难辨梭菌101株的分离鉴定

我们从病人粪便和地鼠粪中分离出难辨梭菌101株。对该茵的形态、培养、生理及生化特征做了观察,与文献报道一致。但只有16株产毒。与参考株一起对部分菌株作了DNA GC值及DNA-DNA分子杂交率测定,测得值的范围分别为26.8～27.6％及81.5～113.6％。这些结果与难辨梭菌符合。     

甘肃省58株鼠疫菌基因分型及地理分布的研究

本研究采用差异区段(different regions,DFR)方法对分离自甘肃省鼠疫疫源地的58株鼠疫菌进行基因分型,分析其地理分布.     

小鼠吸入性鼠疫病理学和毒力相关基因的体内转录

目的探讨吸入感染鼠疫的发生、发展过程及重要鼠疫菌致病相关基因的体内表达规律。方法采用滴鼻法建立小鼠吸入性鼠疫感染模型,并观察不同感染时间的组织病理学改变;采用免疫组化和逆转录一实时定量PCR方法检测感染小鼠组织中鼠疫菌5种毒力相关蛋白及其基因（cafl、lcrV、lcrG、pla、psaA）的表达和转录。结果鼠疫菌吸入后可诱导小鼠产生肺鼠疫型和非肺鼠疫型鼠疫。在小鼠体内感染状态下的鼠疫菌体表面能够检测到上述5种毒力相关蛋白的表达。其毒力基因的转录呈时相、组织差异性。结论在体内感染状态下,5种毒力相关蛋白均呈菌体表面可检测到的表达;各毒力相关基因在不同时间、不同组织中转录具有很大的差异性,这种差异性可能与其功能及宿主细胞的作用密切相关。     

聚合酶链反应-微孔板杂交技术用于结核分枝杆菌的检测

目的建立结核分枝杆菌的ＰＣＲ酶联免疫吸附测定（ＥＬＩＳＡ）方法，使ＰＣＲ结果判定更加客观。方法我们使用玻璃粉吸附提纯模板ＤＮＡ，将ＰＣＲ引物５′端标记生物素，用ＰＣＲ产物与微孔板中预先包被的克隆靶基因杂交，然后用酶标链霉亲和素与杂交体中的生物素结合，最后用酶底物与所标记酶进行显色反应，通过测定其吸光度来判断结果。结果所建立的ＰＣＲＥＬＩＳＡ检测法可提高检测的灵敏度和特异性。对５０份来自结核病人高度怀疑有结核分枝杆菌的标本检测表明，ＰＣＲＥＬＩＳＡ检出２２份阳性，比抗酸染色法（７／５０）、培养法（１３／５０）和ＰＣＲ电泳法（１８／５０）检出率高，而２０份证实无结核分枝杆菌的标本，几种方法检查均为阴性。结论该法可敏感、特异和客观地检测临床标本中的结核分枝杆菌。     

鼠疫耶尔森菌感染动物血清标本中10种抗体检测与分析

目的 分析鼠疫耶尔森菌(Y.pestis)感染动物血清标本中鼠疫抗体的分布规律,寻找新的鼠疫血清学辅助诊断靶标.方法 采用自制的酶联免疫吸附试验板条检测不同种属的Y.pestis感染动物血清标本(狗血清5例、羊血清5例及黄鼠血清14例)中的10种靶标抗体.结果 各靶标抗体在3种不同种属动物血清标本中具有不同的阳性率;抗FI抗体阳性率最高(100.0%),抗YopD抗体的阳性率较高(狗、羊和黄鼠血清标本的阳性率分别为80.0%、100.0%和78.6%),针对LcrV、YPO1089、YPO1613、YPO2131、YPO2118、YPO1435这6个蛋白的抗体在3种血清标本中的阳性率差异较大,抗YPO3827抗体和抗YPO1303抗体在3种血清标本中的阳性率均较低.结论 除抗FI抗体外,针对其他抗原的抗体的分布均存在种属差异,抗YopD抗体有可能成为新的Y.pestis感染辅助诊断靶标.     

多重PCR快速鉴定鼠疫耶尔森氏菌

目的　建立鼠疫耶尔森氏菌多重PCR鉴定系统 ,用于鼠疫耶尔森氏菌的快速鉴定。方法　针对分别存在于pFra、pRst质粒上毒力基因caf1和pla ,以及一段 2 76bp染色体序列 3a分别设计引物。采用多重PCR技术 ,同时检测caf1、pla、3a三个靶序列。结果　应用该多重PCR反应体系 ,对我国鼠疫耶尔森氏菌 17个生态型及新发现的青海田鼠鼠疫疫源地菌株的多重PCR扩增结果表明 ,实验菌株中除 2株分别缺失pFra、pPst质粒而扩增出 2条产物带外 ,其余 5 2株均扩增出预期的 3条产物带 ,相关菌株均阴性 ,其检测灵敏度为 1× 10 -4ngDNA。 结论　该方法用于鼠疫耶尔森氏菌的鉴定简便、快捷 ,具有很高的特异性和敏感性 ,为鼠疫耶尔森氏菌的快速鉴定提供了有力手段     

