土拉弗朗西斯氏菌PCR—EIA检测技术的研究

目的：建立操作简便、结果客观的微孔板杂交－酶联显色检测土拉弗朗西斯拉菌ＰＣＲ产物的技术。方法；将ＰＣＲ产物或产物的克隆作为捕获探针包被聚乙烯微孔板，ＰＣＲ引物５‘末端生物素标记，扩增后用作探针杂交，通过比较影响微孔板杂交的包被，杂交和显色等因素，建立ＰＣＲ－ＥＩＡ技术。结果：通过比较包被缓冲液发现镁离子及其离子强度是影响ＤＮＡ包被的重要；包被的ＤＮＡ以线型质粒较佳，每孔包被３００ｎｇ左右的ＤＮＡ包     

云南鼠疫耶尔森氏菌脂肪酸成分分析

目的利用脂肪酸成分分析方法获得云南鼠疫耶尔森氏菌菌株脂肪酸组成的本底资料,并建立云南鼠疫耶尔森氏菌菌株的数据库。方法选择历年来从云南不同疫源地分离到的146株鼠疫耶尔森氏菌进行了菌体脂肪酸成分分析。结果云南鼠疫耶尔森氏菌菌株的主要脂肪酸成分为16∶0酸,环式17∶0酸,3羟基14∶0酸和ω7 c16∶1酸以及十八碳单烯酸,与宋亚军等的分析结果一致,与M ID I公司Sherlock系统的菌库中的数据存在一些差异。结论建立云南鼠疫耶尔森氏菌菌株的脂肪酸组成数据库。     

应用抑制消减杂交技术研究鼠疫菌与假结核菌基因组之间的差异

目的：研究古典型鼠疫菌与假结核菌ATCC29833基因组间的差异，为进一步认识鼠疫菌的起源与进化奠定基础。方法：通过抑制消减杂交技术比较两种细菌基因组间的差异。结果：与已测序的3株鼠疫菌基因组进行同源性比较，发现了259个假结核菌基因组中存在的特异序列，与基因库进行同源性比较发现了10个假结核菌ATCC29833基因组中存在的新序列。结论：抑制消减杂交技术是一个简单而有效的比较近源微生物基因组之间差异的方法，鼠疫菌在进化过程中失去了大量的基因，假结核菌基因组之间也存在着一定的差别。     

基于23S rDNA基因的病原细菌通用检测寡核苷酸芯片

目的 :利用新兴的生物芯片技术 ,以细菌 2 3SrDNA基因为靶序列 ,实现常见病原细菌的通用检测。方法 :从核酸数据库中调用一些病原细菌的 2 3SrDNA基因序列 ,在指定的片段内设计目的细菌的种特异性寡核苷酸探针 ,用适当的方法固定在玻片上 ,制备寡核苷酸芯片 ;扩增实验细菌 2 3SrDNA基因片段 ,并同时完成荧光素的掺入标记 ,标记扩增产物纯化后 ,与芯片进行杂交 ,根据杂交结果进行条件优化及芯片评价。结果 :通过对探针、固定化、标记、杂交等条件进行优化 ,本实验中所使用的多种实验细菌可以在 4h左右通过杂交得到准确鉴定 ;以奇异变形杆菌为对象 ,本系统最低检出菌液浓度为 10 0个 ml,即反应体系中含 10个菌体即可检出。结论 :本研究建立的寡核苷酸芯片系统可以稳定而特异地实现多种细菌的通用检测 ,具有良好的应用前景。     

炭疽芽孢DNA适配子结构与长度对亲和力的影响

目的 研究炭疽芽孢适配子结构与长度变化对其与芽孢之间亲和力的影响。方法 人工合成f77-1适配子序列，并构建在其7条突变体序列，将这些寡核苷酸序列分别与炭疽芽孢结合，利用TMB显色系统判断读取吸光度A值，确定各序列与芽孢间亲和力大小；同时通过核酸序列分析软件包模拟各序列的二级结构，推断适配子的结构与亲和力之间的关系。结果 适配子f77-1与突变体中的f77-3与芽孢亲和力较好，约是突变体中f77-4亲和力的11倍，二级结构显示：f77-1,f77-3都具有茎环或发卡结构，且3'端都有连续3个G。结论 适配子5'端的茎环结构和发卡结构是这些寡核苷酸序列与芽孢结合的结构基础，3'端的连续3个G可能对提高亲和力起着重要的作用。     

