腺病毒介导多药耐药基因1保护骨髓的体外实验研究

目的构建表达多药耐药基因1（MDR1）的重组腺病毒载体，体外实验研究MDR1基因对骨髓的保护作用。方法用基因工程技术将MDR1的cDNA亚克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV上，利用PAdEasy系统进行细菌内同源重组，然后通过脂质体将正确重组体包裹并转染293细胞，并在其中包装、扩增、收获病毒。进一步采用PCR方法对重组腺病毒进行鉴定，利用穿梭质粒中所带绿色荧光蛋白GFP报告基因，对病毒滴度进行检测。将收集的重组腺病毒Ad5-MDR1感染小鼠单个核细胞，通过荧光显微镜、免疫组化及流式细胞仪对感染效率及保护作用进行检测，并用Westernblot法检测P-gp的表达。结果酶切鉴定及PCR结果证明多药耐药基因重组腺病毒载体构建成功，病毒滴度达8．3×10^11pfu／ml。对小鼠单个核细胞的感染效率可达10％～15％，转染小鼠单个核细胞48h后，有P-gp蛋白的明显表达。结论成功构建了表达MDR1的重组腺病毒载体，证实MDR转染对骨髓具有保护作用。     

聚焦超声治疗儿童血管病变动物模型的实验研究

目的探讨聚焦超声治疗儿童血管病变动物模型的能效关系及安全性和有效性。方法使用CZP型超声治疗仪样机，选择合适探头焦距，调节功率和时间，对海南灰公鸡鸡冠进行扫描式辐照后，肉眼观察鸡冠及2，3，5-三苯基氯化四氮唑（TTC）染色实验、光镜和电镜下观察和超声多普勒检查鸡冠血管层改变。结果①海南灰公鸡鸡冠和儿童血管病变组织结构相似；②2.6w200S和3．6w120s两种剂量辐照鸡冠，作用表皮下血管层的有效率均为100％，表皮不可逆性损伤发生率分别为0、37．5％；③治疗前后两组海南灰公鸡的采食量、水消耗、体重及肛温均无明显改变（P〉0．05）。结论聚焦超声治疗血管病变动物模型的研究显示其可能成为治疗儿童皮肤皮下血管病变的安全有效的新方法之一。     

儿科医院举行论文报告会

我校儿科系小儿外科教研室于1989年1月6日至7日在儿科医院举行第三届(1988)论文报告会。校、系领导,兄弟科室代表及兄弟院校来宾共三十余人到会指导并进行学术交流。     

外源性人多药耐药基因转染对兔骨髓单个核细胞生物学行为的影响

目的:观察外源性人多药耐药基因(human multidrug resistance gene 1, hMDR1)对新西兰兔骨髓单个核细胞(mononuclear cells, MNCs)生物学行为的影响.方法:用携带目的基因hMDR1和绿色荧光蛋白(green fluorescence protein, GFP)报告基因的复制缺陷型重组腺病毒(rAd-hMDR1-GFP)转染原代培养的MNCs以获取hMDR1基因修饰的MNCs (MNCs-rAd-hMDR1-GFP),荧光显微镜和FCM法检测转染效率;MTT法绘制MNCs-rAd-hMDR1-GFP细胞生长曲线;FCM检测MNCs-rAd-hMDR1-GFP细胞周期及细胞凋亡情况;RT-PCR及Western印迹法从基因和蛋白水平检测MNCs-rAd-hMDR1-GFP细胞内hMDR1的表达;柔红霉素(daunorubicin, DNR)泵出实验检测导入hMDR1基因的外排泵生理功能.结果:感染复数(multiplicity of infection, MOI)为100时,rAd-hMDR1-GFP对MNCs的转染效率为30%～35%,且不影响MNCs增殖生长;FCM结果提示,rAd-hMDR1-GFP对MNCs细胞周期及凋亡无影响(P＞0.05);rAd-hMDR1-GFP转染72 h后hMDR1转录水平和P-糖蛋白(P-glycoprotein, P-gp)表达水平均明显升高(P＜0.01),且外源性hMDR1能发挥外排泵功能(P＜0.01).结论:rAd-hMDR1-GFP能将外源性hMDR1基因高效导入兔骨髓MNCs并稳定功能性表达,不影响MNCs细胞周期、细胞凋亡及细胞增殖生长等生物学特性,为进一步研究hMDR1基因的骨髓保护作用提供实验依据.     

