大黄素抑制HL-60/ADR耐药细胞增殖和诱导凋亡的作用

本研究探讨中药大黄素(emodin)对人白血病耐药细胞株HL-60/ADR的增殖、凋亡影响及其相应的可能作用机制。采用MTT法绘制细胞生长曲线;集落培养法观察大黄素对HL-60/ADR克隆形成的影响;细胞周期分析、线粒体跨膜电位检测、Caspase-3酶活性检测、Annexin V FITC/PI法、TdT酶介导的原位缺口末端标记法(TUNEL)分析凋亡细胞;RT-PCR及Western blot法检测大黄素作用后不同时间段bcl-2、c-myc mRNA及Bcl-2、c-Myc、Caspase-3前体蛋白表达水平的变化。结果表明,大黄素对HL-60/ADR细胞增殖具有明显的抑制作用,呈时间和浓度依赖性。较低浓度大黄素即可抑制HL-60/ADR细胞集落形成,IC50值为5.79μmol/L。细胞周期分析显示,与对照组比较,40、80μmol/L浓度组细胞被阻滞于G0/G1期比率明显增高(p<0.01),G2/M期细胞比率降低(p<0.01),而20μmol/L浓度组细胞周期改变差异不具有显著性(p>0.05),各浓度组均检测到典型的亚二倍体峰(凋亡峰)。大黄素作用12小时HL-60/ADR细胞线粒体跨膜电位降低,Annexin V FITC/PI法检测到早期凋亡细胞,作用24小时caspase-3酶活性显著升高,作用48小时TUNEL法检测到晚期凋亡细胞,细胞凋亡率呈药物浓度依赖性。大黄素作用HL-60/ADR细胞不同时间段,bcl-2、c-myc mRNA和Bcl-2、c-Myc、Caspase-3前体蛋白表达水平均有不同程度下调,并呈时间依赖性。结论:大黄素能够有效抑制HL-60/ADR细胞增殖,并诱导其凋亡,bcl-2、c-myc表达水平下调,线粒体跨膜电位水平降低和caspase-3激活可能参与了该过程。     

一次性头皮针管在婴幼儿水合氯醛灌肠中的应用

目的:采用一次性头皮针管水合氯醛保留灌肠与常规方法水合氯醛保留灌肠效果比较。方法:将120例灌肠婴儿随机分两组,观察组60例,采用一次性头皮针管水合氯醛保留灌肠,对照组采用常规方法。结果:观察组与对照组在起效及维持时间比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论:应用一次性头皮针管行水合氯醛保留灌肠效果优于常规法灌肠。     

促凋亡基因PDCD5 在新疆哈萨克族与汉族食管癌中的表达及临床意义*

目的:探讨新疆哈萨克族与汉族食管鳞癌组织中PDCD5 mRNA 的表达及其临床意义。方法:以PDCD5 mRNA 为靶基因运用RT-PCR 法检测40例食管鳞癌患者中PDCD5 mRNA 的表达（哈萨克族18例、汉族22例）。 结果:40例食管鳞癌患者癌组织、癌旁组织、正常组织中PDCD5 mRNA 表达阳性率为80.0% 、80.0% 、87.5% ,差异均无统计学意义（P>0.05）。 半定量光密度计数后PDCD5 mRNA 表达量在食管鳞癌患者癌组织、癌旁组织、正常组织中分别为0.764 4 ± 0.144 4、0.934 1 ± 0.163 1 和1.870 3 ±0.476 7,其表达在癌组织与正常组织中差异有统计学意义（P<0.05）。 PDCD5 mRNA 的表达与分化程度有无淋巴结转移均无相关性。结论:PDCD5 mRNA 的表达在不同民族之间无显著性差异。PDCD5 mRNA 的表达与食管癌的发生、发展、远处转移和细胞分化程度均无密切相关性,可以通过增加例数对其关联性进行深入研究;PDCD5 mRNA 在食管癌患者癌组织中的表达量低于正常组织,本研究可能对食管癌的治疗提供理论依据。      

小鼠抗人磷脂酰肌醇3激酶相互作用蛋白1单克隆抗体的制备和鉴定

目的:制备鼠抗人磷脂酰肌醇3激酶相互作用蛋白1(PIK3IP1)的单克隆抗体(mAb),探讨PIK3IP1蛋白的结构和功能.方法:利用重组蛋白GST-PIK3IP162-168为免疫原,免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞和同系小鼠的骨髓瘤细胞Sp2/0进行常规融合,通过间接ELISA的筛选和有限稀释克隆化,获得鼠抗人PIK3IP1蛋白mAb的杂交瘤细胞株,通过ELBA,Western blot和免疫荧光技术等方法对其特性进行鉴定.结果:成功地建立了1株稳定分泌抗PIK3IP1蛋白的mAb杂交瘤细胞株,命名为5C6,其免疫球蛋白亚类为IgG1.ELISA检测的腹水效价可达1:107.5C5 mAb与重组GST-PIK3IP162-168蛋白有较强的特异性反应,而与大肠杆菌裂解液以及谷胱苷肽2S转移酶(GST)没有交叉反应.同时,5C6 mAb也能特异性地结合真核细胞超表达的全长PIK3IP1蛋白和变异体PIK3IP1-v1,但检测不到内源性的PIK3IP1蛋白.共聚焦免疫荧光显微镜结果显示PIK3IP1和PIK3IP1-v1定位于胞质,在胞质中呈现不均一的斑点状分布.结论:获得了效价高、特异性好的PIK3IP1蛋白的mAb,为进一步研究PIK3IP1的生物学功能提供了有用的工具.     

