育子女方式的特点.[方法]选取子女教育心理控制源量表(PLOC)分别对53名学习障碍儿童和53名正常儿童的父母(对照组)进行评定.[结果]学习障碍儿童的父母在教育成效、父母的责任、父母对命运或机遇的信念及父母对子女行为控制的评分明显高于对照组.[结论]学习障碍儿童的父母在教育子女方式上存在问题.     

PDCD5 Correlates with Disease Activity and IL-17 in Rheumatoid Arthritis

Background Programmed cell death 5 (PDCD5) is a novel apoptotic regulatory gene, which has a promoting effect on apoptosis of various tumor cells. Studies showed that PDCD5 accelerates the apoptosis of synoviocytes in vitro, implying its potential role in the pathogenesis of rheumatoid arthritis (RA). The objective of this study was to examine the expression of PDCD5 in serum and synovial fluid of RA and to determine its effect on the expression of inflammatory cytokine, interleukin-17 (IL-17), as well as the assessment of disease activity in RA. Methods PDCD5 and IL-17 levels in serum and synovial fluid from 18 RA patients and 22 Osteoarthritis (OA) patients were detected by ELISA. The concentrations of serum PDCD5 in 40 healthy people were also detected as control. As disease activity indices, C-reactive protein (CRP), erythrocyte sedimentation rate (ESR), rheumatoid factor (RF), and X-ray grading scale were also evaluated. Results The serum and synovial fluid PDCD5 levels in RA patients were significantly higher than those in OA and healthy controls. The serum PDCD5 level was inversely correlated with CRP and ESR. Further, serum PDCD5 level in RF negative group was significantly higher than that in positive group. In addition, PDCD5 level had a negative correlation with IL-17 level both in serum and synovial fluid of RA patients. However, the differences of synovial fluid PDCD5 level in RA patients with different Larsen stages were not detectable. Conclusions These results suggest that PDCD5 might play a role in the pathogenesis of RA. Insufficient apoptosis of FLS and inflammatory cells in RA could possibly cause the increased expression of PDCD5 protein. Meanwhile, PDCD5 level correlated negatively with disease activity indices and IL-17 level, implying it as a potential target in the diagnosis and treatment of RA.