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目的探讨吸入感染鼠疫的发生、发展过程及重要鼠疫菌致病相关基因的体内表达规律。方法采用滴鼻法建立小鼠吸入性鼠疫感染模型,并观察不同感染时间的组织病理学改变;采用免疫组化和逆转录一实时定量PCR方法检测感染小鼠组织中鼠疫菌5种毒力相关蛋白及其基因(cafl、lcrV、lcrG、pla、psaA)的表达和转录。结果鼠疫菌吸入后可诱导小鼠产生肺鼠疫型和非肺鼠疫型鼠疫。在小鼠体内感染状态下的鼠疫菌体表面能够检测到上述5种毒力相关蛋白的表达。其毒力基因的转录呈时相、组织差异性。结论在体内感染状态下,5种毒力相关蛋白均呈菌体表面可检测到的表达;各毒力相关基因在不同时间、不同组织中转录具有很大的差异性,这种差异性可能与其功能及宿主细胞的作用密切相关。 相似文献
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产志贺样毒素大肠埃希菌的分子生物学鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 探讨产志贺样毒素大肠埃希菌( S L T E C) 在小儿腹泻中的病原学地位。方法 根据肠出血性大肠埃希菌( E H E C) O157 : H7 的 S L T1 、 S L T2 、eae A 基因片段设计了3 对引物,采用聚合酶链反应检测大肠埃希菌中 S L T1 、 S L T2 和eae A 毒力基因。结果 29 株标准致泻大肠埃希菌( E H E C、 E P E C、 E T E C) 和10 株其他肠道病原菌中,只有1 株 E H E C检出 S L T1 、 S L T2 、eae A 毒力基因,其他均为阴性。从1 032 例腹泻患儿粪便中分离的474 株未定型大肠埃希菌中,检出 S L T1 20 株(42 % ) , S L T2 7 株(15 % ) ;74 株肠产志贺样毒素且具侵袭力的大肠埃希菌( E S I E C) 中检出 S L T1 15 株(203 % ) , S L T2 5株(68 % ) 。结论 S L T E C 是太原地区引起小儿腹泻的一种重要的致泻病原菌。 相似文献
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五对聚合酶链反应引物检测解脲脲原体的比较 总被引:6,自引:0,他引:6
筛选解脲脲原体尿素酶基因上的不同引物及扩增模板式,使扩增敏感性达到最佳。方法以UU尿素酶基因为靶序列,设计5对引物,用聚合酶链反应扩增UU1-14个血清型和系列稀释的UU8DNA,用OLIGO程序分析引物序列与PCR敏感性间的关系。结论引物自由能谱之差影响着PCR扩增的敏感性UU1+B引物扩增敏感性最佳。 相似文献
78.
应用通用寡核苷酸芯片技术检测病原菌的初步研究 总被引:9,自引:1,他引:9
常规的细菌检测通常包括细菌的分离培养、染色和生化鉴定 ,常规方法通常需要 2 4h左右才能获得较确切的结果 ,会延迟正确的诊断和治疗 ,因此对于临床而言 ,建立一种快速且特异性强的微生物检测方法是十分必要的。生物芯片是一种新兴的高通用技术 ,在面积较小的载体 ,如玻片上可以实现对多种目标基因的同时检测[1 ] 。本研究对利用寡核苷酸芯片技术实现病原菌的通用检测的可能性进行了探讨。一、材料与方法1 .试验菌株 :标准菌株由本所菌种保藏中心提供 ;细菌模板DNA提取按照NaI裂解 玻璃粉吸附法进行[2 ] 。2 .引物及探针设计 :2条通… 相似文献
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定量PCR快速检测炭疽芽孢杆菌的实验研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的建立一种简便、快速、定量检测炭疽芽孢杆菌的PCR方法。方法采用TaqMan荧光探针技术,针对炭疽芽孢杆菌质粒pXO1、pXO2上的基因设计引物;用炭疽芽孢杆菌(Sterne株)污染环境土壤来模拟实际样本,比较了从土壤中提取DNA的不同方法对检测效果的影响,并与同类进口试剂进行了平行比对。结果以含有检测目的片段的线性质粒为模板,反应体系的灵敏度可达到101拷贝/μl;用Sterne株芽孢悬液污染土壤,检测灵敏度可达2.5×103cfu/g土壤。我们研制的试剂与进口试剂在敏感性和准确性方面一致,且操作简便。结论本研究建立的炭疽芽孢杆菌实时定量PCR检测方法可特异、灵敏地检测土壤标本中可疑目标菌。 相似文献
80.
荧光定量PCR快速检测鼠疫耶尔森氏菌的实验研究 总被引:5,自引:0,他引:5
目的 利用LightCycler建立一种简便、特异的荧光定量PCR检测方法 ,用于鼠疫耶尔森氏菌的快速检测。 方法 采用SYBRGreenI随机掺入法 ,以Roche试剂盒为标准 ,比较两公司的DNA聚合酶 ,用鼠疫菌 310 0 4建立荧光PCR反应体系 ;针对鼠疫耶尔森氏菌特异的染色体标识序列和质粒上F1抗原基因设计引物 ,检测其灵敏度和特异性 ,以盲测试验进行验证 ;在此基础上鉴定 2 75株鼠疫耶尔森氏菌 ,并测试该法检测脏器污染模拟标本的灵敏度。结果 建立以一个公司试剂为主较低成本的PCR反应体系 ;EV76的检测灵敏度可达每反应体系 1.6个菌 ;检测我国 18个生态型共计 2 75株鼠疫耶尔森氏菌及 2 8株非鼠疫菌株的PCR扩增结果表明 ,鼠疫菌株均出现特异的扩增结果 ,2 8株对照菌株均为阴性 ;肝、脾、肺模拟标本检测灵敏度可达每反应体系 4 0 0 0个菌。结论 该方法对于检测鼠疫耶尔森氏菌具有简便、快捷、高敏感性和特异性的特点 ,适用于鼠疫紧急疫情时的快速诊断和疫源地监测 相似文献