器官联合切取时供胰切取和修整方法的探讨

目的 探讨胰肾联合移植中供胰的切取和修整方法.方法 采用腹部器官联合切取法.取腹部“十”字切口,原位经腹主动脉和门静脉插管,分别以0～4℃高渗枸橼酸盐嘌呤溶液(HC-A液)2000 ml+ UW液1000ml灌洗,灌洗压力约为100 cm H2O(9.8 kPa);以0～4℃生理盐水1000 ml+甲硝唑200ml灌洗肠道,联合整块切取肝、肾、胰、脾和十二指肠,然后在工作台上分离、修整胰腺和肾脏.采用此法共完成40例胰肾联合移植.结果 整块器官的热缺血时间平均为3.2 min(2～5 min),器官灌注良好,无血管损伤.胰腺冷缺血时间为10.6 h(8～15 h),肾脏冷缺血时间为8.5h(4～16 h).术后停用胰岛素的时间平均为9.5 d(4～17 d),空腹血糖为6.7μmol/L(4.4～10.7μmol/L),糖化血红蛋白为4.4％(4.1％～4.7％).术后1个月肌酐87.2(56～121) μmol/L.术后发生移植肾功能恢复延迟2例,血肌酐均于1个月内恢复正常.结论 正确的供胰切取、保存及修整方法是保证移植成功的关键因素.     

胃癌中p27、p53蛋白及TGF—βRⅡ的关系和预后意义

目的：探讨p27、p53蛋白及TβRⅡ在胃癌中的表达关系和预后意义。方法：用免疫组化法同步检测人胃癌组织中27,p53,TβRⅡ的表达。结果：62例胃癌中p27蛋白失表达率为58．1％，高于胃癌旁组织20.0%;p53和TβRⅡ阳性率在胃癌中分别为43．5％和17．7％，而癌旁组织分别为0和50％。p27阳性组的p53,TβRⅡ阳性率（分别为65.4%,31.0%)显著高于p27阴性组（P＜0．05),p27与p53及TβRⅡ呈正相关；而p53与TβRⅡ差异无显著性（P＞0．05）。Kaplan-Meier曲线显示p27,TβRⅡ阴性组及p53阳性组患者的预后较对照组差（P＜0．05），Cox回归模型分析显示，p27与预后弱相关（P=0.0561),p53和TβRⅡ与预后密切相关（P＜0．05）。结论：p27,p53,TβRⅡ相互作用，对胃癌发生发展起重要作用；p27和TβRⅡ表达愈强,p53表达愈弱，说明预后较好，反之则差。联合检测p27,p53，TβRⅡ，可辅助胃癌诊断，估计预后，选择治疗方案。     

胰腺上皮内瘤变

近年来，人们对胰腺上皮内瘤变(或称胰腺上皮内肿瘤，pancreatic intraepithelial neoplasia，PanIN)的认识有了较大的进展，1999年世界胰腺癌论坛大会提出的新分类和病理诊断标准^[1]，已逐渐为各国所采纳。越来越多的证据，特别是遗传学研究成果支持胰腺上皮内瘤变的新分类和分级系统^[2-5]，作为胰     

E-钙黏附素和β-连环素在胰腺上皮内瘤变和胰腺癌组织中的表达

目的:探讨胰腺上皮内瘤变PanIN和胰腺癌组织中E-钙黏附素(E-Cad)和β-连环素(β-Cat)异常表达的意义.方法:回顾性研究长海医院2001-01/2003-12间外科切除和同期尸检的156例胰腺标本,并构建了组织芯片,其中含有129灶PanIN-1A,104灶PanIN-1B,22灶PanIN-2,11灶PanIN-3和121例导管腺癌和相应癌旁组织.用EnVision免疫组化技术检测上述病变组织中E-Cad和β-Cat的表达变化,并结合临床病理资料进行相关分析.结果:导管腺癌中E-Cad异常表达率明显高于PanINs和正常导管(64.5%,32.3%,0%),且与胰腺癌的分化程度、淋巴结转移和神经浸润密切相关(P＜0.05).PanINs和导管腺癌中E-Cad胞质表达较正常导管明显增加.β-Cat的异常表达与胰腺癌淋巴结转移和神经浸润有明显相关性(P＜0.05).高级别PanINs和导管腺癌中β-Cat胞质和胞核的表达率明显高于低级别PanINs和正常导管(P＜0.05).PanINs和导管腺癌中E-Cad和β-Cat表达间呈正相关性(P＜0.01,P＜0.05).结论:胰腺癌和PanINs中E-Cad和β-Cat的异常改变提示他们不仅与胰腺癌的生物学行为和预后有关,而且也参与了胰腺癌的发生.     

