超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素基因B的原核表达

目的构建重组pET-30a-SEB原核表达载体,转化感受态大肠杆菌BL-21(DE3),诱导表达超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素B(staphylococcalenterotoxinB,SEB)。方法利用PCR技术从产SEB的金黄色葡萄球菌标准菌株CMCC-26075基因组DNA中克隆SEB全长序列,将其克隆到pGEM-TEasy载体中并进行测序。构建pET-30a-SEB原核表达质粒,转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),异丙基硫代β-D半乳糖苷(isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达,经镍离子螯合亲和层析纯化后免疫鉴定。结果PCR获得超抗原SEB基因片段,与克隆载体连接后经测序与文献报道的基本一致;成功构建了pET-30a-SEB原核表达质粒且成功诱导表达出相对分子质量(Mr)约31×103的蛋白。结论成功克隆了seb基因序列,并进行了原核表达和鉴定,获得了SEB蛋白,为后续对超抗原SEB的进一步研究奠定了基础。     

2型糖尿病合并脑梗塞与遗传多态性关系的研究进展

近年的研究发现，遗传因素在糖尿病脑血管并发症的发生中起重要作用、这些遗传因素包括：血管紧张素转化酶基因、载脂蛋白E基因、β纤维蛋白原基因及亚甲基四氢叶酸还原酶基因(MTHFR)。本文就上述基因的多态性与2型糖尿病脑梗塞的发生的相关关系进行综述。     

两种细胞表面抗原标记法流式仪检测健康成人T亚群Ⅰ、Ⅱ型细胞比例实验研究

目的了解正常成人T亚群Ⅰ、Ⅱ型细胞比例，并比较以CD3＋CD4双标记法和以CD3＋CD8双标记方法对检测结果的影响。方法全血以PMA和伊能霉素刺激培养4h，以三色标记法流式检测T亚群Ⅰ、Ⅱ型细胞因子阳性细胞的比例。结果CD3、CD8、CD4抗原在刺激后明显下调，但是不影响T亚群比例值。以CD3＋CD8双标记法检测了23例正常成人，n1和Tcl细胞在CD3^＋淋巴细胞中的比例分别为2．6％（0％-23．8％）和2．2％（0％-23．3％）。Th2和Tc2细胞占CD3^＋淋巴细胞2．8％（0．7％-13．3％）和1．6％（0％-5．1％）。以CD3＋CD4双标记法检测了12例正常成人，Th1和Tc1细胞占CD^＋淋巴细胞的比例分别为4．8％（0％-15．6％）和1．8％（0．3％-18．6％），Trh2和Tc2细胞占CD3^＋淋巴细胞的比例分别为2．6％（0％-6．5％）和1．2％（0％-10．6％），均与以CD3＋CD8标记检测的结果无统计学意义。以CD3-FTTC和CD8-PerCP双标记法检测了17例正常人的IL-2表达，IL-2阳性的CD4^＋T细胞占CD3＋淋巴细胞的比例为3．7％（0％-30．0％），高于CD8^＋IL-2^＋T细胞在CD3^＋淋巴细胞中的比例0％（0％-1．7％），P=0．005。结论可以建立有效的流式检测正常人T亚群Ⅰ、Ⅱ型细胞比例方法。以CD3＋CD4双标记或以CD3＋CD8双标记检测分析T亚群的Ⅰ、Ⅱ型细胞比例都是可行的。     

