HBV基因组各基因真核表达载体的构建及转染

目的 构建HBV基因组各基因真核表达载体,转染HepG2细胞,建立稳定转染的HepG2细胞系.方法 采用PCR方法,以HBV全基因组质粒为模板扩增HBV基因的各基因片段,利用DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pcDNA3.1( ),经酶切和测序鉴定后,用脂质体转染法转染HepG2细胞,通过G418筛选,建立稳定转染的HepG2细胞系,用细胞流式技术及细胞免疫组化技术检测HBV各基因产物在细胞内的表达.结果 成功构建了pcDNA3.1( )/HBs、pcDNA3.1( )/HBc、pcDNA3.1( )/HBe、pcDNA3.1( )/HBp、pcDNA3.1( )/HB-preS1、pcDNA3.1( )/HB-preS2、pcDNA3.1( )/HBx真核表达载体,并建立了稳定转染的HepG2细胞系,成功地表达目的 基因.结论 真核表达载体成功构建和稳定转染HepG2细胞系的建立为进一步研究各基因的功能奠定良好的实验基础.     

莪术油葡萄糖注射液致严重不良反应2例

1病例报告例1,男,一岁半,因频繁呕吐伴腹泻,于2003年9月15日下午8点入院。入院体检:T37.7℃,精神软,哭有泪,咽充血,扁桃体Ⅱ度红肿,心肺听诊无异常,诊断为急性上呼吸道感染(胃肠型),给予氨苄青霉素及病毒唑治疗,病情有所好转,考虑到患者血液检查WBC及N均不高,为进一步加强抗病毒效果,于9月18日上午11点静脉滴注莪术油葡萄糖注射125ml,滴注约10ml后,患者突然面色青紫,意识丧失,大小便失禁。血压测不到,立即停滴莪术油葡萄糖注射液,静脉滴注副肾上腺素半支,地塞米松5mg,同时吸氧,吸痰。但血压仍测不到,再静推副肾上腺素半支,多巴胺、间羟胺1…     

定喘颗粒毒理学研究

目的 观察小鼠和大鼠分别灌胃给予定喘颗粒的急性毒性作用和长期毒性作用.方法 采用Bliss法测定小鼠灌胃定喘颗粒的LD50以及大鼠连续灌胃定喘颗粒60 d,观察给药60 d的生长、发育,血液学,血液生化学,组织病理变化及停药21 d时上述指标的变化.结果 昆明种小鼠灌胃定喘颗粒的LD50为171.09 g/kg.定喘颗粒大鼠给药60 d的毒性试验,剂量分别为72.6,36.3,18.2 g/kg(指含生药量,下同)(相当于临床50 kg人用量的52.6,26.3和13.2倍),给药期间各组大鼠毛色、活动、二便均无异常变化,但给药组大鼠摄食、饮水、体重以及部分血液学、血液生化学指标和脏器系数有异常变化,停药后,上述异常变化指标均已恢复正常.给药期和恢复期重要脏器病理组织检查均未发现明显异常变化.结论 定喘颗粒小鼠灌胃的LD50为171.09 g/kg;长期毒性研究表明,长期大剂量灌胃给予定喘颗粒对大鼠有一定毒性,但停药后均已恢复.     

