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用SP2/0小鼠骨髓瘤细胞与用登革4型病毒免疫的鼠脾细胞,在PEG—1000的作用下进行融合,获得了8株产生抗登革4型病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞系。其中5株杂交瘤产生的抗体,对登革4型病毒具有荧光型特异性,1株对登革1型病毒有交叉反应;另2株对登革2型病毒有交叉反应。对上述8株杂交瘤分泌的抗体又进行了补体结合、空斑抑制中和及血凝抑制试验的鉴定,结果有2株是补体结合型特异,另4株有低度的中和活性。然后用3个荧光型特异的单克隆抗体对5个地方毒株进行试用的结果,进一步验证了它们的特异性。上述杂交瘤稳定传代7个月后,冻存于液氮中。 相似文献
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用ＰＣＲ产物进行克隆已广泛用于分子生物学的各个领域。ＰＣＲ产物的克隆主要通过两个途径：其一，在引物的３’末端加上限制性内切酶的识别序列，使扩增片段产生粘性末端，再连接到有相应末端的载体中去。但是，由于许多限制酶对处在ＤＮＡ片段末端的识别序列的作用效率远较处于内部的序列为低。因此，该方法在实际应用中常常不能获得满意的结果。其二，用ＰＣＲ产物进行平端连接，这种方法无需酶切，可适用于任何扩增产物，故应用较广。但由于ＴａｑＤＮＡ聚合酶具有不依赖模板的末端转移酶活性而导致扩增片段３’端带有腺苷酸残基，而使… 相似文献
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登革病毒单克隆抗体在各种血清学反应中,其结果没有相关性;83份免疫荧光检查阳性的单克隆抗体,仅有11份补体结合阳性,8份血凝抑制阳性。观察到单克隆抗体的血清学性质与登革病毒的抗原型有一定关系,1型和4型病毒的单克隆抗体仅有补体结合活性,其中4F_7和4F_9滴度可达20,480～40,960,并且为型特异;而2型和3型病毒的单克隆抗体则只有血凝抑制活性,除3D_4为型特异外,其余均为属特异,与其他黄病毒属病毒有明显的抗原交叉关系。本实验室于1982年建立了产生登革4型病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞,并获得了免疫荧光型特异的单克隆抗体。本文将报导对登革病毒单克隆抗体血清学性质研究的结果。 相似文献
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本文将AchE与溴化氰活化的Sepharose 4B偶联合成了抗AchE单克隆抗体的亲和凝胶,AchE偶联率50～72％。小鼠腹水经50％饱和废硫酸铵沉淀,对PBS pH7.0以透析去除剩余的硫酸铵上亲和层析柱4℃反应16～20h用PBS洗下不吸附的蛋白质,再用IN乙酸或3M KCNS洗下特异性吸附的IgG,产率约2～3mg/ml胶水。聚丙烯酰胺凝胶电泳检定为一条主带,用 相似文献
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本文为了明确AchE单克隆抗体所针对的抗原决定簇的结构类型,对电印渍术法进行了研究。 天然的AchE由不同数量的亚基构成,在SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳时出现3～4条区带:羧甲基化的AchE在电泳时只出现1条区带。天然的及羧甲基化的AchE经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳后,电印渍于硝酸纤维素滤纸上,本实验经印渍术后,通过抗原抗体的结合反应,底物染色观察抗AchE单克隆抗体与天然AchE及羧甲基AchE的结合情况,从而鉴定抗AchE单 相似文献
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我们用SP2/0-Ag14小鼠骨髓瘤细胞与用登革1型病毒免疫的BALB/C小鼠脾细胞在融合剂PEG-1000的诱导下进行融合,获得了15株产生抗登革1型病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞系。其中14株属登革病毒型特异,1株属登革病毒亚群特异,它们的荧光效价均在10,240以上。15株杂交瘤均无血凝活性,3株有补体结合活性。1D_4,1B_9的IgG亚类为IgG_1,1F_(11)为IgG_2a,轻链均为K型。1株杂交瘤(1D_4)的染色体数为87～115。用SDS-PAGE测定1D_4分子量,重链为54,000,轻链为24,000。15株杂交瘤连续传代3～6个月,冻存复苏后抗体水平未见下降。 相似文献
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本文研究了BALB/c小鼠杂交瘤细胞株分泌的抗AchE单克隆抗体对梭曼膦酰化胆硷酯酶老化反应的影响,首先用有机硷毒剂梭曼与AchE结合形成膦酰化AchE,然后再在37℃使AchE与抗AchE单克隆抗体反应1小时形成抗原抗体复合物,给于AchE重活化剂HI-6观察AchE的重活化率,AchE活性用微量羟胺比色法和2.6-二氯靛酚法测定。若单克隆抗体能 相似文献
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自从1978年以来,我国广东,广西和海南等地区连续发生了登革热大流行,成千上万的人被登革病毒感染,给人民的生命财产带来了极大的危害,为了阐明我国登革病毒流行来源和传播途径等问题,为登革热的预防控制提供依据,我们在对登革2型病毒株抗原分析的基础上,又对登革3(DEN-3)型病毒株的抗原性变化进行了分析。由于登革病毒培养滴度低,周期比较长,制备一定量的抗原进行抗原分析比较困难,用一般的血清学方法又不能说明病毒抗原表位的变化。因此我们采用了标记分析(Signature 相似文献
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用Sp2/0小鼠骨髓瘤细胞与用乙酰胆酯碱酶(AchE)免疫的BALB/c小鼠脾细胞,在PEG-1000作用下进行融合。获得了5株分泌抗乙酰胆碱酯酶单克隆抗体的杂交瘤。用酶联免疫吸附试验(ELISA)对其分泌的单克隆抗体进行了特异性交叉实验,免疫球蛋白的类型鉴定及染色体检查。以上细胞株经3～6个月稳定传代后冻存于氮液中。 相似文献
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本文讨论了3F_3抗体Fab端的制备及其对AchE活性的影响。 3F_3单克隆抗体为IgG_1,用免疫亲和层析方法自小鼠腹水中分离分化。纯化后的抗体聚丙烯酰酶电泳达电泳纯。将3F_3 IgG用木瓜蛋白酶水解,SDS凝胶电泳检定消化产物有Fab端、少量完整IgG、Fc端。将消化产物上AchE亲和层析柱吸附纯化使Fab、IgG与Fc端及其他肽 相似文献