分泌抗A群脑膜炎球菌多糖单克隆抗体的杂交瘤细胞系的建立

用A群脑膜炎球菌悬液免疫的BALB/c小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞,经50％PEG处理进行融合。采用微量被动血凝试验(PHA)筛选及有限稀释法克隆化后,获得4株分泌抗A群脑膜炎球菌多糖单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞系(WSA—C_(11),WSA—E_6,WSA—D_4,WSA—F_8),培养上清和诱生的小鼠腹水的特异性抗体的PHA和ELISA滴度分别为1.28—5.12×10~(-2)和1×10~(-5)—10~(-6)、4株McAb和PHA滴度均被A群脑膜炎球菌多糖抗原抑制,其血凝抑制滴度与所加抑制抗原的量成线性关系,4株McAb均与3株A群脑膜炎球菌菌株呈现强的玻片凝集反应,3株B群,2株C群,1株D群,及7株新群脑膜炎球菌菌株不发生效义玻片凝集反应。试验证明4株杂交瘤细胞所分泌的抗体是针对具有群特异性的A群脑膜炎球菌多糖抗原的。4株McAb具有很高的亲和力,经80～160倍稀释与A群脑膜炎球菌菌株仍呈现强的玻片凝集反应,而A群脑膜炎球菌诊断血清(Pc-Ab)高于10倍稀与本菌的玻片凝集反应明显减弱,McAc的细菌试管定量凝集反应滴度也较PcAb诊断血清高16～32倍。4株McAb均属小鼠IgM类。杂交瘤细胞系染色体计数为91～95条。4株条交瘤细胞在体外连续培养4个多月,40余代,经液氮冻存复苏后仍保持稳定的分泌抗体的能力。     

含氮二膦酸盐/IL-2诱导肿瘤患者外周血γδT细胞增殖的作用

目的探讨药物（含氮二膦酸盐联合IL-2，N-BP／IL-2）诱导实体肿瘤患者外周血γδT细胞增殖作用。方法采用流式细胞仪测定103例肿瘤患者和43例健康人外周血总T细胞绝对值、御细胞绝对值和相对值，测定患者外周血经药物体外刺激后御细胞增殖指数和用药前后患者外周血总T细胞、γδT细胞绝对值和相对值。结果肿瘤患者和健康人外周血总T细胞绝对值、御细胞绝对值和御细胞相对值的中位数，分别为1306细胞/μl和1522细胞/μlP=0．003），64细胞/μl和162细胞/μl（P〈0．001），5％和11％（P〈0．001）。24例经药物体外扩增试验阳性的肿瘤患者治疗前后体内外周血总T细胞绝对值、γδT细胞绝对值和御细胞相对值的中位数，分别为1283细胞/μl和1552细胞/μl（P=0．001），54细胞/μl和107细胞/μl（P〈0．001），6％和8％（P=0．008）。全部肿瘤患者中外周血γδT细胞对药物体外诱导增殖反应阳性患者的百分率为68．9％。结论肿瘤患者外周血γδT细胞计数显著低于健康人。不同肿瘤患者外周血γδT细胞对药物刺激增殖的反应性不同。N-PB／IL-2在体内有显著增加御细胞数量的药理作用。体外增殖试验可作为N-PB／IL-2治疗患者的参考。     

气功致精神障碍患者心理状态

为了解气功所致精神障碍患者的心理特点，作者对符合CCMD—2－R气功所致精神障碍诊断标准的病人进行SCL—90调查，并与全国常模比较。发现病人有暗示性强、好奇心大和自我中心的个性，且起病急、练功动机不良和练功方法不当；出现编差后发生急性‘C理反应，如焦虑不安、紧张恐惧、行为失去控制、神鬼附体、内感性不适等；躯体化、强迫、人际关系、焦虑、恐怖、偏执和精神病因子分显著高于常模。     

用电融合技术建立抗甲组虫媒病毒单克隆抗体杂交瘤细胞系的研究

1980年Zimmermann报告了电场诱导细胞融合的新技术。它主要包括两个电过程:一是以电介质电泳使细胞形成“串珠”,达到细胞紧密接触;二是以瞬间直流高压电脉冲使细胞发生可逆电穿孔,相邻细胞的细胞质沟通,达到细胞融合。由于这一技术具有可使差异较大的细胞发生融合,在显微镜下能观察融合过程,物理刺激对细胞无毒性,融合率较PEG法高等优点。引起了许多学者的兴趣。现已在植物细胞,动物细胞,菌细胞,以及脂质体、质粒与细胞的融合等方面进行了广泛的应用研究。我们用这一技术建立鼠B淋巴细胞杂     