双橘颗粒药效学实验研究

目的 探讨双橘颗粒对SD大鼠和家兔乳腺增生的作用.方法 1）大鼠乳腺增生模型：取SD大鼠肌肉注射苯甲酸雌二醇0.5 mg/kg制作乳腺增生模型后,连续给双橘颗粒30 d,末次给药后1 h腹主动脉采血5 ml测定血清雌二醇、孕酮的含量,并取乳腺组织进行病理组织学检查;2）大鼠足肿胀模型：取SD大鼠连续给药10 d,末次给药后1 h左足爪中部皮下注射10%鸡蛋清0.1 ml,然后于0.5、1、2、4、6 h测量同一部位大鼠足肿胀度;3）家兔乳腺增生模型：取未孕雌性家兔,肌肉注射苯甲酸雌二醇0.2 mg/kg,每天1次,连续25 d,随后肌肉注射黄体酮1 mg/kg,每天1次,连续5 d;从造模第5天起,双橘颗粒组和乳增宁片组灌胃相应浓度药液连续给药30 d,末次给药后1 h,心脏采血5 ml,测血清雌二醇、孕酮含量.另取第2对完整的乳房,进行病理组织学检查.结果 1）SD大鼠注射雌激素后,乳房明显肿胀,乳头明显增高等现象.双橘颗粒各剂量组皆能降低乳头高度,与模型组比较,差异具有显著性（P〈0.05）;与空白对照组比较,乳腺增生模型组动物血清雌二醇含量明显升高,孕酮含量明显降低.双橘颗粒10.0、3.0 g/kg剂量组能降低血清雌二醇含量,与模型组比较,有显著性意义（P〈0.05）,双橘颗粒各剂量组小叶缩小,腺泡数减少,腺泡腔和腺导管腔扩张不明显,分泌物减少,与模型组比较,有显著性意义（P〈0.05）.2）SD大鼠足肿胀模型与空白对照组比较,模型组动物注射鸡蛋清后0.5、1、2、4、6 h,其左足注射部位肿胀明显,在0.5、1 h达到高峰,其后肿胀变轻,但至6 h仍未消退.双橘颗粒各剂量组有减轻足肿胀的作用,但1.0g/kg剂量组作用较弱,10.0、3.0 g/kg剂量组作用较明显,其各时间段足肿胀度与模型组比较,差异具有显著性或非常显著性意义（P〈0.05或0.01）.3）家兔乳腺增生模型血清性激素水平与空白对照组比较,乳腺增生模型组动物血清雌二醇含量明显升高,孕酮含量明显降低.双橘颗粒5.0、1.5、0.5 g/kg剂量组能降低血清雌二醇含量,升高血清中孕酮,与模型组比较,差异具有显著性意义（P〈0.05）.对乳腺组织增生病理改变均有明显的改善作用.结论 双橘颗粒对实验性大鼠及家兔乳腺增生具有较好的防治作用.     

高度近视准分子激光原位角膜磨镶术后干眼症临床分析

目的了解高度近视患者行准分子激光原位角膜磨镶术(LASIK)术后干眼症状及相关指标的变化。方法84例(168只眼)高度近视患者行LASIK手术,分别观察术前、术后1周、1个月、2个月、3个月及6个月的干眼症状,包括干涩感、异物感等,并行角膜荧光素染色,记录泪液分泌量(SchirmerⅠ试验)和泪膜破裂时间(BUT),对数据进行统计学分析。结果术后1周至2个月干眼症状明显加重(p<0.01),直至3个月角膜荧光素染色仍较术前明显增加(p<0.05)。术后1周至3个月泪液分泌量较术前明显减少(p<0.01),术后1周至2个月BUT较术前明显缩短(p<0.01)。而术后1周有56眼(33.33%)达到干眼症诊断标准,术后一个月为61眼(40.39%),术后3个月恢复正常。结论高度近视LASIK术后发生干眼症为常见并发症,临床上应采取相应预防和治疗措施,降低干眼症发生率,减少其危害。     

炙甘草汤对大鼠心房肌细胞L型钙电流及其动力学特征的影响

目的：研究炙甘草汤对大鼠心房肌细胞L型钙电流(I_Ca-L)及其动力学特征的影响。方法：选取24只大鼠随机分为空白对照组和炙甘草汤低剂量组(1.125 g/mL)、中剂量组(2.25 g/mL)、高剂量组(4.5 g/mL),每组6只。3组药物组大鼠分别按各自浓度给予相同体积的炙甘草汤药液灌胃,对照组大鼠予以等体积生理盐水灌胃。给药1周后利用酶解法对4组大鼠心房肌细胞进行急性分离,用全细胞膜片钳技术记录4组心房肌细胞I_Ca-L并比较I-V曲线,选取中剂量组与对照组的心房肌细胞比较I_Ca-L通道的动力学特征。结果：与对照组比较,炙甘草汤低、中、高剂量组的大鼠心房肌细胞I_Ca-L均发生不同程度的抑制效果,I-V曲线均上移。观察比较中剂量药物组与对照组的I_Ca-L通道动力学特征,发现2组细胞的激活曲线和半数激活电压,差异无统计学意义(P>0.05),但中剂量药物组细胞的稳态失活曲线发生向右偏移,半数失活电压V_1/2升高(P<0.05),失活后恢复曲线向...     

