鼠疫耶尔森菌生物型变异遗传基础的研究和新生物型--田鼠型的提出

目的 探究鼠疫耶尔森菌生物型变异的遗传基础。方法 通过全基因组序列的比较分析,鉴定可能与生物型变异相关的基因突变,采用DNA测序和位点特异性PCR的方法,分析基因突变在鼠疫耶尔森菌自然分离株中的分布。结果 田鼠鼠疫自然疫源地菌株在毒力、生化表型和分子特征上与其他型别鼠疫耶尔森菌相差很大。所有脱氮阴性菌株的napA基因发生了突变,所有甘油利用阴性菌株的glpD基因发生了突变,所有阿拉伯糖利用阴性菌株的araC基因发生了突变。结论 提出了一个新的生物型——田鼠型;相应糖醇代谢相关基因发生突变是4个生物型变异的遗传基础。     

用Taq Man探针实时定量PCR法快速检测鼠疫耶尔森菌

目的　建立一种快速、准确、特异的定量检测鼠疫耶尔森菌的方法。方法　针对鼠疫耶尔森菌特异的染色体标识序列设计引物和TaqMan探针,进行实时定量聚合酶链反应(polymerasechainreaction ,PCR)分析,优化反应体系,检测其灵敏度、特异性和重复性。结果　以EV76灭活培养物为对象,检测灵敏度可达每反应体系0 .0 8CfU ;30株非鼠疫菌株的检测结果表明,对照菌株均为阴性,检测特异性良好;对同一样品进行17次重复检测,其循环阈值的标准偏差为0 .35。结论　TaqMan探针法能够灵敏、特异、稳定地对鼠疫耶尔森氏菌进行定量检测,为鼠疫监控、诊断提供有力手段     

鼠疫耶尔森菌活疫苗株的比较基因组学研究

目的揭示不同来源的鼠疫活疫苗株在基因组组成上的差异。方法以芯片比较基因组杂交为主要研究手段,结合PCR验证,对19株鼠疫活疫苗株进行比较基因组分析。结果鼠疫活疫苗株基因组中缺失了大量基因,但也有某些大片段基因的拷贝增多。结论不同来源的疫苗株在基因组组成上存在差异,构成了不同疫苗株的表型与使用效果具有差异性的遗传基础。     

三种致病耶尔森氏菌Hsp60基因序列的比较研究

目的　研究 3种致病耶尔森氏菌Hsp6 0基因序列的差异。方法　根据文献和基因库中的Hsp6 0基因序列设计了两对PCR引物 ,获得Hsp6 0基因的部分序列。将扩增产物纯化回收 ,克隆至 pGEM -T载体后进行测序。 结果　用CLUSTALX软件进行序列分析 ,发现 3种耶尔森氏致病菌的Hsp6 0基因序列较为保守 ,其中鼠疫耶尔森氏菌和假结核耶尔森氏菌的该基因序列在所研究范围内仅相差一个碱基。结论　 3种菌的Hsp6 0基因保守 ,不足以在此区间设计种特异性探针。小肠结肠炎耶尔森氏菌与鼠疫耶尔森氏菌和假结核耶尔森氏菌的Hsp6 0基因序列差异较大 ,易与这两个种区分开     

DNA探针检测痢疾杆菌和侵袭性大肠杆菌的研究Ⅰ探针的制备及效果观察

我们用快速简便提取法制备探针供体菌重组质粒;用透析袋电泳洗脱法回收其17KbEcoR I酶切片段,该片段属福氏5型痢疾杆菌毒力质粒的一部分。用缺口翻译技术制备α^-32PdATP标记探针,菌落原位杂交和Southern blot杂交能特异地检测痢疾杆菌和侵袭性大肠杆菌。这些方法适宜于一般实验室开展DNA探针临床诊断和流行病学调查。     

鼠疫亚单位疫苗的免疫学效果评价

9.10,P<0.01),而豚鼠和兔产生的F1 IgG抗体滴度的差异无统计学意义(q=0.06,P=0.81).亚单位疫苗免疫的小鼠、豚鼠和兔免疫保护率分别为100%(10/10)、86%(12/14)和100%(5/5);EV76疫苗免疫的小鼠、豚鼠和兔免疫保护率分别为100%(6/6)、93%(13/14)和100%(6/6).结论 BALB/c小鼠是较好的评价鼠疫亚单位疫苗的小型动物;豚鼠评价鼠疫亚单位疫苗存在较大个体差异;兔也可用作评价鼠疫亚单位疫苗的动物.     

用TaqMan探针实时定量PCR法快速检测鼠疫耶尔森菌

目的建立一种快速、准确、特异的定量检测鼠疫耶尔森菌的方法。方法针对鼠疫耶尔森菌特异的染色体标识序列设计引物和TaqMan探针，进行实时定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)分析，优化反应体系，检测其灵敏度、特异性和重复性。结果以EV76灭活培养物为对象，检测灵敏度可达每反应体系0．08CfU；30株非鼠疫菌株的检测结果表明，对照菌株均为阴性，检测特异性良好；对同一样品进行17次重复检测，其循环阈值的标准偏差为0．35。结论TaqMan探针法能够灵敏、特异、稳定地对鼠疫耶尔森氏菌进行定量检测，为鼠疫监控、诊断提供有力手段。     

用聚合酶链反应微孔板杂交技术检测HBV DNA

目的 :建立并优化HBVDNA的PCR 微孔板杂交技术检测体系 ,使临床PCR结果判定更加客观可靠。方法 :采用碱裂解标本中的HBV、玻璃粉吸附提纯模板DNA ,用 5’端标记生物素的引物进行PCR ,PCR扩增产物与包被于微孔板中的靶基因杂交 ,酶标链霉亲和素与杂交体中的生物素结合后 ,用酶底物与所标记酶进行显色反应 ,最后通过测定其光密度来判定结果。结果 :建立并优化的PCR 微孔板杂交检测方法提高了检测的灵敏度和特异性。PCR 微孔板杂交法对HBVDNA的检出阳性率 (79.8% )比电泳法 (6 9.0 % )高 ,2 0份非乙肝患者血清标本两方法检测均阴性。结论 :本方法灵敏、特异、操作简便、快速、结果客观可靠。     

鼠疫耶尔森菌全基因组DNA芯片的研制及用于比较基因组学分析

目的 研制鼠疫耶尔森菌全基因组DNA芯片,并将其用于比较基因组分析。方法 挑选出4005条鼠疫耶尔森菌基因,PCR扩增各基因,以纯化的PCR产物点样制备芯片,采用双色荧光杂交策略,进行芯片比较基因组杂交。结果 设计了若干质控杂交组合,芯片杂交结果与全基因组测序结果完全一致。结论 成功建立了基于全基因组DNA芯片的鼠疫耶尔森菌比较基因组学技术平台。     

用UDPE技术检测感染鼠疫菌植物

用ＵＤＧ（尿嘧啶糖化酶）防ＰＣＲ产物污染,以两个不同基因为靶序列检测同一病原菌和微孔板杂交－酶联显色检测ＰＣＲ产物的ＵＤＰＥ（ＵＤＧ－ＤａｐｌｅｘＰＣＲ－ＥＩＡ）技术,检测感染鼠疫菌植物５０份,检出阳性３５份,而常规直接培养阳性仅５份。表明ＵＤＰＥ技术灵敏度高,特异性强。