以HEV合成多肽为抗原制备抗－HEV免疫血清

用对应于戊型肝炎病毒（ｈｅｐａｔｉｔｉｓＥｖｉｒｕｓ，ＨＥＶ）开读框架ＯＲＦ１、ＯＲＦ２和ＯＲＦ３部分氨基酸序列的三段多肽为抗原，以鼠伤寒沙门菌体为载体，经静脉免疫家兔和经腹腔免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，制备出抗－ＨＥＶ免疫血清。两次加强免疫后，经本室研制的抗－ＨＥＶ　ＩｇＧＥＬＩＳＡ试剂盒检测，１：１０稀释血清Ａ值达１．５０～２．００。用沙门菌和ＨＥＶ多肽分别做中和试验，ＨＥＶ多肽的中和抑制率大于５０％，而沙门菌不能中和血清中的抗体。用此免疫血清与抗－ＨＥＶＩｇＣ阳性的病人血清做阻断试验，阻断率大于５０％。上述结果证明家兔和小鼠产生的抗体为特异性抗－ＨＥＶ抗体。     

微量细胞培养板钴-60照射灭菌效果观察

实验证明钴-60照射(2.5 Mrad)对微量细胞培养板有良好的灭菌作用,较紫外线灭菌处理者保存期为长,对细胞无明显毒性,并可反复灭菌使用。     

利用穿梭质粒快速构建含抗HAV Fab基因的重组杆状病毒

采用Bac-to-Bac系统,分别将Fd、轻链连同其信号肽基因克隆于pFastBac Dual不同启动子下,转化DH10Bac后,快捷方便地获得重组病毒,并且在sf9细胞中表达出具有HAV抗原结合活性的Fab。 1.材料和方法:(1)质粒、细胞株:pBSFdS:含重链及其信号序列基因的质粒,pBSLS:含轻链及其信号序列基因的质粒,由本室构建;pFastBac Dual质粒购自美国Gibco公司。草地贪夜蛾细胞(sf9),购自美国Invitrogen公司。(2)重组Bacmid的筛选:重组转座载体pFBFab转化DH10Bac,涂布于X-gal和IPTG的平板,挑选较大的白色菌落,提取质粒,即为重组的Bacmid。(3)转染sf9细胞:用Lipofectamine Plus转染,27℃培养过夜,次日换液,继续培养72h。收集上清液,500×g离心10min,将上清液分成小份作病毒原种。(4)重组蛋白的表达及检测:每瓶加入含适量重组杆状病毒毒种的完全培养基2ml,加入     

不同立克次体DNA的G+Cmol%含量分析

本文以普氏斑疹伤寒立克次体和斑点热立克次体为参照,对我国斑点热立克次体分离株的代表株 DNA 的 G+C mol%含量进行了分析比较,结果指出,斑疹伤寒群与斑点热群立克次体的 G+C mol%含量不同,分别为29.1和32.05;国内分离的精河株和内-01株分别为32.7和32.4,与参照的斑点热立克次体 Barbash 株(32.5)基本一致,054株的 G+C mol%是30.6,低于斑点热群的 G+C mol%数值,高于斑疹伤寒群的含量,揭示了该株 DNA 的 G+C 含量的特殊性,这是否意味着054株的特殊分类地位或是否是新种有待深入研究。     

杀菌蛋白DNA改组的初步研究

目的：运用DNA家族改组方法提高杀菌蛋白（BPI23）的杀菌活性。方法：首先将人、猴、兔BPI23基因的PCR产物等量混合，用DNAase I消化，回收50bp左右的片段，再经无引物和有引物2步PCR反应获得与原基因大小相同的改组分子，将其与载体连接获得改组文库。应用Flp-In^TM定点整合表达系统，将BPI23改组文库插入CHO细胞基因组中1个单拷贝位点，分别检测各个细胞克隆的杀菌活性，从中筛选高活性的BPI23改组分子。结果：经过2轮改组和筛选，共获得4个活性高于人BPI23约4倍的克隆，它们与人BPI23基因有7－13个氨基酸的变化。结论：探索了CHO系统中进行DNA改组和筛选的方法与技术路线，成功进行了杀菌蛋白的改组，并为其它分子的改组提供了借鉴。     

庚型肝炎肝脏免疫组化研究

目的探讨庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）抗原在肝组织中定位，进一步研究ＨＧＶ引起肝脏损害的机制。方法采用ＨＧＶＮＳ５区抗原制备单克隆抗体（ＭｃＡｂ），对４例经临床和病理确诊的血清ＨＧＶＲＮＡ阳性的慢性庚型肝炎患者肝活检标本，进行免疫组化观察。结果１例呈阳性染色，光镜观察显示：特异染色大部分定位于肝细胞胞浆中，部分有核着色和膜型染色，呈黄色或棕黄色颗粒状，阳性细胞数量少，大多散在分布，部分呈灶性分布；阳性细胞周围可见较多淋巴细胞浸润。结论ＨＧＶ抗原可在肝细胞中定位，大多呈胞浆型，部分呈核型和膜型，ＨＧＶ属嗜肝病毒；免疫损伤可能参与了庚型肝炎的肝脏损伤机制     

戊型肝炎研究:流行病学、病原学和诊断方法

1982～1987年,山东省海阳县某银行和文登县小寨村、新疆托克逊县南湖村、洛浦县多鲁乡和疏勒县巴仁、巴合齐乡先后发生戊型肝炎(Hepatitis E,HE)爆发或流行。多鲁乡21958人,发病9371人(42.6％),死亡47     

颊癌及转移淋巴结角蛋白谱的分析研究

目的探讨口腔颊黏膜鳞状细胞癌及转移淋巴结角蛋白谱的特点。方法颊部鳞状细胞癌活检标本及转移淋巴结活检标本,提取角蛋白,进行SDS-PAGE电泳和利用免疫印迹(Western Blot)杂交方法研究转移角蛋白谱的表达。结果颊黏膜化鳞状细胞癌中出现了单层角蛋白上皮如CK18、19,而CK10表达缺失;淋巴结转移鳞状细胞癌中出现了单层角蛋白上皮如19等,并且出现了大量角蛋白片段。结论颊黏膜鳞状细胞癌变异性表达CK18、19,不表达CK 10。转移淋巴结和原发鳞状细胞癌的角蛋白谱是不同的,在口腔鳞状细胞癌淋巴结转移过程中,角蛋白谱发生了变化。     

人源靶向补体抑制物CR2-CD59在中国仓鼠卵巢细胞中的稳定表达

目的构建人源靶向补体抑制物CR2-CD59,并筛选中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cell,CHO)高效表达细胞株。方法运用FuGENE6转染试剂,将含有人CR2-CD59的重组PEE14.1质粒转入CHO细胞,蛋氨酸亚氨基代砜(MSX)筛选出阳性克隆,并利用无血清培养基对CHO细胞表达株进行培养获得重组蛋白,以ELISA、SDS-PAGE和Western blot对表达蛋白进行鉴定。结果成功构建PEE14.1-CR2-CD59重组质粒,获得CHO细胞稳定表达株。SDS-PAGE结果表明,重组蛋白CR2-CD59的相对分子质量同预期结果一致。ELISA和Western blot鉴定重组蛋白CR2-CD59可与CR2、CD59多克隆抗体特异性结合。且与含血清培养基相比,无血清培养基能明显提高CHO细胞的蛋白表达量(P0.05)。结论在CHO细胞中成功表达人源靶向补体抑制物CR2-CD59。