甘肃省58株鼠疫菌基因分型及地理分布的研究

本研究采用差异区段(different regions,DFR)方法对分离自甘肃省鼠疫疫源地的58株鼠疫菌进行基因分型,分析其地理分布.     

应用核酸探针检测痢疾杆菌侵袭力的初步报告

采用菌落原位杂交法,用福氏5型痢疾杆菌大质粒上17Kb 基因片段,以32p 标记制备成探针,对80例痢疾志贺氏菌的侵袭力进行检测,结果带菌者菌株中侵袭力的阳性率92.8%,90.9%,病人菌株中袭力的阳性率侵P>0.05,两组菌的侵袭力差异无显著性。通过不同菌群侵袭力的分析,福氏痢疾杆菌侵袭力的阳性率似高于其他菌群,该探针特异、敏感、快速、经济,为硷测痢疾菌侵袭力的理想方法。     

椰毒假单胞菌酵米面亚种鸟嘌呤和胞嘧啶含量的测定及2种测定方法的比较

利用复性速率法（Ｔｍ值法）和高效液相色谱法（ＨＰＬＣ法）对生化性状比较相近的椰毒假单胞菌酵米面亚种、唐菖蒲伯克霍尔德低菌和椰毒伯克霍尔德氏菌共７个菌株的鸟嘌呤（Ｇ）和胞嘧啶（Ｃ）摩尔百分含量（Ｇ＋Ｃ）％进行测定,并对这２种方法做了对比研究。结果发现,３个种的７个菌株的（Ｇ＋Ｃ）％比较接近,不能否定这３个种的细菌属于同一个种。另外,ＨＰＬＣ法比Ｔｍ值法的准确性好,但重复性不如后者。     

小鼠吸入性鼠疫病理学和毒力相关基因的体内转录

目的探讨吸入感染鼠疫的发生、发展过程及重要鼠疫菌致病相关基因的体内表达规律。方法采用滴鼻法建立小鼠吸入性鼠疫感染模型,并观察不同感染时间的组织病理学改变;采用免疫组化和逆转录一实时定量PCR方法检测感染小鼠组织中鼠疫菌5种毒力相关蛋白及其基因（cafl、lcrV、lcrG、pla、psaA）的表达和转录。结果鼠疫菌吸入后可诱导小鼠产生肺鼠疫型和非肺鼠疫型鼠疫。在小鼠体内感染状态下的鼠疫菌体表面能够检测到上述5种毒力相关蛋白的表达。其毒力基因的转录呈时相、组织差异性。结论在体内感染状态下,5种毒力相关蛋白均呈菌体表面可检测到的表达;各毒力相关基因在不同时间、不同组织中转录具有很大的差异性,这种差异性可能与其功能及宿主细胞的作用密切相关。     

难辨梭菌101株的分离鉴定

我们从病人粪便和地鼠粪中分离出难辨梭菌101株。对该茵的形态、培养、生理及生化特征做了观察,与文献报道一致。但只有16株产毒。与参考株一起对部分菌株作了DNA GC值及DNA-DNA分子杂交率测定,测得值的范围分别为26.8～27.6％及81.5～113.6％。这些结果与难辨梭菌符合。     

产志贺样毒素大肠埃希菌的分子生物学鉴定

目的　探讨产志贺样毒素大肠埃希菌（ Ｓ Ｌ Ｔ Ｅ Ｃ） 在小儿腹泻中的病原学地位。方法　根据肠出血性大肠埃希菌（ Ｅ Ｈ Ｅ Ｃ） Ｏ１５７ ： Ｈ７ 的 Ｓ Ｌ Ｔ１ 、 Ｓ Ｌ Ｔ２ 、ｅａｅ Ａ 基因片段设计了３ 对引物,采用聚合酶链反应检测大肠埃希菌中 Ｓ Ｌ Ｔ１ 、 Ｓ Ｌ Ｔ２ 和ｅａｅ Ａ 毒力基因。结果　２９ 株标准致泻大肠埃希菌（ Ｅ Ｈ Ｅ Ｃ、 Ｅ Ｐ Ｅ Ｃ、 Ｅ Ｔ Ｅ Ｃ） 和１０ 株其他肠道病原菌中,只有１ 株 Ｅ Ｈ Ｅ Ｃ检出 Ｓ Ｌ Ｔ１ 、 Ｓ Ｌ Ｔ２ 、ｅａｅ Ａ 毒力基因,其他均为阴性。从１ ０３２ 例腹泻患儿粪便中分离的４７４ 株未定型大肠埃希菌中,检出 Ｓ Ｌ Ｔ１ ２０ 株（４２ ％ ） , Ｓ Ｌ Ｔ２ ７ 株（１５ ％ ） ;７４ 株肠产志贺样毒素且具侵袭力的大肠埃希菌（ Ｅ Ｓ Ｉ Ｅ Ｃ） 中检出 Ｓ Ｌ Ｔ１ １５ 株（２０３ ％ ） , Ｓ Ｌ Ｔ２ ５株（６８ ％ ） 。结论　 Ｓ Ｌ Ｔ Ｅ Ｃ 是太原地区引起小儿腹泻的一种重要的致泻病原菌。     

