单纯疱疹病毒胸苷激酶基因在肺腺癌细胞的表达

肺癌是目前最常见和最难治的肿瘤之一 ,发病率和病死率都很高 ,易发生转移。肺癌治疗目前主要依靠传统的手术、放射治疗和化学治疗 ,其疗效较差。随着分子生物学技术的发展 ,基因治疗肿瘤成为可能。“自杀基因”的出现因其能彻底杀伤肿瘤细胞 ,因而受到广泛重视 ,被认为是最有希望成为临床肿瘤治疗的有效方法。单纯疱疹病毒胸苷激酶(ＨＳＶ ｔｋ)基因是肿瘤基因治疗中最具前景的“自杀基因”[1] ,实验研究显示 ,导入ＨＳＶ ｔｋ基因的肿瘤细胞联合抗病毒药物更昔洛韦 (ＧＣＶ)治疗 ,可有效地杀伤肿瘤细胞并可使小鼠体内实体瘤完全消退[2 ] …     

乳猪肝提取物和阿霉素对裸小鼠肾包膜下移植肝癌细胞增殖、分化和凋亡影响的实验研究

目的:探讨乳猪肝提取物(LE)和阿霉素(doxorubicin, DXR)对裸小鼠肾包膜下移植BEL-7402肝癌细胞增殖、分化和凋亡的影响。方法:应用裸小鼠肾包膜下移植肝癌细胞,形态学观察,有丝分裂计数,超微结构观察和原位DNA末端标记技术。结果:LE组和DXR组均能明显抑制移植肝癌细胞的生长和促进凋亡。LE对肝癌细胞有丝分裂影响不明显,而DXR能抑制其有丝分裂。电镜观察表明:LE能促进细胞凋亡超微结构的变化,表现为细胞固缩、微绒毛消失、核染色质边集固缩和凋亡小体形成,而对细胞分化影响不明显。DXR组除有凋亡待征的超微结构变化外,还具有促进肝癌细胞分化的作用。结论:LE能诱发移植于裸小鼠BEL-7402肝癌细胞凋亡,而对其分化和增殖影响不明显。DXR能促进裸小鼠肝癌细胞凋亡和分化,抑制其增殖。     

敲除β珠蛋白βmaj及βmin基因的C129小鼠ES-D3细胞系建立

目的：通过构建C129系小鼠β珠蛋白基因内源性珠蛋白βmaj 及βmin 基因打靶载体，建立C129小鼠敲除β珠蛋白基因内源性珠蛋白βmaj 及βmin 基因ES-D3细胞系，为制作基因敲除嵌合体小鼠提供稳定的胚胎干细胞系。 方法: 根据C129系小鼠β珠蛋白基因分子结构基础，用基因克隆方法在βmaj和及βmin两个同源序列两侧分别将1.7 kb和7.0 kb的片段插入pNTK质粒中，构建置换型打靶载体β-pNTK，用新霉素抗性基因（Neo）和 单疱病毒腺苷激酶（TK）抗性基因作为正负筛选标记。用Sal Ⅰ酶切将打靶载体β-pNTK线性化，采用电穿孔法在ES-D3细胞水平进行打靶，通过G418和GAN进行正负筛选，获得生长良好的胚胎干细胞克隆；用PCR和Southern印迹杂交方法鉴定阳性克隆基因组DNA整合结果，用碱性磷酸酶实验、体外胚体形成实验以及畸胎瘤成瘤实验鉴定细胞生物学特性。 结果: 构建了C129系小鼠置换型打靶载体，经Neo-Major鉴定引物PCR扩增、BamH Ⅰ及EcoR Ⅰ酶切及部分测序分析，所插入方向正确，结构合理，达到所预期的目的；获得了8个阳性克隆珠，阳性克隆细胞株经PCR和Southern印迹杂交方法鉴定外源基因整合到ES细胞基因组DNA中；经胚胎干细胞特性鉴定所获细胞具有良好的未分化特性和多能性。 结论: 构建了C129系小鼠β珠蛋白基因内源性珠蛋白βmaj 及βmin 基因置换型打靶载体；该载体在胚胎干细胞水平进行基因打靶后，获得了稳定的敲除β珠蛋白内源性珠蛋白βmaj及βmin 基因的胚胎干细胞系，为制作基因敲除嵌合体小鼠奠定了基础。     

小鼠胚胎干细胞植入大鼠脑内分化的研究

目的 观察小鼠胚胎干(ES)细胞植入大鼠隔区和海马内后的分化情况，并对其作研究和分析。方法 成年SD大鼠35只。体质量200—250g，雌雄不限。以SD大鼠为宿主，将ES细胞移植人宿主隔区和海马内，移植后l，2，3，4和8周后取脑，冷冻切片，进行Nissl，M6，NSE，GFAP免疫组织化学染色。结果 ES细胞移植入大鼠隔区和海马内后，从第2周开始表达：M6、GFAP、NSE等抗原。持续至第4周，主要位于移植区内，较少迁移。结论 小鼠ES细胞移植入大鼠隔区和海马内后，分化为神经元，神经胶质细胞。     

原癌基因 c- kit mRNA在自身免疫性睾丸炎中的表达及意义

[目的]探讨原癌基因c-kit mRNA在自身免疫性睾丸炎中的表达及意义.[方法]建立并分析自身免疫性睾丸炎动物模型：42只BALB/c小鼠随机分为6个实验组和1个对照组.6个实验组小鼠分别给予KM小鼠睾丸混悬液皮下注射,每周1次最多者4次,在第1次给予抗原注射后1,2,3,4,6,8周各取一组小鼠的睾丸组织,用RT-PCR检测其c-kit mRNA的变化.[结果]在第1次给予抗原注射后第1周开始c-kitm RNA转录水平开始降低,第2周起明显低于对照组（P＜0.05）,至第3,4周降至最低,第6周逐渐开始恢复,至第8周其水平与对照组相比差异已经没有统计学意义（P＞0.05）.[结论]c-kit基因与生精功能密切相关,c-kit基因mRNA的低表达可能参与自身免疫性睾丸炎导致不育的发病机制.     