大黄素对Jurkat细胞凋亡的诱导作用及其机制的初步研究

本研究探讨中药大黄素（emodin）对T淋巴细胞白血病Jurkat细胞株增殖、凋亡的影响及其作用机制。应用MTT法检测细胞增殖能力;DNA片段化检测和末端缺口原位标记（TUNEL）法分析细胞凋亡;蛋白印迹法（Western blot）检测BCL-2、C—MYC、hTERT、caspase蛋白前体procaspase-8、procaspase-9、procaspase-3和caspase-3剪切片段以及PARP等蛋白的表达水平。结果表明：大黄素能明显抑制Jurkat细胞增殖,对Jurkat细胞的半数抑制浓度（IC50）约为20μmol／L。DNA片段化的检出及TUNEL凋亡细胞的检出证实了大黄素能有效诱导Jurkat细胞凋亡,细胞凋亡率在一定的药物浓度范围内（0—80μmol／L）与药物作用浓度和作用时间呈正相关。Western blot检测结果显示,BCL-2、C—MYC和hTERT蛋白在大黄素作用后表达水平下降,caspase家族的蛋白前体procaspase-3、8、9表达均下降,而激活后的活性片段caspase-3则表达上调。结论：大黄素能有效抑制Jurkat细胞增殖,诱导其凋亡。其机制可能与下调BCL-2、C—MYC、hTERT等凋亡相关蛋白表达,激活caspase家族特别是caspase-3活性片段蛋白表达有关。     

bcl-2、IL-6、IL-6R反义寡脱氧核苷酸对小细胞肺癌细胞作用的比较

目的: 探讨一种新型抗ATPase F1α抗体,人血管抑制和肿瘤转移相关蛋白（human angiostatin interacting and tumor metastasis involving protein,HAITMIP）抗体MAb3D5AB1（简称GX）对A549肺腺癌小鼠移植瘤的抑制作用。 方法：在C57BL/6小鼠右前腋窝接种A549肺腺癌细胞,制备小鼠荷瘤模型,32只荷瘤小鼠随机分为对照组（无任何处理）及A、B、C治疗组（分别腹腔注射125、250、500 ng/ml GX）。观察各组移植瘤小鼠肿瘤体积、生长延迟时间（tumor growth delay, TGD）及小鼠生存期。免疫组织化学法检测瘤组织内微血管密度。TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡。结果：成功建立了荷A549肺癌小鼠模型,治疗组小鼠移植瘤的体积明显减小（P<0.05）、TGD随GX剂量增加而显著延长（P<0.01）、瘤组织内微血管密度明显减少（P<0.05）,TUNEL法检测发现各治疗组瘤细胞凋亡率均显著高于对照组（均P<0.01）。结论：GX可以抑制肿瘤新生血管生成,促进肿瘤细胞调亡,使A549肺腺癌小鼠移植瘤生长减慢,并延长小鼠生存期。     

人TFAR19的定点突变及其重组蛋白的表达、纯化和功能分析

目的:了解凋亡相关新基因TFAR19编码蛋白分子中潜在的Ser100磷酸化位点与其促凋亡效应的关系.方法:利用重叠延伸PCR定点突变技术构建TFAR19 Ser100→Ala100突变体,用DNA测序技术验证,大肠杆菌表达,离子交换技术纯化重组突变蛋白,将其加入培养的白血病细胞株HL-60,通过PI染色,流式细胞仪分析,观察突变重组蛋白的促凋亡效应.结果:构建成TFAR19 Ala100突变体,并经DNA测序所证实,在大肠杆菌中获得了高水平表达,Western blot表明突变型重组蛋白与野生型具有相同的免疫学活性,流式细胞仪分析发现突变蛋白对撤除血清的HL-60细胞具有与野生蛋白相似的剂量依赖性促凋亡效应. 结论:TFAR19 分子中潜在的Ser100磷酸化位点对其促凋亡效应无影响,提示TFAR19发挥其生物学活性时无需cAMP和cGMP依赖的蛋白激酶活化.     

中波紫外线诱导HaCaT细胞凋亡中TF-1细胞凋亡相关基因19的表达

目的：研究在中波紫外线(UVB）诱导正常永生化角质形成细胞(HaCaT）凋亡过程中，T细胞凋亡相关基因19(TFAR 19）的表达时相及位置，方法：使用流式细胞仪、膜联蛋白V(Annexin—V）、激光扫描共聚焦显微镜等方法进行研究。结果：在凋亡过程中，TFAR 19逐渐向核周聚积，最后向核膜内移位，在核膜及其周围以及核内表达。结论：在UVB诱导HaCaT细胞凋亡的早期和晚期过程中TFAR 19均有表达。     

TFAR19蛋白在系统性红斑狼疮患者血清中水平的检测

系统性红斑狼疮 (systemiclupuserythematosus,SLE)发病机制复杂 ,至今其病因不清 ,近年来对于凋亡及基因的研究较热。在SLE患者的外周血和皮损中 ,存在着凋亡细胞增多的情况[1 4] ,而且有一些凋亡相关基因表达增多并和病情有相关的趋势[2 ] 。北京大学医学部医学分子免疫重点实验室克隆得到人类新基因TFAR1 9[5 8] ,那么在凋亡增多的SLE患者中TFAR1 9的表达情况及活动期SLE患者、稳定期SLE患者和正常人的血清中TFAR1 9蛋白 (即抗原 )的具体情况如何 ,及其相应的临床意义目前国内外还无人研究。　　　　1　资料和方法1 1　临床…