五对聚合酶链反应引物检测解脲脲原体的比较

筛选解脲脲原体尿素酶基因上的不同引物及扩增模板式，使扩增敏感性达到最佳。方法以ＵＵ尿素酶基因为靶序列，设计５对引物，用聚合酶链反应扩增ＵＵ１－１４个血清型和系列稀释的ＵＵ８ＤＮＡ，用ＯＬＩＧＯ程序分析引物序列与ＰＣＲ敏感性间的关系。结论引物自由能谱之差影响着ＰＣＲ扩增的敏感性ＵＵ１＋Ｂ引物扩增敏感性最佳。     

应用通用寡核苷酸芯片技术检测病原菌的初步研究

常规的细菌检测通常包括细菌的分离培养、染色和生化鉴定 ,常规方法通常需要 2 4ｈ左右才能获得较确切的结果 ,会延迟正确的诊断和治疗 ,因此对于临床而言 ,建立一种快速且特异性强的微生物检测方法是十分必要的。生物芯片是一种新兴的高通用技术 ,在面积较小的载体 ,如玻片上可以实现对多种目标基因的同时检测[1 ] 。本研究对利用寡核苷酸芯片技术实现病原菌的通用检测的可能性进行了探讨。一、材料与方法1 .试验菌株 :标准菌株由本所菌种保藏中心提供 ;细菌模板ＤＮＡ提取按照ＮａＩ裂解 玻璃粉吸附法进行[2 ] 。2 .引物及探针设计 :2条通…     

定量PCR快速检测炭疽芽孢杆菌的实验研究

目的建立一种简便、快速、定量检测炭疽芽孢杆菌的PCR方法。方法采用TaqMan荧光探针技术,针对炭疽芽孢杆菌质粒pXO1、pXO2上的基因设计引物;用炭疽芽孢杆菌（Sterne株）污染环境土壤来模拟实际样本,比较了从土壤中提取DNA的不同方法对检测效果的影响,并与同类进口试剂进行了平行比对。结果以含有检测目的片段的线性质粒为模板,反应体系的灵敏度可达到101拷贝/μl;用Sterne株芽孢悬液污染土壤,检测灵敏度可达2.5×103cfu/g土壤。我们研制的试剂与进口试剂在敏感性和准确性方面一致,且操作简便。结论本研究建立的炭疽芽孢杆菌实时定量PCR检测方法可特异、灵敏地检测土壤标本中可疑目标菌。     

荧光定量PCR快速检测鼠疫耶尔森氏菌的实验研究

目的　利用LightCycler建立一种简便、特异的荧光定量PCR检测方法 ,用于鼠疫耶尔森氏菌的快速检测。 方法　采用SYBRGreenI随机掺入法 ,以Roche试剂盒为标准 ,比较两公司的DNA聚合酶 ,用鼠疫菌 310 0 4建立荧光PCR反应体系 ;针对鼠疫耶尔森氏菌特异的染色体标识序列和质粒上F1抗原基因设计引物 ,检测其灵敏度和特异性 ,以盲测试验进行验证 ;在此基础上鉴定 2 75株鼠疫耶尔森氏菌 ,并测试该法检测脏器污染模拟标本的灵敏度。结果　建立以一个公司试剂为主较低成本的PCR反应体系 ;EV76的检测灵敏度可达每反应体系 1.6个菌 ;检测我国 18个生态型共计 2 75株鼠疫耶尔森氏菌及 2 8株非鼠疫菌株的PCR扩增结果表明 ,鼠疫菌株均出现特异的扩增结果 ,2 8株对照菌株均为阴性 ;肝、脾、肺模拟标本检测灵敏度可达每反应体系 4 0 0 0个菌。结论　该方法对于检测鼠疫耶尔森氏菌具有简便、快捷、高敏感性和特异性的特点 ,适用于鼠疫紧急疫情时的快速诊断和疫源地监测