不同年龄增生性瘢痕转化生长因子β1表达的检测及其意义

目的 通过观察不同年龄增生性瘢痕与正常皮肤组织中转化生长因子β1（TGF－β1）的表达初步探讨TGF－β1的表达与增生性瘢痕形成的年龄因素的关系。方法 以增生性瘢为对象，正常皮肤组织为对照，采用SABC免疫组化方法观察1－19岁，20－50岁增生性瘢痕与各年龄组正常皮肤的细胞因子TGF－β1的表达。结果 增生性瘢痕组织的TGF－β1含量显著大于正常皮肤。1－19岁增生性瘢痕组TGF－β1表达较20－50岁增生性瘢痕组的增高差异有显著性意义（P＜0．01）。胎儿皮肤TGF－β1表达低于正常皮肤（P＜0．01）。结论 TGF－β1表达增高是增生性瘢痕形成的原因之一。     

可降解生物材料复合基因强化干细胞移植修复兔关节软骨缺损

目的:在前期成功构建携带有目的基因的质粒载体IRES2-EGFP-hIGF-1基础上,探索使用可吸收生物材料PLGA复合基因强化的同种异体骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)移植修复兔关节软骨缺损的方法.方法:实验于2005-09/2006-01在重庆医科大学儿科研究所完成.①选择3月龄新西兰大耳白兔18只,双下肢髁关节面上共制作4个直径3 mm、深3 mm的全层软骨缺损.自左到右为:空白对照组,PLGA移植组,PLGA-MSCs组(PLGA 空载体转染的MSCs移植),PLGA hIGF-1-MSCs组(PLGA hIGF-1转染的MSCs移植).②分别于术后4,6,12周各处死6只,应用大体观察、组织学观察及组织学评分评估缺损软骨的修复情况、修复组织中hlGF-1和Ⅱ型胶原的表达情况、移植细胞GFP荧光强度等.结果:16只兔进入结果分析,脱落2只.术后12周时,组织切片显示,PLGA HIGF-1-MSCs组新生组织中可见大量类透明软骨细胞出现,Ⅱ型胶原丰富表达:荧光追踪显示PLGA-MSCs组和PLGA hIGF-1-MSCs两组修复组织在4周时仍有可见的GFP表达;PLGA hIGF-1-MSCs组各个时间点组织学评分均高于其他3组(P＜0.05).结论:PLGA与经过hlGF-1基因强化的MSCs复合移植提高了对兔关节软骨缺损的修复效果.     

儿童先天性巨结肠手术的治疗进展

先天性巨结肠是一种以肠道末端肠壁神经节细胞完全缺如为特征的常见消化道发育畸形。该病的病理改变主要在结肠远端痉挛肠段,其特征性组织学改变为肌间神经丛和黏膜下神经丛中缺乏神经节细胞,神经节细胞缺如使得肠段失去间隙性收缩和放松的正常蠕动,神经节细胞缺如还丧失了对副交感神经的调节,直肠环肌不断受到副交感神经兴奋的影响而呈痉挛状态,持续性痉挛的肠段狭窄,粪便通过障碍,近端结肠代偿性扩张与肥厚,形成巨结肠。临床表现为以腹胀、便秘为主的完全性或不完全性功能性肠梗阻。其发病率与先天性肛门、直肠畸形不相上下,目前本病发病率约为1／2000～1／5000,性别发生率有显著差异,男性较女性多见,平均男与女之比为4：1．     

小儿先天性胆总管囊肿

临床资料 1974～1990年17年中我科收治先天性胆总管囊肿140例,年龄最小2月,最大14岁,男41例,女90例。手术治疗79例。诊断主要方法有①临床表现(腹痛、黄疸及腹块)。②上消化道钡餐,主要表现为十二指肠受压,推移及十二指肠圈扩大。③静脉胆道造影,梭形及较小囊肿效果较好。④经皮肝穿胆道造影(PTC)。⑤B超,具有无损伤、简单、准确等优点,为最主要诊断方法。治疗诊断一经确立原则上应行根治手术。本组采用以下手术方法。①单纯外引流术(5例)。②十二指肠或空肠囊肿侧侧吻合术(13例),因不符合生理,并发症多目前已极少采用。③空肠囊肿Roux-Y吻合术(31例),提向囊肿的空肠在距属氏韧带20cm处切断,引流胆汁空肠的长度在15cm     

新生儿软组织感染细菌学及免疫功能观察

软组织感染仍然是新生儿期常见疾病及病死原因。新生儿免疫功能低下在感染的发生及发展中的作用已被公认,但新生儿软组织感染时对患儿体液免疫及细胞免疫功能的观察国内尚未见报告,本文结合73例分析如下。临床资料 1982年6月到1985年6月我儿外科共收治新生儿501例,其中软组织感染127例占