胚胎干细胞C3B鼠视网膜下腔移植分化研究

目的：探讨胚胎干细胞在具有正常视网膜结构的C3B鼠视网膜下腔中的诱导分化情况。 方法:胚胎干细胞传1代后进行拟胚体培养。拟胚体消化成单细胞后联合视黄酸注入C3B鼠视网膜下腔，注射后1周、3周、2月处死小鼠取材进行病理切片、电镜检查和免疫组化检测。 结果:1周时，可见到注射部位视网膜层水肿增厚。3周和2个月时，3只移植眼内出现畸胎瘤，占所有移植眼的25%，其余眼球注射部位仅见瘢痕组织或眼球萎缩。电镜发现增殖的细胞核异型性明显，具肿瘤细胞特征。免疫组化显示：畸胎瘤部分区域MAP-2强阳性反应；可见团状或集落状细胞GFAP强阳性反应；个别细胞Nestin阳性反应。 结论:胚胎干细胞移植入具有正常视网膜结构的C3B鼠视网膜下腔，未能出现ESC向视网膜组织分化或嵌入视网膜组织，相当部分的鼠眼出现了畸胎瘤，其临床安全性和致瘤性是非常值得关注的问题。     

原发性胆囊癌4例尸解报告

原发性胆囊癌是1771年stall首先描述,于1777年Maxillian de stall正式报告。此后国外报告较多,国内首例1941年由兰锡钝报告,至今已达1000例左右,但未见有尸解病例报告,现报告4例如下:     

先天性皮肤巨大黑色素痣伴脑膜黑色素瘤三例尸检报告

本文报告3例原发颅内黑色素瘤的临床病理分析。3例均为儿童(年龄分别为61/2、7、11岁)。尸检所见,皮肤和其它脏器未见有黑色素瘤,但大脑、小脑、脊髓整段的表面被盖一层黑纱,切面见肿瘤浸润脑实质。镜下所见瘤细胞形态大小不一,胞浆丰富,胞浆内充满黑色素颗粒,胞核圆形,核膜厚,核仁明显。 本文提示当有全身巨大黑色素痣儿童出现中枢神经系统症状时,应该注意到颅内原发黑色素瘤之可能。本文综述文献,提出本病的病理学诊断标准,并作了病理鉴别诊断。对本病的组织来源、颅内分布及预后也作了简单说明。     

严密型四环素调控系统转基因首建鼠的建立

目的 制备ApoE-rtTA-tTS转基因小鼠1,为严密型四环素调控系统的体内研究提供调控部分的转基因小鼠,以便与反应部分小鼠交配得到双转基因小鼠.方法 重组构建含目的 基因的质粒pApoE-rtTA-tTS,应用显微注射法将其注入母鼠的受精卵,再植入代母输卵管,出生小鼠经PCR初步筛选出阳性,再经Southern杂交对阳性小鼠基因组DNA标本进一步鉴定.结果 产生了2只整合ApoE-rtTA-tTS基因的首建鼠.结论 成功制备了ApoE-rtTA-tTS转基因小鼠,为下一步建立严密型四环素调控系统的双转基因小鼠模型奠定了基础.     

胚胎干细胞源性与海马源性神经干细胞培养与分化的特性比较

【目的】探讨胚胎干细胞(ESCs)源性神经干细胞(NSCs)与海马源性NSCs的培养条件与分化特性,并进行比较研究。【方法】将拟胚体阶段视黄酸及视网膜Muler细胞诱导的ESCs和自60只BALB/c胎鼠海马组织分离的细胞(每次实验取10只),分别在NSCs选择性培养基中进行NSCs培养筛选,观察细胞形态变化,RT-PCR法检测Nestin基因表达,免疫细胞化学法检测Nestin等NSCs特异性标志物,对其分化后细胞检测Map2、Gap43、NF200、S100、GFAP神经组织细胞标志抗原,并对6次诱导结果进行观察比较。【结果】初级诱导的ESCs及海马细胞,在NSCs选择性培养基中培养,均形成大量呈Nestin抗原阳性,整合BrdU,表达Nestin基因的神经球样结构,且具有体外扩增传代及分化为神经元及神经胶质样细胞的能力。但ESCs源性NSCs增殖力更强,且分化细胞中NF200阳性细胞率42.1％±3.6％高于海马源性NSCs分化细胞中NF200阳性细胞率18.7％±5.1％,P<0.01。【结论】体外诱导可获得ESCs源性NSCs,与海马源性NSCs相比有更强的增殖力和向神经元分化的潜能,可作为干细胞移植治疗青光眼等神经变性疾病研究新的种子细胞。