结核病Mtb8.4基因疫苗构建、表达及诱导的细胞免疫应答

目的制备结核病Mtb8.4基因疫苗,并研究其免疫原性。方法克隆结核杆菌新抗原Mtb8.4基因,导入真核表达载体pcDNA3.1( ),构建重组质粒pcDNA3.1( )Mtb8.4,转染COS7细胞后,用RTPCR检测Mtb8.4基因在细胞内正确表达。将Mtb8.4基因疫苗肌肉注射免疫C57BL/6N小鼠,第3次DNA免疫后4周,处死小鼠,制备免疫小鼠脾细胞,脾细胞培养上清检测细胞因子水平;并按效、靶比例分别为100∶1、50∶1、10∶1进行CTL杀伤检测。结果Mtb8.4基因疫苗组免疫小鼠脾细胞培养上清中γ干扰素(IFNγ)和白细胞介素2(IL2)含量分别为787.317±45.586pg/ml和319.953±57.978pg/ml,BCG组分别为1486.540±39.600pg/ml和767.043±50.269pg/ml,BCG组IL4的含量为90.580±10.998pg/ml,明显高于其他各组(P<0.01)。效靶比为100∶1、50∶1、10∶1时,Mtb8.4基因疫苗组的CTL活性分别为55.3%、35.7%、9.2%,BCG组分别为28.9%、21.4%、9.8%。Mtb8.4基因疫苗主要使抗原特异性Th1型细胞免疫应答增强,细胞因子IFNγ和IL2分泌增加,IL4分泌减少,CTL活性增加;而BCG使IFNγ、IL2和IL4分泌均增加。结论结核病Mtb8.4基因疫苗能诱导较强的Th1型细胞免疫应答,可作为结核病的候选疫苗。     

结核杆菌Ag85A与协同刺激分子CD80融合DNA真核表达质粒的构建与鉴定

目的：采用基因重组技术，将结核杆菌Ag85A与协同刺激信号CD80基因融合，构建成融合结核DNA疫苗，旨在提高结核DNA疫苗的免疫效果，可望通过基因免疫，获得免疫原性强，以低剂量即可有效刺激机体产生T细胞和B细胞应答，安全可靠的新型结核病疫苗．方法①pcDNA3-tPA-Ag85A质粒的构建和鉴定以VIJns-tPA-Ag85A质粒为模板，PER扩增tPA-Ag85A，(不含终止密码)，定向插入pcDNA3载体的BamHI和EeoRI位点之间，构建成pcDNA3-tPA-Ag85A质粒。②pcDNA3-tPA-Ag85A／CD80质粒的构建与鉴定以pcDNA3CDS0质粒为模板，扩增CD80(含终止密码)定向插入pcDNA3-tPA-Ag85A质粒的EcoR Ⅰ和Xba Ⅰ位点之间，构建成pcDNA-tPA-Ag85A／CD80融合DNA真核表达质粒。结果：重组质粒pcDNA3-tPA-Ag85A和pcDNA3-tPA-Ag85MCDS0经酶切鉴定和测序鉴定均构建正确。结论：结核杆菌Ag85A与协同刺激分子CD80融合DNA真核表达质粒构建成功，为进一步研究比较其免疫保护效果，研制结核杆菌Ag85A与协同刺激分子CD80融合DNA疫苗打下基础。     

寡核苷酸疗法研究进展

寡核苷酸疗法研究进展钟森，王全立综述张定凤，王玉芝审校随着分子生物学及核酸人工合成技术的迅猛发展，诞生了一种疾病治疗的新方法，即寡核苷酸疗法（Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）。事实上，通过寡核苷酸干扰遗传信息的传递，已经在肿瘤...     

第八届国际子宫内膜异位症学术会议纪要

第八届国际子宫内膜异位症 (内异症 )学术会议于 2 0 0 2年 2月 2 4日至 2 7日在美国圣地亚哥召开。这是自 1986年12年来两年一度的重要专题研讨会 ,与会者逾 6 0 0位 ,表明了学者们的高度关注。中国大陆有 10篇论文被接受为口头报告和壁报展示 ,有 8位妇产科医生 (包括 2位在美访问学者 )参加了会议。会议内容的特点 :(1)临床与基础研究日趋深入 ;(2 )特别重视内异症病人的盆腔疼痛和不育的诊断与处理 ;(3)激素补充疗法、助孕治疗的有关问题 ;(4)与会者除妇科医师外 ,还有内分泌学与内镜专家、基础医学研究者 ,使讨论内容丰富多彩。现将主…     

Meigs综合征2例(附文献复习)

