重症肌无力患者胸腺细胞凋亡障碍与Fas表达异常的关系

目的 :探讨重症肌无力 (MG)胸腺细胞凋亡异常、Fas表达异常在自身免疫应答形成中的作用。方法 :用手术切除的MG患者的胸腺 ,制备胸腺提取液和胸腺细胞悬液 ,用MTT比色法测定胸腺细胞的增殖 ;用DNA电泳及细胞形态学观察细胞凋亡 ;用流式细胞仪检测细胞表面Fas的表达 ,用RT PCR结合单链多态构象性分析 (SSCP) ,探讨Fas基因的转录及可能存在的Fas基因突变。结果 :MG患者的胸腺提取液 ,能抑制正常胸腺细胞增殖 ,但不能抑制MG患者胸腺细胞增殖。在地塞米松作用下 ,正常人及患者胸腺细胞的增殖均可被抑制 ,细胞增殖抑制率分别为 5 8.33%和 5 4 .2 6 %。MG患者胸腺细胞的DNA电泳可见梯状条带 ,并且胸腺细胞上Fas的表达百分率增加 [(2 0 .38± 6 .0 7) % ],与空白对照组 [(12 .4 3±4 .32 ) % ]相比较P <0 .0 5。对MG患者胸腺细胞FasmRNA进行RT PCR SSCP分析 ,部分MG患者出现异常电泳条带。结论 :MG患者胸腺细胞的凋亡及Fas分子表达均异常 ,而且存在Fas基因突变 ,提示与本病的发生发展有关。     

人CD34+脐血干细胞移植治疗大鼠脊髓损伤

目的:探讨人脐血来源的CD34 干细胞治疗脊髓损伤的可行性,为脊髓功能障碍性疾病的临床治疗打下基础.方法:用密度梯度离心及免疫磁珠法分离出人CD34 脐血干细胞,在含有B27、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、人重组干细胞因子(rhSCF)的营养液中培养,用核荧光染色剂Hoechst33258标记细胞;制作大鼠脊髓横断模型,造成大鼠下肢瘫痪,在脊髓损伤3 d移植荧光标记的CD34 脐血干细胞,观察移植后的动物行为变化、脊髓组织形态学变化等.结果:脊髓损伤大鼠移植CD34 脐血干细胞5～6 d可见瘫痪大鼠的后肢肌力开始恢复,10～15 d后可出现爬行,3～4周后后肢活动活跃;对照组瘫痪的肢体未见恢复.脊髓移植区肉眼可见有增生的组织充填,镜下有大量神经胶质原纤维酸性蛋白、神经元特异性烯醇化酶阳性的细胞,移植区Hoechst33258荧光标记阳性细胞增生.结论:移植的CD34 脐血干细胞可在移植部位增殖,并使脊髓横断大鼠运动功能恢复,有望成为治疗脊髓损伤的有效手段.     

检测人血型抗A和抗B单克隆抗体的制备

用人Ａ型及Ｂ型红细胞分别免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，取免疫脾细胞与同系ＳＰ２／０骨 髓瘤细胞融合，经克隆筛选出８株抗Ａ和５株抗Ｂ杂交瘤细胞株，用小鼠腹水单克隆抗体分 别做凝集试验。亲和力测定、标本检测及ＣＰＶ、ＰＨＡ、ＣｏｎＡ对单克隆抗体效价的影响。结果表 明除Ａ４和Ｂ４株外，其余各株凝集效价均在１：１２８０以上；亲合力与抗Ａ、抗Ｂ血清相似；标本 检测符合率为１００％。结果提示：用含ＰＨＡ、ＣｏｎＡ、ＣＰＶ的杂交瘤细胞注射小鼠，所产生的单 克隆抗体效价比单独用杂交瘤细胞产生的单克隆抗体均高出２倍。     

LIF对人胚神经干细胞增殖和分化的影响

目的:探讨LIF对人胚神经干细胞(NSCs)增殖和分化的影响。方法:从孕24周流产胎儿脑组织中分离NSCs,并分4组培养。对照组用基础培养液,第1,2,3实验组分别于基础培养液中加入20μg/L EGF和B27,20μg/L LIF和B27,20μg/L LIF、20μg/L EGF及B27。观察细胞生长情况并在不同时间进行细胞计数。诱导细胞分化后,显微镜下观察。结果:培养3 d细胞开始分裂并聚集成球,后逐渐增大,培养10 d,第1,2,3实验组和对照组神经球形成数分别为(21.5±7.8),(23.8±5.4),(25.2±6.3)和(24.8±6.9),各组间差异无统计学意义。分化实验显示含LIF培养的神经干细胞分化少。结论:在体外,LIF能够促进神经干细胞的增殖并抑制神经干细胞的分化。     

鼠伤寒沙门菌L型变异对抗原与抗生素敏感性的影响

H和 O抗原常用于鼠伤寒沙门菌 (Salmone11atyphimurium STM)的鉴定 ,对抗生素的敏感性常可指导 STM患者的治疗用药。为探讨 STM L型变异菌对 H和 O抗原及对抗生素敏感性的影响 ,本文对体外诱导的 3株 STM L 型及其原菌进行了 H和 O的抗原检测和对抗生素的敏感试验 ,以期有利于     

