小鼠胚胎干细胞植入大鼠脑内分化的研究

目的 观察小鼠胚胎干(ES)细胞植入大鼠隔区和海马内后的分化情况，并对其作研究和分析。方法 成年SD大鼠35只。体质量200—250g，雌雄不限。以SD大鼠为宿主，将ES细胞移植人宿主隔区和海马内，移植后l，2，3，4和8周后取脑，冷冻切片，进行Nissl，M6，NSE，GFAP免疫组织化学染色。结果 ES细胞移植入大鼠隔区和海马内后，从第2周开始表达：M6、GFAP、NSE等抗原。持续至第4周，主要位于移植区内，较少迁移。结论 小鼠ES细胞移植入大鼠隔区和海马内后，分化为神经元，神经胶质细胞。     

胚胎干细胞源性与海马源性神经干细胞培养与分化的特性比较

【目的】探讨胚胎干细胞(ESCs)源性神经干细胞(NSCs)与海马源性NSCs的培养条件与分化特性,并进行比较研究。【方法】将拟胚体阶段视黄酸及视网膜Muler细胞诱导的ESCs和自60只BALB/c胎鼠海马组织分离的细胞(每次实验取10只),分别在NSCs选择性培养基中进行NSCs培养筛选,观察细胞形态变化,RT-PCR法检测Nestin基因表达,免疫细胞化学法检测Nestin等NSCs特异性标志物,对其分化后细胞检测Map2、Gap43、NF200、S100、GFAP神经组织细胞标志抗原,并对6次诱导结果进行观察比较。【结果】初级诱导的ESCs及海马细胞,在NSCs选择性培养基中培养,均形成大量呈Nestin抗原阳性,整合BrdU,表达Nestin基因的神经球样结构,且具有体外扩增传代及分化为神经元及神经胶质样细胞的能力。但ESCs源性NSCs增殖力更强,且分化细胞中NF200阳性细胞率42.1％±3.6％高于海马源性NSCs分化细胞中NF200阳性细胞率18.7％±5.1％,P<0.01。【结论】体外诱导可获得ESCs源性NSCs,与海马源性NSCs相比有更强的增殖力和向神经元分化的潜能,可作为干细胞移植治疗青光眼等神经变性疾病研究新的种子细胞。     

原癌基因 c- kit mRNA在自身免疫性睾丸炎中的表达及意义

[目的]探讨原癌基因c-kit mRNA在自身免疫性睾丸炎中的表达及意义.[方法]建立并分析自身免疫性睾丸炎动物模型：42只BALB/c小鼠随机分为6个实验组和1个对照组.6个实验组小鼠分别给予KM小鼠睾丸混悬液皮下注射,每周1次最多者4次,在第1次给予抗原注射后1,2,3,4,6,8周各取一组小鼠的睾丸组织,用RT-PCR检测其c-kit mRNA的变化.[结果]在第1次给予抗原注射后第1周开始c-kitm RNA转录水平开始降低,第2周起明显低于对照组（P＜0.05）,至第3,4周降至最低,第6周逐渐开始恢复,至第8周其水平与对照组相比差异已经没有统计学意义（P＞0.05）.[结论]c-kit基因与生精功能密切相关,c-kit基因mRNA的低表达可能参与自身免疫性睾丸炎导致不育的发病机制.     

小鼠类胚胎干细胞分离培养及用于制作嵌合体小鼠的实验研究

目的探讨分离小鼠囊胚内细胞群类胚胎干细胞及用于制作嵌合体小鼠的方法及应用价值。方法分离3.5d小鼠囊胚内细胞群的类胚胎干细胞作为供体细胞,通过显微注射方法将分离的类胚胎干细胞注射到供体小鼠的囊胚腔中,再将注射后的囊胚移植到假孕雌鼠的子宫中制作嵌合体小鼠。结果分离36枚囊胚的内细胞群类胚胎干细胞,注射256只昆明小鼠囊胚中,移植32只假孕雌鼠子宫中,获产崽2窝,共12只,其中2只获毛色嵌合体小鼠。结论采用该技术分离所获得的类胚胎干细胞作为供体细胞制作嵌合体小鼠获得成功,该方法为ES细胞介导的转基因动物制作增添了一条新的途径,在同种不同品系的动物改良及遗传病基因治疗中有一定的应用价值,尤其是对未能建立ES细胞系的大动物的遗传工程操作具有一定意义。     

原发性胆囊癌4例尸解报告

原发性胆囊癌是1771年stall首先描述,于1777年Maxillian de stall正式报告。此后国外报告较多,国内首例1941年由兰锡钝报告,至今已达1000例左右,但未见有尸解病例报告,现报告4例如下:     

