结核杆菌Mtb8.4/hIL12嵌合基因真核表达质粒的构建与表达

目的　克隆结核分枝杆菌Mtb8.4 /hIL12嵌合基因 ,导入真核表达载体pCI neo ,并在真核细胞中进行表达。方法　采用基因工程技术 ,首先以 pcDNA3.1(+) -Mtb8.4为模板 ,经聚合酶链反应 (PCR)扩增出Mtb8.4 linker基因 ,与 pCI neo载体进行连接重组 ,构建成pCI neo Mtb8.4 linker(pML)重组质粒 ,然后以 pORF hIL12质粒为模板 ,经PCR扩增出hIL 12基因 ,将hIL 12基因与 pML质粒进行连接重组 ,构建成Mtb8.4 /hIL12嵌合基因真核表达质粒 ,用限制性内切酶消化、PCR及DNA序列测定等多种分子生物学方法进行鉴定 ;重组嵌合质粒转染COS - 7细胞后 ,用RT PCR方法鉴定Mtb8.4 /hIL12嵌合基因在转录水平的表达情况。结果　Mtb8.4 /hIL12嵌合基因重组真核表达质粒经证实构建成功 ;转染COS - 7细胞后 ,Mtb8.4 /hIL12嵌合基因在转录水平成功表达。结论　Mtb8.4 /hIL12嵌合基因重组真核表达质粒的成功构建及在COS- 7细胞中的成功表达 ,为进一步研究其免疫保护效果及制备结核病Mtb8.4 /hIL12嵌合基因疫苗奠定了基础     

老年宫颈病变患者阴道镜下活检准确性调查

目的 探讨老年女性阴道镜活检准确性及相关影响因素.方法 回顾性分析近4年来,因宫颈病变行阴道镜下活检和宫颈锥切术的老年患者(大于等于50岁)110例,采用自身对照法,对比研究宫颈锥切术和阴道镜下活检的病理检查结果,并结合患者绝经情况、宫颈鳞柱交界及HPV情况进行分析.结果 老年妇女宫颈锥切术与阴道镜下活检的病理检查结果符合者46例(41.8％),不符合者64例(58.2％).在不符合者中,阴道镜活检病理低于锥切病理的37例(33.6％),高于锥切病理的27例(24.6％).其中,绝经后妇女阴道镜下活检的准确率下降,宫颈鳞柱交界未见者阴道镜下活检的准确率降低,HPV检测值高者阴道镜下活检的准确率较低.结论 老年女性阴道镜下活检的准确性下降,与绝经、HPV值及宫颈鳞柱交界未见因素相关.     

结核分支杆菌ESAT-6真核表达质粒的构建及蛋白表达的鉴定

目的 用6kDa早期分泌性抗原靶蛋白(ESAT-6)基因构建真核表达重组质粒pcDNA3．1( )-ESAT-6，并鉴定其在真核细胞(COS-7)中的蛋白表达。方法 以结核杆菌H37Rv株基因组DNA为模板，用PCR对ESAT-6基因进行扩增，将扩增的产物连接于测序载体pUCm—T上，经测序反应确定无误后，再将PCR反应产物克隆于真核表达载体pcDNA3．1( )上。并用脂质体介导真核表达重组质粒pcDNA3．1( )-ESAT-6转染真核细胞COS-7，72h后，通过SDS—PAGE和免疫印迹鉴定ESAT-6基因表达的蛋白。结果 用结核杆菌基因ESAT-6构建重组真核表达质粒pcDNA3．1( )-ESAT-成功，通过SDS—PAGE证明重组质粒转化的细胞内有一分子量6kDa的特异蛋白，免疫印迹证明该6kDa蛋白能与抗ESAT-6单克隆抗体反应。结论 结核杆菌早期分泌性蛋白ESAT-6真核表达重组质粒成功构建，该质粒转染的细胞能够产生、分泌结核杆菌早期分泌性蛋白ESAT-6。     