ATP生物荧光检测在气管镜清洗消毒质量监测中的应用研究

目的探讨三磷酸腺苷(ATP)生物荧光检测对气管镜清洗消毒合格参考值范围和检测方法。方法选取360条患者使用后的气管镜随机分为A、B、C三组,每组120条。A组床旁预处理后分为A1、A2两组(每组60条气管镜),B组气管镜在人工清洗后分为B1、B2两组,C组气管镜在高水平消毒后分为C1、C2两组,A1、B1、C1组采用细菌采样,A2、B2、C2组进行ATP生物荧光采样。两种采样方法对气管镜表面采样为全部长度涂抹采样,管腔的采样方法均为冲刷法。同时选取临床使用后的60条气管镜经过人工清洗后,对管腔运用冲洗法,对冲洗液进行ATP生物荧光检测,比较冲洗法和冲刷法对管腔采样的有效性。结果气管镜在人工清洗后,对管腔采样的冲洗法和冲刷法,两组ATP总量的相对发光值(RLU)差异有统计学意义(P=0.040)。气管镜在A1、B1组的细菌采样中,管腔和表面菌落数差异均有统计学意义(P均<0.001),高水平消毒后表面和管腔菌落数均为0;气管镜在A2、B2、C2三组的ATP生物荧光检测采样中,表面ATP总量RLU值A2与B2组间比较差异有统计学意义(P<0.001),B2与C2组间比较差异有统计学意义(P=0.040);管腔ATP总量RLU值A2与B2组间比较差异有统计学意义(P<0.001),B2、C2两组差异无统计学意义(P=0.450)。结论 ATP生物荧光采样冲刷法对气管镜管腔采样更有效;人工清洗环节非常重要,人工清洗后气管镜表面和管腔ATP总量建议低于10 000和3 400。     

ICU病人的营养问题

ICU (Inetnsive Care U nit)病人多处于创伤和 /或感染的重度应激反应状态 ,严重创伤和感染导致代谢亢进 ,从而引起营养状态的迅速恶化 ,并发营养不良。合理的营养支持可使重症病人病情缓解、病程缩短和死亡率明显下降 [1 ]。对危重病人来说 ,营养支持是各种综合治疗措施的一个部分。1　 ICU病人的代谢特点　　 ICU病人多为严重创伤、脓毒症、全身炎症反应(SIRS)或多器官功能衰竭 (MOSF)病人 ,其处于应激状态 ,代谢反应一般分为两个阶段 :第一阶段为高分解代谢反应阶段 ,在创伤或手术后 2～ 4d最为剧烈 ,但在极度严重应激反应后 ,短…     

曲美他嗪对陈旧性心肌梗死后室性心律失常影响的随机配对、交叉研究

目的：研究曲美他嗪（Trimetazidine）对于处于常规治疗中的心肌梗死后的心 律失常的作用。方法：冠心病陈旧心肌梗死病例（OMI）,共29对（58例）;男性27对,女性2对;配对主要条件：性别、年龄、梗死部位、梗死后时间、高血压病史及分级;糖尿病史;采用病例配对、随机进入试验、交叉、单盲的试验设计;结果分析采用方差分析（ANOV／F检验）。结果：综合交叉试验结果,Trimetazidine处理组室性心律失常的发生低于对照组（F＝4．20,P＜0．05）;对于清醒时间段即活动时间段的室性心律失常的分析显示：Trimetazidine也具有显著的抑制作用（F＝5．87,P＜0．05）;对于Lown3级以上室性心律失常的单独分析,也显示出其较明显的抑制作用（F＝7．61,P≈0．01）;对于OMI后LVEF≤40％患者组的室性心律失常,Trimetazidine也表现出明确的抑制作用（F＝5．43,P＜0．05）。结论：对于陈旧性心肌梗死所伴发的室性心律失常,除基础药物的处理外,应用曲美他嗪可对其产生显著地抑制作用,并减少抗心律失常药物的应用;改善缺血心肌的能量代谢可能是此作用的主要基础。