Bcl-2 siRNA对胃癌细胞凋亡及其紫杉醇敏感性影响研究

目的:研究特异性siRNA对胃癌细胞的抑制作用,以及探讨采用RNA干扰技术下调Bcl-2基因能否增强SGC-7901胃癌细胞对紫杉醇的敏感性。方法:通过脂质体HiperFect将Bcl-2 siRNA转染入胃癌细胞SGC-7901;采用RT-PCR和蛋白印迹法检测Bcl-2 siRNA转染前后胃癌细胞Bcl-2基因表达的变化;用Annexin Ⅴ法及细胞周期分析法检测细胞凋亡;用MTS法观察细胞对药物紫杉醇敏感性的影响。结果:Bcl-2 siRNA组较空白对照组明显抑制Bcl-2 mRNA的表达水平,抑制率为(87.6±5.3)%,P=0.001;Bcl-2 siRNA组较空白对照组明显下调Bcl-2蛋白表达水平,抑制率为(85.7±3.6)%,P=0.003。Bcl-2 siRNA组、紫杉醇组和紫杉醇+Bcl-2 siRNA细胞总凋亡率分别为49.00%、46.10%和66.00%,联合用药组细胞凋亡率最强。Bcl-2siRNA+紫杉醇联合用药对SGC-7901细胞周期分析结果显示,联合用药组凋亡率为48.00%,Bcl-2 siRNA组和紫杉醇组分别为9.03%和21.50%。Bcl-2 siRNA组、阴性对照组和空白对照组的IC50分别(7.25±0.22)、(54.45±0.82)和(68.9±0.91)μg/L,Bcl-2 siRNA转染胃癌细胞SGC-7901对药物紫杉醇更敏感,其IC50值比阴性siRNA转染组降低86.7%,即对紫杉醇敏感性增加7.25倍。结论:靶向Bcl-2 siRNA可明显下调靶基因Bcl-2表达,促进SGC-7901细胞凋亡并能提高细胞对紫杉醇敏感性,为胃癌治疗提供新的策略。     

Bcl-2反义硫代寡核苷酸规模化化学合成

目的 建立规模化合成Bcl-2反义硫代寡核苷酸合成工艺。方法 合成采用亚磷酰胺法，泵驱动，流过式反应；紫外分光光度计测其D260nm值；通过DNAPacPA-100分析柱对合成粗产品进行分析。结果 合成周期5h左右，平均合成效率98．4％，总产率76．2％，186μmol合成柱获得粗产品0．75g，色谱柱分析显示各组分都获得分离，最强峰保留时间32．247min，相对峰面积57．68％。结论 本所研究开发规模化合成工艺可获得高产率的反义寡核苷酸，为反义药物开发奠定基础。     

几种子同方式诱导Jurkat细胞凋亡过程中TFAR19的表达

为探讨一个新的细胞凋亡相关基因－ＴＦＡＲ１９所参与的凋亡途径,我们研究了几种不同方式诱导白血病细胞株Ｊｕｒｋａｔ细胞凋亡过程中ＴＦＡＲ１９表达的变化。采用去除血清,ＶＰ－１６作用及Ｆａｓ单抗活化受体等方法诱导Ｊｕｒｋａｔ细胞凋亡后,以ＲＴ－ＰＣＲ方法检测ｍＲＮＡ水平ＴＦＡＲ１９的表达,用流式细胞术及Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹检测蛋白水平ＴＦＡＲ１９的表达。实验结果显示,Ｊｕｒｋａｔ细胞在去除血清１２小时,     

志苓胶囊通过激活caspase-3抑制K562细胞增殖和诱导细胞凋亡

目的研究志苓胶囊(ZLJN,抗癌复方Ⅱ号)对人慢性髓系白血病K562细胞株增殖及凋亡的影响。方法将志苓胶囊按其不同中西药成分比例配制成中药、西药和复方组,与K562细胞共培养后,采用MTT法、集落形成实验分别检测细胞存活率和集落形成率;Annexin V-FITC/PI标记法、DNA倍体分析及DNA片段化分析检测细胞凋亡;流式细胞仪检测caspase-3活性;Western blot法检测caspase-3酶原(pro-caspase-3)表达。结果不同药物组与K562细胞共培养后,细胞生长受抑制,集落形成率降低。Annexin V-FITC/PI法检测到早期凋亡细胞;DNA倍体分析可见亚二倍体峰(凋亡峰);琼脂糖电泳见典型的DNA梯状带。流式细胞检测caspase-3活性增强,Western blot检测pro-caspase-3表达减弱。结论志苓胶囊可有效抑制K562细胞增殖,诱导其凋亡,其作用机制可能与caspase-3活性增强有关。     