鼠疫耶尔森菌菌株91001的蛋白质组学初步研究

目的建立鼠疫耶尔森菌的蛋白质组学研究方法,获得鼠疫耶尔森菌的基本蛋白质组数据。方法以对人无致病能力的布氏田鼠疫源地菌株91001为研究对象,按照溶解性的不同分别收集菌体蛋白,以3种不同方法(Shotgun-LC-MS-MS,1D-LC-MS-MS和2D-MS)进行分析,将分析数据与基于91001菌株基因组全序列建立的蛋白质理论数据库进行比对,确定91001菌株本实验培养条件下所表达的蛋白组分。结果Shotgun-LC-MS-MS方法鉴定了971种蛋白,1D-LC-MS-MS鉴定了915种,而2D-MS方法则鉴定了233种蛋白质,三者合计为1193种蛋白质,占基因组预测CDS的28．7％(1193／4143)。结论不同的蛋白质组分析方法鉴定的蛋白质种类和数目都存在差异,为更全面地获得鼠疫耶尔森菌蛋白质组数据,有必要同时采取多种方法进行分析。     

鼠疫耶尔森菌基因组进化与生态位适应研究

目的 探索鼠疫耶尔森菌基因组进化的基本规律及其与该菌在自然界适应性演化之间的内在联系。方法 对36株鼠疫耶尔森菌和7株假结核耶尔森菌进行芯片比较基因组分析,鉴定差异区段(DFR),并对260株鼠疫耶尔森菌进行PCR验证,分析各DFR在这些鼠疫耶尔森菌中的分布,同时进行基因组岛分析。结果 在鼠疫耶尔森菌基因组中鉴定出22个DFR,基于DFR图谱,将鼠疫耶尔森菌中国分离株分成14个基因组型。鼠疫耶尔森菌共有21个基因组岛,其中18个已存在于假结核杆菌中,余下3个为鼠疫耶尔森菌独有。结论 探明了各基因组岛在鼠疫耶尔森菌和假结核耶尔森菌间的差异分布,探究了鼠疫耶尔森菌的起源进化;建立了鼠疫耶尔森菌基因组分型系统;建立了各基因组型别间的系统发育关系,初步揭示了鼠疫耶尔森菌基因组的进化规律及其与鼠疫耶尔森菌生态位适应和鼠疫疫源地扩展之间的关系,基本探明了鼠疫耶尔森菌在中国的演化规律。     

牛摩拉氏菌中国地方株限制性核酸内切酶的提取与纯化

目的：为探讨牛摩拉氏菌中国地方株MABL8011限制酶的存在。方法：采用改进的GelinasRE等方法对MABL8011菌株的培养物分别进行超声裂解、离心、盐析、BioGel-A0.5M和磷酸纤维素P11柱层析。获得可切割λDNA和pBR332DNA与国际标准酶MboI切点一致的酶提取物。结果：在改进的条件下,3000ml培养物,可获得7200UMboI,纯化率为23.2%,酶产出量高于文献报导值。结论：表明牛摩拉氏菌中国地方株MAL8011确含MboI限制性内切酶,完全可用于基因结构分析。     

嗜肺军团菌毒力岛基因聚合酶链反应分型鉴定

目的建立嗜肺军团菌毒力岛基因分型鉴定方法，探讨其致病特性和分布状况。方法根据GenBank公布的嗜肺军团菌核苷酸序列设计和合成嗜肺军团菌种和毒力岛基因鉴定引物，采用PCR法对25株军团菌属标准参考株，3株国内和20株广东分离嗜肺军团菌，53份临床标本和57份水样、进行嗜肺军团菌种和毒力岛基因分型鉴定。结果5株嗜肺军团菌标准株只有嗜肺军团菌1型（Philadelphia-1 ATCC 33152）12个毒力岛基因全阳性，其他4株只检出11个毒力岛基因。20株军团菌属中其他菌株，分别检出2—11个毒力岛基因；3株国内嗜肺军团菌检出11个毒力岛基因；广东地区分离的20株嗜肺军团菌，7株检出12个毒力岛基因，12株检出11个毒力岛基因，1株未检到毒力岛基因。53例病源不明性肺炎患者支气管洗液和痰液，PCR检测嗜肺军团菌DNA阳性5例（9．4％）。结论广东地区嗜肺军团菌广泛存在水源环境中，而且是医院感染性肺炎的重要病源之一。不同血清型嗜肺军团菌所含毒力岛基因不同，毒力岛基因与致病性相关。