MG132对高糖条件下肾小管上皮细胞SnoN蛋白表达及纤维化效应的影响

目的:观察蛋白酶体抑制剂MG132对高糖培养条件下肾小管上皮细胞核转录共抑制因子Sno N蛋白表达的影响,探讨MG132减轻高糖状态下肾小管纤维化病变的作用及可能机制。方法:将体外培养的NRK-52E细胞分为正常组(NG)、高糖组(HG)和不同浓度MG132预处理后高糖培养组(HG+MG132),采用免疫荧光双染的方法观察E-钙黏蛋白(E-cadherin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在肾小管上皮细胞中的表达和分布,用Western blotting方法检测Sno N、Samd泛素化调节因子2(Smurf2)、Arkadia、E-cadherin、α-SMA和Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)等目标蛋白的相对表达量。结果:与NG组相比,HG组肾小管上皮细胞E-cadherin和Sno N表达减少(P0.05),而α-SMA、Col-Ⅰ、Smurf2和Arkadia表达增多(P0.05);与HG组相比,不同浓度MG132预处理肾小管上皮细胞后高糖培养,可见肾小管上皮细胞中Sno N和E-cadherin蛋白表达显著上调(P0.05),而α-SMA和Col-Ⅰ蛋白的表达显著下调(P0.05),并且这种效应呈量效依赖性,但MG132预处理对Smurf2和Arkadia的表达无影响。结论:MG132可对抗高糖介导的肾小管上皮细胞的纤维化效应,其机制可能是通过减少Sno N蛋白的泛素化降解作用实现的。     

在生理实验教学中开展拓展性试验的体会

生理学是医学基础课程中的一门重要学科,同时也是沟通基础医学与临床医学之间重要的桥梁学科。它的所有知识都来源于实验研究和临床实践,所以生理学是一门理论抽象且实践性很强的学科[1],其课程实验是培养学生思维能力、创新能力和科研能力的基石[2-3]。     

E3泛素连接酶APC对糖尿病大鼠肾组织SnoN蛋白表达的影响

目的：观察APC10在糖尿病大鼠肾组织中的表达变化,并初步探讨其与糖尿病肾病（DN）发生发展中SnoN蛋白表达变化的关系。方法：大鼠随机分为糖尿病2、4和8周组,每组均设鼠龄匹配的正常对照组;生化方法测血糖、血肌酐和24 h尿蛋白,并观察肾脏指数;免疫组织化学检测APC10、核转录共抑制因子SnoN（SnoN）、转化生长因子-β1（TGF-β1）、Smad2/3及链脲佐菌素（FN）蛋白的表达变化;RT-PCR检测SnoNmRNA的表达。结果：APC10阳性染色见于各组大鼠肾小管,随DN病程进展其表达逐渐增多,SnoN蛋白表达逐渐减少,TGF-β1、Smad2/3及FN蛋白亦随DN发展而增多;各时点糖尿病大鼠SnoN mRNA的表达与正常对照组相比差异无统计学意义。结论：APC10在DN发生发展中的表达增多可能介导了SnoN蛋白的泛素化降解,可能是SnoN蛋白表达减少的主要机制之一。     

显微镜与显微内窥镜下微创手术治疗腰椎间盘突出症的疗效比较

目的:比较显微镜下腰椎间盘切除术(MSLD)与显微内窥镜下椎间盘切除术(MED)治疗单节段腰椎间盘突出症(LDH)的疗效.方法:2006年4月～2007年10月收治单节段LDH患者278例,随机分为两组,其中148例采用MSLD治疗,130例采用MED治疗.比较两种手术的切口长度,手术时间、并发症、住院天数,手术后VAS、SF-36量表躯体疼痛评分、ODI改善率和改良MacNab评分情况.结果:MSLD组及MED组的切口长度分别为4.5±1.5cm和2.5±0.8cm.手术时间分别为40.0±13.8min和56.0±15.9min,两组间均有显著性差异(P<0.05);术中出血量分别为96±77ml和111±45ml、住院天数分别为9.4±2.6d和9.8±2.8d,两组间均无显著性差异(P>0.05).MSLD组及MED组随访时间分别为平均18.3个月和18个月,未次随访时MSLD组及MED组的VAS改善率分别为(85.3±1.8)%和(84.5±2.1)%,SF-36量表躯体疼痛评分改善率分别为(81.3±5.6)%和(80.1±6.1)%,ODI改善率分别为(85.3±1.8)%和(82.3±2.0)%,改良MacNab评分优良率分别为94.0%和93.7%,两组间比较均无显著性差异(P>0.05).MSLD组及MED组并发症分别为:腹部不适14例(9.46%)和12例(9.23%)、急性尿潴留21例(14.19%)和18例(13.84%),两组比较均无显著性差异(P>0.05);硬脊膜撕裂0例和2例(1.54%)、急性竖脊肌血肿2例(1.36%)和5例(3.85%),MSLD组明显少于MED组(P<0.01).结论:MSLD与MED治疗单节段腰椎间盘突出症均可取得满意疗效,但MSLD操作简便、并发症少,是目前更为理想的微创手术方法.     