hsp70/CD80嵌合DNA疫苗对结核杆菌感染的免疫预防效果

卡介苗（BCG）虽然是全球使用最广泛的预防结核的疫苗,可预防和减轻儿童的重症结核,但对成人肺结核的保护效果不稳定.DNA疫苗为结核的防治提供了新的思路.人们试图用嵌合DNA疫苗和DNA疫苗的联合免疫来提高对结核病的免疫保护效果.分支杆菌热休克蛋白70（hsp70）包含多个T细胞和B细胞表位,免疫原性非常强,具有免疫优势抗原的特点,能诱导出特异性Th1型细胞反应,对结核杆菌的攻击可产生较强的保护性免疫效应,但单独的hsp70 DNA疫苗的免疫保护效果不能超过BCGCD80是近年来发现的一种具有免疫活化功能的第二信号分子,与其共刺激受体CD28/CTLA-4间相互作用可提供T细胞活化所必需的协同刺激信号,本研究将结核杆菌hsp70和人CD80的编码基因进行连接重组,制备成结核病hsp70/CD80嵌合DNA疫苗,可望提高hsp70 DNA疫苗的免疫效力,获得免疫原性更强、安全可靠的新型结核病疫苗.     

乙型肝炎病毒前C／C基因区硫代和脂肪链—硫代反义寡核苷酸的体外抗…

为了研究修饰的反义寡核苷酸（ＡＳＯＮ）的抗乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）作用。以２．２．１５细胞为靶细胞，在ＨＢＶ前Ｃ／Ｃ基因区设计合成了１６聚硫代和脂肪链－硫代两种修饰的ＡＳＯＮ，用酶联免疫吸附和斑点杂交技术分别检测作用细胞的乙型肝炎病毒表面抗原（ＨＢｓＡｇ）和ｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）以及ＨＢＶ ＤＮＡ的分泌情况。结果显示，ＡＳＯＮ在浓度为１０μｍｏｌ／Ｌ时能特异性抑制细胞９２％￣９５％ＨＢｓＡｇ和８４％￣     

慢性迁延性肝炎患者外周血单个核细胞内HBV DNA的存在与白细胞介素Ⅱ关系的研究

本文检测28名慢性迁延性肝炎患者及10名正常人的外周血单个核细胞(PB-MCs)内 HBV DNA 序列及其产生 IL-2的水平,以观察 HBV DNA 的存在和 IL-2产生二者之间的关系,以便探讨乙型病毒性肝炎的有关发病机理。结果发现慢迁肝患者PBMCs 产生 IL-2活性明显降低,降低的原因虽是多方面的,但 HBV 感染 PBMCs 可进一步导致 IL-2的活性降低,而后者又促进了 HBV 感染的慢性化,形成一种恶性循环。     

一种成人肾病综合征患者尿沉渣足细胞分子nephrin及Podocalyxin检测方法

目的:探讨采用ELISA方法以尿AQP(Aquaporin)-2校正检测肾病综合征尿nephrin podocalyxin排泌,以帮助评估成人肾病综合征的诊断和病情。方法:入组71例经肾穿刺明确病理诊断的成人肾病综合征(NS)患者,包括20例增殖性肾小球疾病的患者,49例非增殖的患者和2例淀粉样变性患者。22例FSGS患者(其中13例确定FSGS亚型诊断)。选取10例健康志愿者作为研究对照组。用ELISA法测定尿nephrin,podocalyxin和AQP-2。以尿AQP2作为内参照校正尿nephrin(neph/AQP)和podocalyxin(PCX/AQP)。结果:尿neph/AQP和PCX/AQP正相关(R=0.616,P<0.001),正常人尿neph/AQP和PCX/AQP显著低于NS患者(P<0.05),增殖和非增殖性肾病综合征患者的尿neph/AQP和PCX/AQP差异无统计学意义(P>0.05),FSGS患者尿neph/AQP和PCX/AQP中显著高于其他NS患者(P<0.05),在IgMN患者尿neph/AQP和PCX/AQP增加,肾淀粉样变性患者的尿neph/AQP和PCX/AQP较少。对13例明确FSGS病理亚型诊断的患者尿neph/AQP和PCX/AQP进行评估,发现各组间差异无统计学意义(P>0.05),但以细胞型FSGS尿neph/AQP排泌最高,NOS型其次,顶端型再次,以脐部型最低。尿PCX/AQP则以细胞型FSGS排泌最高,NOS型其次,脐部型再次,顶端型最低。对于肾病综合征患者FSGS的诊断,ROC曲线分析表明,当尿neph/AQP取临界值为0.165时其灵敏度为0.864,而特异性为0.603,尿PCX/AQP取临界值3.056时其灵敏度为0.773,特异性为0.672。结论:采用ELISA方法的以AQP-2作为内参检测成人肾病综合征尿足nephrin,podocalyxin较为简便。IgMN患者尿neph/AQP和PCX/AQP增高,肾淀粉样变性患者的尿neph/AQP和PCX/AQP较低。FSGS患者尿neph/AQP和PCX/AQP高于其他肾病综合征患者,在FSGS亚型中以细胞型及NOS型稍高于其他亚型FSGS患者,该方法还有助于在临床肾病综合征患者中帮助诊断FSGS。     

