鼠疫耶尔森菌DNA标识序列的鉴定及其应用研究

目的确定鼠疫耶尔森菌DNA标识序列,以用于鼠疫耶尔森菌的快速检测和鉴定。方法通过芯片比较基因组杂交和PCR验证,鉴定鼠疫耶尔森菌DNA标识序列,针对标识序列设计特定的PCR引物。结果鼠疫耶尔森菌基因组中存在3个区段,共28条基因,均是鼠疫耶尔森菌DNA标识序列。针对其中3条基因设计PCR引物,能特异性扩增出鼠疫耶尔森菌,与来自其他非鼠疫耶尔森菌的DNA无交叉反应。结论鼠疫耶尔森菌存在DNA标识序列,并能用于鼠疫耶尔森菌的快速检测与鉴定。     

从动物和土壤中直接检测鼠疫耶尔森氏菌

目的　探讨用防污染的 PCR- EL ISA(U DPE)技术检测人为污染的土壤和感染的动物标本的可行性。方法　根据鼠疫耶尔森氏菌 Cafl和 Pla基因分别设计了 3条引物 ,组合成 3对引物 ,建立 U DPE检测技术。结果　利用该实验体系可以检出每克土壤中 10 0 0个鼠疫耶尔森氏菌的污染。比检测纯细菌的敏感性低 2 0 0倍 ,说明土壤中有抑制 PCR反应的因子。对 2 0只实验组动物 40份标本 (肝脏和脾脏 )的培养、U DPE和 PCR-电泳检测表明 ,3种方法的检出吻合率为 10 0 % ,均能从 40份标本中检出靶细菌 ,而用 3种方法检测对照组动物的 2 0份肝脏和脾脏均为阴性。结论　利用 UDPE技术可以被用于动物脏器中鼠疫耶尔森氏菌的检测     

鼠疫菌、副溶血性弧菌及肺炎克雷伯菌CRP蛋白的表达及其DNA结合活性分析

目的表达有活性的鼠疫耶尔森菌（鼠疫菌）、副溶血性弧菌以及肺炎克雷伯菌的cAMP受体蛋白（CRP）并进行DNA体外结合活性分析,为深入研究3种CRP蛋白间的交互转录调控作用奠定基础。方法应用大肠埃希菌pET系统体外表达鼠疫菌201株、副溶血性弧菌5421株以及肺炎克雷伯菌tw518株的CRP蛋白;应用生物信息学对3种CRP蛋白进行同源性比较,并对CRP与靶DNA的结合基序（CRP consensus）进行分析预测;通过体外凝胶阻滞实验（EMSA）和DNaseⅠ足迹实验验证His？CRP与DNA的结合活性。结果成功表达出3种菌有活性的His？CRP融合蛋白,3种CRP蛋白对鼠疫菌pla、副溶血性弧菌toxR及肺炎克雷伯菌kfuA基因均有结合活性。结论 3种CRP蛋白都能直接结合到鼠疫菌pla、副溶血性弧菌toxR及肺炎克雷伯菌kfuA基因的启动子区,说明上述3种CRP蛋白对3种病原菌的重要毒力基因的转录可能具有交互调控作用。     

云南战区部队首次检出O157:H7大肠杆菌

[目的]了解EHEC O157：H7在云南战区部队腹泻患者和战区猪、牛和污水中的存在情况。[方法]在SMAC琼脂平板上分离，快速MUG试验初筛，用VITEK32自动微生物生化分析仪鉴定，复合PCR扩增法检测毒素基因。[结果]从人、猪、牛中分别检出EHEC O157：H7和EHECO157：H^-，其中O157：H7检出三个毒力基因。[结论]云南战区至少存在两种不同类型的EHEC O157，要警惕和预防此菌的感染。     

用随机扩增DNA多态性制备李斯特菌属特异探针

目的研究一种在微生物遗传背景不清楚情况下，快速制备探针的新方法。方法采用随机扩增ＤＮＡ多态性技术随机扩增李斯特菌基因组，将其中的单核细胞增生李斯特菌扩增产物克隆制备ＤＮＡ探针，探针用聚合酶链反应标记上３２Ｐ，与李斯特菌和非李斯特菌进行菌落原位杂交鉴定其特异性。结果获得一长度为８５０ｂｐ，能与所有李斯特菌特异杂交而不与非李斯特菌反应的李斯特菌属特异探针。结论随机扩增ＤＮＡ多态性技术为快速制备微生物ＤＮＡ探针提供了一种新途径。     

聚合酶链反应快速诊断结核性脑膜炎

聚合酶链反应快速诊断结核性脑膜炎李连青，朱庆义，贺润花，张遗珠，杨瑞馥，李银太，郭兆彪近年来应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测各种临床标本中结核菌具有快速、敏感、特异之优点，临床标本不需经过培养，直接用ＰＣＲ扩增试验，当天可出结果，具有早期诊断价值［Ｌａ...     

甘肃省58株鼠疫菌基因分型及地理分布的研究

本研究采用差异区段(different regions,DFR)方法对分离自甘肃省鼠疫疫源地的58株鼠疫菌进行基因分型,分析其地理分布.     

蛋白芯片筛选鼠疫耶尔森菌与巨噬细胞的蛋白相互作用

目的：利用蛋白芯片筛选鼠疫耶尔森菌的毒力因子，进一步揭示鼠疫菌与宿主之间相互作用的机制。方法：鼠疫菌毒力相关蛋白芯片筛选与小鼠巨噬细胞系774A．1可能有相互作用的蛋白质，免疫荧光试验验证筛选出的蛋白相互作用。结果：共筛选到17个可能与巨噬细胞有相互作用的鼠疫菌蛋白，并通过免疫荧光试验初步验证了其中8个蛋白芯片筛选试验中信号最强的蛋白与巨噬细胞的相互作用。结论：蛋白芯片技术可用于筛选病原菌与宿主之间的相互作用，有助于深入研究病原与宿主之间相互作用的机制。本研究筛选出的鼠疫菌蛋白与巨噬细胞的相互作用尚需深入研究和验证，以便最终确定这些蛋白在鼠疫菌致病机制中所发挥的作用。     

甘肃省58株鼠疫菌基因分型及地理分布的研究

本研究采用差异区段(different regions,DFR)方法对分离自甘肃省鼠疫疫源地的58株鼠疫菌进行基因分型,分析其地理分布.