单纯疱疹病毒胸苷激酶基因对肺腺癌细胞杀伤作用探讨

目的：探讨单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)基因转染联合抗病毒药物更昔洛韦（GCV）对人肺腺癌细胞系的杀伤作用。方法：应用基因工程技术构建了携带单纯疮疹病毒胸苷激酶（HSV-tk）基因的逆转录病毒重组体pLXSN-tk，通过脂质体法转染PA317细胞，G418筛选出产重组病毒颗粒的生产细胞PA317-tk细胞。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测HSV-tk/GCV系统对人肺腺部细胞系GLC-82的生长抑制率。结果：重组逆转录病毒载体能有效地将HSV-tk基因导入GLC-82细胞系内并使其获得对GCV的敏感性。结论：肺腺癌细胞转染HSV-tk基因后，能有效地被GCV杀死。     

先天性皮肤巨大黑色素痣伴脑膜黑色素瘤三例尸检报告

本文报告3例原发颅内黑色素瘤的临床病理分析。3例均为儿童(年龄分别为61/2、7、11岁)。尸检所见,皮肤和其它脏器未见有黑色素瘤,但大脑、小脑、脊髓整段的表面被盖一层黑纱,切面见肿瘤浸润脑实质。镜下所见瘤细胞形态大小不一,胞浆丰富,胞浆内充满黑色素颗粒,胞核圆形,核膜厚,核仁明显。 本文提示当有全身巨大黑色素痣儿童出现中枢神经系统症状时,应该注意到颅内原发黑色素瘤之可能。本文综述文献,提出本病的病理学诊断标准,并作了病理鉴别诊断。对本病的组织来源、颅内分布及预后也作了简单说明。     

人羊膜诱导胚胎干细胞向表皮样干细胞的定向分化

[目的]探索体外定向诱导胚胎干细胞(ES细胞)分化为表皮样干细胞的条件,为研究其分化机理及寻找新的皮肤组织工程种子细胞奠定基础.[方法]将小鼠胚胎干细胞单独(对照组)或与人羊膜共培养4～5 d,观察其形态分化,分别用β1整合素免疫组化和流式细胞仪检测胚胎干细胞向表皮样干细胞的分化.[结果]与人羊膜共培养4～5 d后,ES细胞分化为表皮细胞样的单层细胞,细胞排列紧密,呈多边形,免疫组织化学染色后,多数细胞呈现β1整合素阳性,对照组大量细胞死亡,未见β1整合素阳性细胞;流式细胞仪检测结果显示实验组和对照组β1整合素阳性细胞分别为81.4%和8.4%,两者比较差异显著,Z检验P<0.01.[结论]人羊膜组织可在体外诱导胚胎干细胞分化为表皮样干细胞.     

裸鼠肾包膜下人癌模型在抗癌药物个体化疗中的应用

目的 通过临床病人肿瘤组织抗肿瘤药物敏感试验,为临床个体化治疗提供重要依据。方法 应用裸鼠肾包膜下人癌模型抗肿瘤药物敏感试验测试12种临床常用的抗肿瘤药物,确定出每例肿瘤最敏感药物,并向临床医生推荐使用。结果 共测试了临床肿瘤标本35例,包括肺腺癌、口腔鳞癌、结肠腺癌、乳腺癌和脑星形细胞瘤等。各个病例的最敏感药物不尽相同。结论 不同类型肿瘤以及相同类型肿瘤不同个体对肿瘤药物敏感度不同。该试验可能提高临床个体化疗效果。     

基于四环素调控系统的HD1BEL-7402 Tet-on细胞模型的建立

目的:建立表达四环素调控系统（Tet-on）的人肝癌细胞模型（HD1 BEL-7402 Tet-on），为研究四环素调控系统对基因的表达与调控提供一种细胞模型。方法:用四环素调控表达系统（Tet-on），通过脂质体法转染BEL-7402细胞，经G418筛选出高表达Tet-on的细胞株，PCR检测Tet-on基因整合，TRE-luc质粒瞬时转染含有Tet-on的细胞克隆，Dox 诱导表达后,检测荧光素酶活性，筛选高诱导表达的抗性克隆，定名为HD1BEL-7402 Tet-on细胞。结果:建立了高效诱导表达的HD1 BEL-7402 Tet-on细胞模型。结论:建立的细胞模型为以后转染TER-x质粒（如GFP），研究任何感兴趣的目的基因的调控打下了基础。