腺病毒载体搭载的TIMP-3基因对兔椎间盘基质的调节作用

[目的]考察腺病毒载体搭载的重组人组织金属蛋白酶抑制因子-3基因(RAdTIMP-3)转染兔椎间盘后对椎间盘内主要基质成分质量的影响,并探讨其用于椎间盘退变治疗的可行性.[方法]扩增Lac-Z基因标记的RAdTIMP-3和重组腺病毒载体RAd66,并进行纯化、鉴定及滴度测定.将30只日本大白兔随机分入5组,分别向L4、5、L5、6椎间盘内注射生理盐水(第1组)、1.0×1010OPU/mlRAd66(第2组)以及1.0×1010OPU/mlRAdTIMP-3(第3、4、5组)各25 μl.各组分别于注射后2、2、1、2、4周收集标本,X-gal染色检测转染效率,RT-PCR检测TIMP-3及聚集蛋白聚糖核心蛋白的表达,TIMP-3及H型胶原免疫组化染色、藏红O-快绿染色及Tunel染色考察转染对椎间盘基质的调控作用.[结果](1)RAdTIMP-3经扩增和纯化后浓度可达1.9×10TM OPU/ml.(2)RT-PCR显示,3、4、5组TIMP-3基因表达均较1、2组明显增加,3、4、5组核心蛋白基因表达较1、2组略有增强.(3)Tunel染色显示各组凋亡细胞比例无明显差异.(4)第5组藏红O-快绿染色及II型胶原免疫组化染色染色强度均好于1、2组.[结论]RAdTIMP-3能够广泛而安全地在兔椎间盘内表达,并改善椎间盘基质成分的质和量,具备用于椎间盘退变治疗的潜力.     

急性胆囊炎31例外科治疗体会

目的探讨急性胆囊炎手术治疗的措施、时机及方式。方法回顾性分析2001年1月至2006年12月,笔者所在医院31例急性胆囊炎手术治疗的患者的临床资料。结果术后并发胆瘘1例、伤151感染3例、胆管炎1例,治愈29例,好转2例,无死亡病例。结论对急性胆囊炎的治疗,应持积极的态度。明确手术指征、把握好手术时机、围手术期的合理处理及手术技巧是保证手术顺利成功的重要因素。     

中药复方对糖尿病大鼠肾小管PKCα和ERK1/2表达的影响

目的观察自拟的中药复方对糖尿病(DM)大鼠肾小管蛋白激酶Cα(PKCα)和细胞外信号调节激酶(ERK1/2)表达的影响,探讨其防治糖尿病肾病(DN)的药理机制。方法雄性SD大鼠随机分为5组:正常对照组(N组),糖尿病组(D组),中药复方1号治疗组(Y1组),中药复方2号治疗组(Y2组),依那普利治疗组(E组)。尾静脉注射链脲佐菌素(55mg/kg)复制DM动物模型。实验12周时处死大鼠,生化方法测血糖、24h尿蛋白、血肌酐、甘油三酯、胆固醇;光镜观察肾组织的形态结构变化;免疫组化检测肾组织PKCα、TGF-β1、FN、ERK1/2蛋白表达情况;RT-PCR法检测大鼠肾皮质ERK2mRNA水平。结果 D组大鼠血糖、24 h尿蛋白、血肌酐、甘油三酯和胆固醇较N组显著升高,药物治疗组的24 h尿蛋白均较D组显著降低,Y1、Y2组的甘油三酯、胆固醇比D组显著降低,而Y1组和E组的血肌酐显著低于D组;D组大鼠出现明显的肾脏形态学异常改变,而Y1、Y2组和E组病变明显减轻;免疫组化结果显示,与N组相比,D组大鼠肾组织PKCα、ERK1/2、TGF-β1、FN表达显著增高,Y1、Y2组和E组较D组明显降低;RT-PCR结果显示D组大鼠肾皮质ERK2mRNA表达较N组显著增多,Y1、Y2组和E组ERK2mRNA的表达较D组均显著下调。结论中药复方和依那普利可能通过抑制PKCα-ERK1/2信号通路而下调TGF-β1的过度表达,使FN的生成减少,从而对糖尿病大鼠肾脏起保护作用。     

天麻素注射液治疗眩晕81例临床观察

目的：观察天麻素注射液治疗眩晕的疗效。方法：81例患者,分为虚证组、实证组,均给予天麻素注射液600mg静滴,10d为1个疗程。结果：两组均有明确的疗效。结论：天麻素注射液治疗血管神经性头痛眩晕有明显效果。     

胱天蛋白酶Caspaes-3在子宫内膜癌中的表达及意义

目的研究胱天蛋白酶Caspase-3在子宫内膜癌中的表达,探讨子宫内膜癌的病因及发病机制。方法选取子宫内膜癌组织（组织学分级G1组16例、G2组27例、G3组8例）,子宫内膜非典型增生组织21例,正常子宫内膜组织10例。用免疫组化S-P法检测Caspase-3在子宫内膜癌组、子宫内膜非典型增生组和正常子宫内膜组中的表达。结果 Caspase-3在子宫内膜癌组和子宫内膜非典型增生组的表达明显低于正常子宫内膜组（P〈0.01）,在子宫内膜癌中G2、G3组的表达低于G1组,差异有显著意义（P〈0.05,P〈0.01）。结论 Caspase-3的低表达可能促使细胞抗凋亡能力增强,导致细胞凋亡不足增殖过度,可能是子宫内膜癌发病机制之一。     

糖尿病大鼠肾小管BMP-7和p38 MAPK表达关系的研究

蛋白和mRNA的表达较N组低,至24周时BMP-7蛋白仍有少量表达但mRNA无表达,DMT组表达显著增多;p-p38MAPK蛋白于N组无表达,DM组显著增多,8周时达高峰,DMT组则显著减少;α-SMA开始表达于DM 16周组,而DMT组无表达.24周DM组和DMT组BMP-7蛋白表达与24h尿蛋白、肾脏指数、α-SMA、FN和p-p38MAPK呈显著负相关.结论 BMP-7与p38MAPK之间可能相互调节,共同参与糖尿病肾病的发生发展过程.