胶质瘤RNA致敏的人脐血树突状细胞诱导细胞毒T淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤作用

目的:制备人脐血来源的树突状细胞(DCs),用胶质瘤RNA诱导其成熟,并观察DCs诱导细胞毒T淋巴细胞(CTL)体外杀伤肿瘤细胞的活性.方法:以rhGM-CSF、IL-4诱导人脐血单个核细胞向DCs分化并鉴定.提取胶质瘤RNA与DCs混合,使DCs致敏,未致敏的DCs为对照组.观察细胞形态并检测致敏前后DCs的表型.将DCs与外周血T细胞共培养,以胶质瘤细胞为靶细胞,采用MTT比色法检测T细胞抗肿瘤活性差异.结果:人脐血单个核细胞于诱导第5 d呈现典型的DCs形态;经rhGM-CSF、IL-4诱导培养后,CD86、CD11c、CD54、MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ类分子表达与培养前比较均明显增高(P＜0.01).负载抗原后,MHC-Ⅰ和CD54表达与负载抗原前相比进一步增高(P＜0.05).以DCs诱导活化的T细胞与胶质瘤细胞共培养可使胶质瘤细胞的生长受到抑制,并最终导致其死亡;杀伤率与未负载抗原的对照组相比差异有统计学意义(P＜0.01).结论:人脐血单个核细胞在细胞因子的诱导下扩增并分化为DCs.经抗原致敏后,能增强淋巴细胞对相应肿瘤细胞的体外杀伤效应.     

GM-1对培养的人胚神经干细胞增殖和分化的影响

目的：观察不同剂量神经节苷脂（GM－1）对神经干细胞增殖和分化的影响。方法：从人胚胎脑组织分离出神经干细胞，培养于含bFGF（阳性对照组）和B27（阴性对照组）的DMEM／F12细胞培养液中，实验组培养液中分别加入0．335μg/L，3．35μg/L及33．5μg/L的GM－1，用MTT比色分析法测定细胞增殖能力，用含体积分数3％血清的DMEM／F12培养液诱导细胞分化，每间隔6h于倒置显微镜下观察细胞分化情况，结果：5d,10dMTT比色显示，GM－1（33．5μg/L）组与阳性对照组比较，P均＞0．05，与阴性对照组比较，P均＜0．05，GM－1（0．335μg/L）组，GM－1（3．35μg/L）组与阴性对照组比较，P均＞0．05。分化实验发现，接种6h后，体积分数3％血清＋DMEM／F12组神球周边可见明显的细胞突起，呈放射状向周围伸出，而3个实验组和阴性对照组的细胞突起短且细小，随着培养时间的延长，各组的细胞突起逐渐伸长，3个实验组分化能力低于对照组，与阴性对照组之间无明显差异，结论：GM－1能够维持神经干细胞的原始神经状态，促进神经干细胞的增殖，对神经干细胞无明显的诱导分化作用。     

交链孢酚单甲醚(AME)特异性抗体研制(Ⅰ)

交链孢霉是污染粮食、蔬菜、烟草等植物的常见霉菌,该霉菌能产生多种毒性代谢物,交链孢酚单甲醚(Alternariol Monomethyl Ether简称AME)是其中主要毒素之一,本文介绍了将AME重氮化,然后将AME偶氮化合物与牛血清白蛋白(BSA)进行交联制成完全抗原,用AME-BSA完全抗原免疫家兔制备抗AME抗体。并将AME标记上半乳糖苷酶,用标准AME与之竞争,通过ELISA竞争试验,绘出标准曲线图,证明所制备的抗AME抗体能与标准AME进行特异性结合,可用于粮食中AME含量的检测。     

人胚脑源性神经干细胞特性及免疫原性研究

目的:探讨人胚脑源性神经干细胞特性及免疫原性,为神经干细胞(neuralstemcells,NSCs)移植治疗神经系统损伤奠定基础。方法:取孕14周流产胚胎,无菌分离制备大脑神经细胞悬液,用CD133标记的免疫磁珠分选NSC,提取NSCRNA,进行RT-PCR探测MHC-I,MHC-II类分子mRNA转录;用流式细胞术检测细胞表面MHC-I,MHC-II类分子的表达;用正常成人外周血单个核细胞与培养NSC共培养和MTT比色分析法观察淋巴细胞增殖反应;将NSC小鼠脑内接种,进行组织染色观察细胞移植部位的组织学变化。结果:新分离和传代的NSC均发生MHC-I,MHC-II类分子mRNA转录,MHC-I类分子在NSC表面的表达百分率为(5.66±0.37)%,NSC在体外能诱发淋巴细胞增殖反应,A值为1.09±0.48和1.15±0.29,与阴性对照比差异有显著性意义(P<0.05)。NSC小鼠脑内移植具有修复神经损伤作用,局部无淋巴细胞浸润和炎症。结论:人胚脑源性神经干细胞具有免疫原性,但直接脑内接种未发现引起明显的移植排斥反应。