黄芩苷对CA46细胞裸鼠异种移植瘤的作用及机制

目的: 研究黄芩苷抗CA46细胞裸鼠异种移植瘤的作用并探讨其机制。方法: 构建CA46细胞裸鼠异种移植瘤模型,将荷瘤裸鼠随机分为5组:阴性对照组、15 mg/kg黄芩苷组、30 mg/kg黄芩苷组、60 mg/kg黄芩苷组和4 mg/kg依托泊甙 (VP-16) 阳性对照组。采用腹腔注射方式给药,12 d后处死部分裸鼠,对剥取的瘤块称重计算抑瘤率,并进行透射电镜、病理学和Western blotting检测;观察各组未处死的裸鼠直至全部死亡,研究黄芩苷对荷瘤裸鼠生存时间的影响。结果: 黄芩苷明显抑制了CA46细胞裸鼠异种移植瘤的生长,引起肿瘤细胞的凋亡、坏死以及p-Akt、NF-κB、mTOR和p-mTOR蛋白表达的下调;随着黄芩苷剂量的增加,黄芩苷治疗组荷瘤裸鼠的生存时间明显延长。结论: 黄芩苷可抑制CA46细胞裸鼠异种移植瘤的生长,诱导肿瘤细胞的凋亡,并延长荷瘤裸鼠的生存时间,其机制可能与下调PI3K/Akt/NF-κB和PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。     

哮喘儿童家庭环境因素分析

[目的]探讨家庭环境因素对哮喘儿童的影响.[方法]选用家庭环境量表中文版(FES-CV)对51名哮喘儿童和51名正常儿童进行评定.[结果]哮喘儿童家庭的亲密度、情感表达、成功性、娱乐性及组织性等因素评分明显低于对照组,而家庭的矛盾性评分则高于对照组.[结论]哮喘儿童处在相对不良的家庭环境中,提示在治疗儿童支气管哮喘时,应重视患儿家庭环境的改善.     

健康教育对癫痫疗效的影响

目的:探讨癫痫患儿的健康教育方法,为有效避免和减少癫痫发作提供依据。方法:将70例癫痫患儿分为观察组35例和对照组35例,对照组采用常规癫痫护理,观察组给予系统性癫痫知识健康教育。结果:观察组总有效率97%,显著高于对照组,对照组有效率70.5%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:开展健康教育有助于提高癫痫患儿的疗效,提高其生活质量。     

NF-κB报告基因重组腺病毒的构建及活性分析

目的:探讨基于腺病毒载体的核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)报告基因系统作为NF-κB上游调控信号分子筛选模型的可行性。方法:利用5型E1/E3缺陷型腺病毒载体pAdxsi构建NF-κB报告基因的重组腺病毒,并利用该腺病毒感染多种贴壁细胞和悬浮细胞进行NF-κB报告基因的活性分析。结果:成功构建了NF-κB报告基因重组腺病毒Ad-NF-κB-luc,其能够感染HepG2、MGC803、THP-1、U937等细胞,肿瘤坏死因子α(tumor necrosisfactor-α,TNF-α)或脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激显示重组腺病毒携带的NF-κB报告基因具有活性。结论:以腺病毒Ad-NF-κB-luc作为NF-κB报告基因的转移载体,不仅可以感染常规方法难以转染的细胞系,而且产生的报告基因活性稳定可靠,拓展了NF-κB报告基因的应用范畴。     

时辰对免疫功能的影响

该实验观察了时辰对动物免疫功能的影响,豚鼠植物血凝素皮肤试验以晚上为强。所检测的小鼠免疫功能均以白天为最强。实验结果表明,与免疫反应有关的各种活性细胞的数量与功能因受时辰的影响而呈现节律变化。启示我们在利用实验动物进行研究设计实验方法或分析免疫学检查结果时必须有严格的时间概念。     

鼠抗粒细胞集落刺激因子单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

建立鼠粒细胞集落刺激因子单克隆抗体的杂交瘤细胞系。方法将ＳＰ２／０小鼠骨央瘤细胞和用Ｇ－ＣＳＦ免疫的Ｂａｌｂ／ｃＩＨ ＶＮＵＮＥＲＴＦＸＬＥＱＤ 宜５００ＷＴ 进行融合，用ＥＬＩＳＡ进行克隆化筛选并对杂交瘤细胞分泌的单抗滴度进行检测。