Meigs综合征(Meigs’syndmme)是一种少见的妇科合并症。1937年由Meigs首次进行了正式的描述，表现为卵巢良性实体肿瘤合并胸腹水，当肿瘤被切除后，胸腹水迅速消失。肿瘤类型包括纤维瘤、纤维上皮瘤、泡膜细胞瘤、颗粒细胞瘤、硬化性间质瘤。而其他病理类型的盆腔良性包块合并胸腹水的病例也被不断发现，如卵巢良性畸胎瘤、黏液性囊腺瘤、盆腔血管瘤、子宫平滑肌瘤及输卵管乳头状瘤等，     

鱼王浆对免疫功能低下模型小鼠体重及胸腺的影响

目的 观察鱼王浆对环磷酰胺致免疫功能低下模型小鼠体重、胸腺的影响及量效关系.方法 通过腹腔环磷酰胺强化注射制造免疫功能低下模型小鼠,并随机分为鱼王浆高、中、低剂量组和模型对照组,另设空白对照组.灌胃给药后称小鼠体重、胸腺组织形态的影响,采用HE染色法检测胸腺皮质细胞数及厚度的变化.结果 鱼王浆高、中、低剂量组及空白对照...     

根治性宫颈切除术中淋巴结转移冰冻病理检查准确性的研究

目的:评价根治性宫颈切除术中盆腔淋巴结冰冻病理检查的准确性。方法:2003年12月至2012年2月北京协和医院妇产科收治的育龄期早期宫颈癌患者中共有38例患者要求保留生育功能而接受了根治性宫颈切除术,术中行盆腔淋巴结切除,并送冰冻病理检查,比较术中淋巴结快速冰冻切片及盆腔淋巴结石蜡切片结果。结果:38例患者的术中淋巴结冰冻病理检出4例淋巴结转移阳性,假阴性1例。术中淋巴结冰冻病理的敏感性80%,特异性100%,阴性预测值97%,阳性预测值100%。结论:术中淋巴结冰冻病理能较为准确地判断早期宫颈癌盆腔淋巴结的转移状况,但其可行性和安全性还需要更大样本量的前瞻性病例研究来进一步评价。     

加味茵陈蒿汤对肝损伤大鼠TLR4 mRNA及其蛋白表达的影响

目的:探讨加味茵陈蒿汤对湿热内蕴证大鼠急性肝损伤的治疗作用机制.方法:SPF级SD大鼠,雌性,72只,随机分为空白组、模型组、西药组(复方甘草酸苷)组、中药加味茵陈蒿汤低、中、高剂量组.所有大鼠均适应性喂养在室温15～20℃,相对湿度60％ ～ 80％的实验室7d.7d后给模型组、西药组、中药组予1次性ip D-氨基半乳糖600 mg· kg-1以造成急性肝损伤模型,造模后除模型组外余各组ig给予药物,每日2次,复方甘草酸苷组剂量为15.75 mg· kg-1,加味茵陈蒿汤低、中、高剂量组剂量分别为14.7,29.4,58.8 g·kg-1,空白组予以0.9％的生理盐水ig,灌药体积每次10 mL·kg-1,2次/d,共ig治疗2d.造模48 h后断颈处死动物剖取肝脏,RT-PCR和Western blot法检测肝脏细胞Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR-4) mRNA及其蛋白表达.结果:与正常组比较,模型组大鼠肝脏组织TLR-4mRNA和TLR-4蛋白均有极显著增加(P＜0.01);与模型组比较,加味茵陈蒿汤可显著下调TLR-4 mRNA(P ＜0.01)及TLR-4蛋白(P＜0.01)的表达.结论:加味茵陈蒿汤可通过下调肝脏细胞TLR-4 mRNA及TLR-4蛋白表达有效干预肝脏细胞纤维化病变.     

真核表达质粒pcDNA3-hsp70的构建及鉴定

目的：构建并鉴定真核表达质粒pcDNA3—hsp70。方法：用基因释放刑提取人结核杆菌H37Rv株的基因组作为模板，进行PCR扩增、获得hsp70目的基因后，与pcDNA3载体进行连接重组。结果：pcDNA3—hsp70真核表达质粒构建完成后，用限制性内切酶消化、PCR及DNA序列分析等多种方法进行鉴定，证实其构建成功。结论：pcDNA3—hsp70真核表达质粒的成功构建，为进一步研究该真核表达质粒的免疫保护效果及制备结核病pcDNA3—hsp70DNA疫苗奠定了基础。     

反义寡核苷酸靶向肝细胞体外抗乙型肝炎病毒的实验研究

作者在对２．２．１５细胞中乙型肝炎病毒基因测序的基础上，设计合成了１段针对Ｕ５样序列区的１６－聚硫代磷酸反义寡核苷酸，并将其与直导向性载体－半乳糖化白蛋白和半乳糖化多聚赖氨酸连接，在２．２．１５细胞中观察了它们的抗病毒作用。