健脾消积法对非酒精性脂肪性肝病模型大鼠的抗氧化作用

【目的】探讨健脾消积法对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)模型大鼠的抗氧化机制。【方法】将46只大鼠随机分为正常组(N=10)、模型组(N=8)、阳性对照组(N=9)、中药低剂量组(N=9)、中药高剂量组(N=10)等5组。给予大鼠喂饲高脂饲料诱导NAFLD大鼠模型。自造模第1天起,正常组、模型组大鼠给予等体积生理盐水灌胃,阳性对照组给予复方蛋氨酸胆碱溶液(剂量为0.38 g·kg~(-1)·d~(-1))灌胃,中药低、高剂量组给予加减丹溪枳术丸溶液(剂量分别为18、36 g·kg~(-1)·d~(-1))灌胃,共给药10周。采用常规油红O法观察肝组织形态学改变,采用实时荧光定量PCR检测肝组织核因子NF-E2相关因子(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)、谷氨酰半胱氨酸合酶(γ-glutamylcysteine synthethase,γ-GCS)mRNA表达,采用硫代巴比妥酸法检测肝组织丙二醛(MDA)含量,黄嘌呤氧化酶法检测肝组织超氧化物歧化酶(SOD)含量。【结果】与模型组比较,中药高剂量组大鼠肝脏脂肪变性减轻,Nrf2 mRNA、γ-GCS mRNA表达水平及SOD含量显著升高,MDA含量显著降低(均P0.05或P0.01)。【结论】健脾消积法可有效干预NAFLD大鼠,其机制可能与增强Nrf2、γ-GCS表达,减轻氧化应激有关。     

纤维样肾小球病1例

病例 患者王某某,男,63岁,因＂反复浮肿、尿浊2年,再发1月＂于2013年1月16日收住我科,既往否认糖尿病、高血压、肝炎病史,入院后查体：Bp 171/86 mm Hg,双下肢中度浮肿。入院后完善相关检查：尿蛋白（＋＋）,尿Ig G 669 mg/L,尿转铁蛋白301 mg/L,尿白蛋白3 180 mg/L,尿α1-微球蛋白57.7 mg/L,ANA（-）,ANCA（-）,血红蛋白84g／L,iPTH114pg／ml,丙肝抗体阴性,总蛋白46．2g/L,白蛋白12．8g／L,血糖4．33mmol／L,尿素氮16．8mmol／L,血肌酐172．6μmol／L,尿酸469μmol／L,总胆固醇10．31mmol／L,三酰甘油1．85mmol／L,乙肝表面抗体阳性,24h尿蛋白定量4．77g,肾脏B超示左肾93mm×50mm、右肾105mm×46mm。     

儿童癔症2例报告

癔症在农村虽是一常见病,但学龄期儿童患者较少见,现将所遇2例报告如下。 例1,男,11岁,小学五年级学生。于上体育课时受老师当众体罚,回家后即哭泣落泪,家长问时双手不停的比比划划;指头部,只呀呀作声,不能讲话,反复劝说,寻问,患儿急得满头大汗,仍说不出话来。家长认为鬼神作崇,请来巫医烧纸磕头,