人BclGL基因siRNA逆转录病毒的制备及其对T淋巴细胞增殖的影响

目的:制备表达针对BclGL基因的siRNA逆转录病毒,研究其对体外培养Jurkat细胞中BclGL基因的沉默效应及Jurkat细胞增殖的影响.方法: 利用siRNA预测软件获取3条siRNA 编码序列,插入pSilencer 5.1-H1构建重组逆转录病毒siRNA表达质粒,脂质体法转染PT67细胞包装重组逆转录病毒pSilencer 5.1-H1-BclGL,体外感染Jurkat细胞,嘌呤霉素筛选病毒感染阳性细胞克隆,实时定量 PCR 及 Western 验证干扰效率;CCK-8法体外检测BclGL基因沉默后Jurkat细胞的增殖能力.结果: 酶切及测序结果证实,表达siRNA的逆转录病毒构建成功,重组病毒表达的siRNA能有效干扰Jurkat细胞内BclGL基因的表达;BclGL表达下调可增强Jurkat细胞的增殖能力ela.结论: 成功制备了表达人BclGL基因 siRNA的重组逆转录病毒,并证实其对Jurkat细胞的生长抑制效应.     

LASIK后弥漫性板层角膜炎的临床分析

Objective To study the causes,clinical features and prevention measures of diffuse lamel-lar keratitis (DLK)after LASIK. Methods Eleven patients ( 17 eyes) with DLK after LASIK among 199 pa-floats (398 eyes) from March 2007 to December 2007 were selected as observation group,and after the strict checks on operating room environment,pressure sterilizer,surgical instrument disinfection,preoperative con-junctival sac clean and corneal epithelium protection,5 patients (7 eyes) with DLK after LASIK among 148 patients (296 eyes) from December 2007 to May 2008 were selected as control group. Each stage's complex,clinical features and treatment process of DLK were analyzed. Results The incidence rate of DLK in obser-vation group was 4.27%,among which,stage Ⅰ was 3.01%,stage Ⅱ was 0.5% and stage Ⅳ (3 eyes) was 0.75%. The incidence rate of DLK in control group was 2.36%,among which,stage Ⅰ was 1.68% and stage Ⅱ was 0.67%. DLK of stage Ⅰ and stage Ⅱ happened 1～3 days after LASIK,it absorbed entirely after 7～10 days'treatment, and vision rocovered to normal. DLK of stage Ⅳ happened 3～7 days after LASIK, relatively white dense opacity under the lamellar of central cornea and flap melt could be seen through slit lamp. High hyperme-tropia was left after healing. Hypermetropia decreased partly after 3～6 months, and vision recovered to 0.6～1.0. Conclusion The occurrence of DLK after LASIK is related with multifactors. DLK can be prevented by the strict checks on each link of the operation and cured better if it is treated in time.     

西地碘含片口腔黏膜刺激性试验

目的:观察西地碘含片对金黄地鼠口腔黏膜的刺激性.方法:将金黄地鼠随机分为4组,分别为西地碘含片完整黏膜组,西地碘含片破损黏膜组,赋形剂完整黏膜组,赋形剂破损黏膜组,每组6只,经口腔黏膜给药7 d后作大体观察评价和组织学评价.结果:大体观察显示西地碘含片对金黄地鼠的口腔完整黏膜和破损黏膜均无刺激性;病理组织学检查显示西地碘含片对完整黏膜和破损黏膜均不产生炎症等病理学改变;病理组织学评分显示西地碘含片对完整黏膜和破损黏膜均无刺激性.结论:西地碘含片对金黄地鼠的口腔黏膜无刺激性.     

低场强MRI T2^＊ WI FFE序列在颅脑血管性及出血性疾病中的应用研究

目的：探讨低场强MRI T2＊WI FFE序列成像在颅脑血管性及出血性病变检查中的敏感性。方法：分析110例临床可疑颅脑出血患者的常规MRI序列,包括自旋回波（SE）T1WI、快速自旋回波（TSE）T2WI、液体衰减反转恢复序列（T2-FLAIR）,以及T2＊快速场回波序列（T2＊WI FFE）资料,比较常规序列、T2＊WI FFE序列对颅脑出血病灶的显示率,分析其信号特征,并探讨T2＊WIFFE序列的可行性。结果：T2＊WI FFE序列为显示颅脑出血灶最敏感的序列,能显示常规序列所不能显示的脑微出血。无论在检出脑出血灶,还是图像信噪比,T2＊WI FFE均能满足临床需求。结论：低场强MRI T2＊WI FFE序列能明显提高颅脑出血灶的检出率,进而提高颅脑血管性及出血性疾病的早期诊断率。其在临床颅脑出血筛选方面具有常规MRI序列无法替代的作用。