用双重聚合酶链快速鉴别葡萄球菌及其甲氧西林耐药性

目的 建立一种同时鉴别金黄色葡萄球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)、耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)的快速方法。方法 利用双重聚合酶链反应(PCR)技术同时检测金黄色葡萄球菌特有的耐热核酸酶(NUC)基因和编码耐甲氧西林葡萄球菌青霉素结合蛋白(PBP2a)的mecA基因。结果 94株金黄色葡萄球菌(SA)的NUC基因100％阳性，mecA基因阳性率为48．9％，药敏法MRSA的阳性率为47．9％；101株凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)的NUC基因100％阴性，mecA基因阳性率为35．6％，药敏法MRCNS阳性率为34．7％。结论 双重PCR技术检测葡萄球菌(SA、CNS)及其甲氧西林耐药性具有简便、快速、敏感和特异的特点，是一种非常有效的鉴别方法。     

炭疽芽孢杆菌防污染PCR-微孔板杂交-EIA检测技术的研究

目的 :建立防污染PCR_微孔板杂交_EIA检测技术 ,并用于炭疽芽孢杆菌芽孢的检测。方法 :根据炭疽芽孢杆菌毒力相关基因设计引物 ,筛选合适引物 ,建立用UDG酶防污染的PCR扩增_微孔板杂交与酶联显色检测炭疽芽孢杆菌的方法 ,并探讨试剂的室温稳定系统 ,将建立的方法用于模拟污染炭疽芽孢土壤样品的检测。结果 :根据炭疽芽孢杆菌荚膜和水肿因子基因设计的引物 ,可以同时检测两个毒力相关质粒的存在 ,用 0 .1U的UDG可以防止10 10 产物的污染 ,微孔板杂交_酶联显色检测比单纯PCR_电泳敏感 10倍。加入稳定剂的PCR_微孔板杂交_EIA体系可以耐受 7d的 37℃破坏试验。将该体系用于污染土壤的检测 ,可以检测出 0 .2 5g土壤中 10 3 个炭疽芽孢的存在。结论 :所研制的防污染PCR_微孔板杂交_EIA试剂克服了目前PCR试剂运输不便 ,产物污染所致假阳性和判定结果欠客观的缺点 ,为炭疽芽孢的快速检测提供了有力手段     

PCR检测嗜肺军团菌的应用研究

ＰＣＲ检测嗜肺军团菌的应用研究李崇辉，杨瑞馥．李银太，郭兆彪，周方，高树德嗜肺军团菌（ＬＰ）是引起军团病的主要病原菌。作者将建立的用ＰＣＲ检测ＬＰ的方法，应用于环境水和临床标本中ＬＰ的检测，并建立了简便快速实用的标本处理方法。首先以环境水中的常见细菌...     

云南鼠疫耶尔森菌基因分型研究

目的通过对来自云南省鼠疫自然疫源地155株鼠疫菌进行基因分型,了解鼠疫菌的进化规律。方法根据22个差异区段(differentregions,DFR)设计引物,PCR扩增鼠疫菌的每个DFR。结果滇西山地闽广沿海居民区黄胸鼠鼠疫自然疫源地137株鼠疫菌的基因型均为9型。滇西山地齐氏姬鼠大绒鼠鼠疫自然疫源地18株鼠疫菌,有10株菌为7型,8株菌为9型。结论滇西山地齐氏姬鼠大绒鼠鼠疫自然疫源地鼠疫菌的基因型为7型和9型,而滇闽广沿海居民区黄胸鼠鼠疫自然疫源地鼠疫菌的基因型主要为9型。两疫源地鼠疫菌在遗传关系上有亲缘性,后者可能由前者进化而来。     

产志贺样毒素大肠埃希菌的分子生物学鉴定

探讨产志贺样毒素大肠埃希菌在小儿腹泻中的病原学地位。方法根据肠出血性大肠埃希菌（ＥＨＥＣ）Ｏ１５７：Ｈ７的ＳＬＴ１、ＳＬＴ２、ｅａｅＡ基因片段设计了３对引物,采用聚合酶链反应检测大肠埃菌中ＳＬＴ１、ＳＬＴ２和ｃａｅＡ毒力基因。结论ＳＬＴＥＣ是太原地区引起小儿腹泻的一种重要的致泻病原菌。