E-cadherin and β-catenin expression in pancreatic intraepithelial neoplasia and pancreatic adenocarcinoma

Epithelial- cadherin (E- cad) is an importantmediator of maintaining epithelial integrity andintercellular adhesion.Aberrant expression anddysfunction of E- cad are reported to be implicated inthe invasion and metastasis of numerous malignantepithelial tumors[1,2 ] .β- catenin (β- cat) ,a multi-functional protein,is able to combine with E- cad toform complex- mediated cell- cell homotypicadhesion,and on the other hand,β- cat as a keymember in the Wnt- signaling pathway participatesin the r…     

An improved method of mitochondrial DNA isolation for XL-PCR

Objective： To obtain high quality of mitochondrial DNA （mtDNA） and carry out extra-long PCR （XL-PCR）. Methods： Mitochondria were isolated by differential centrifugation, and membranes were disrupted using 10%SDS （pH 7.0）. mtDNA was then extracted using phenol and chloroform. Resuits： The mtDNA obtained by using our improved method can be used as effective template for XL-PCR, and total mtDNA （16 kb） can be amplified easily. Conclusion： Our improved method is effective in preparing high quality of mtDNA, which can be used as template for XL-PCR.     

P27、P53和增殖细胞核抗原在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的：探讨P27、P53和增殖细胞核抗原（PCNA）在胃癌组织中的表达及其与临床病理指标及预后的相关性。方法：应用免疫组织化学SP法,检测62例人胃癌组织中P27、P53、PCNA的表达。结果：胃癌组织中,P27、P53、PCNA表达的阳性率分别为37．1％、40．4％、83．9％。P27的表达与Bormann分型,肿瘤浸润深度、淋巴结及远处转移,临床分期有关,P53表达与患性别、远处转移、临床分期有关;而PCNA仅与患年龄、肿瘤分化程度有关,P27阳性组5年生存率高于阳性组,P27与PCNA表达呈负相关。结论：胃癌组织中P27、P53、PCNA的表达可作为判断肿瘤恶性程度、有无转移及预后的重要参考指标。     

HBx蛋白羧基端30个氨基酸缺失对肝癌细胞生物学行为的影响

目的:探讨羧基端缺失了30个氨基酸的乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)突变体ΔHBx和野生型HBx对肝癌细胞Huh7生物学行为的影响。方法:脂质体介导pcDNA3ΔHBx和pcDNA3HBx重组体转染人HBV(-)的肝癌细胞Huh7。PCR扩增Neo基因及Western blot检测转染重组体。运用细胞生长曲线绘制、平板克隆形成、流式细胞仪和裸鼠成瘤实验对转染pcDNA3ΔHBx、pcDNA3HBx和pcDNA3的细胞生物学活性进行检测。结果:pcDNA3ΔHBx组细胞生长速度较pcDNA3HBx组和pcDNA3组减慢,其倍增时间延长;pcDNA3ΔHBx组克隆形成率较pcDNA3HBx组和pcDNA3组下降;细胞周期检测显示pcDNA3ΔHBx表达使Huh7细胞G0/G1期→S期的进程明显减慢。结论:HBx羧基端缺失了30个氨基酸的突变体比野生型HBx具有明显抑制细胞增殖的能力,提示该区域对于HBx功能发挥起着至关重要的作用。     

p16基因mRNA及其编码蛋白在人乳腺癌中的表达

目的：研究人乳腺癌中ｐ１６基因ｍＲＮＡ及其编码蛋白的表达水平与肿瘤发生中预后的相关性。方法：采用免疫组化和原位杂交方法分别对１１例乳腺良性肿瘤和５９例乳腺癌中的ｐ１６基因及其编码蛋白进行检测。结果：ｐ１６基因蛋白表达水平与乳腺肿瘤的良、恶性显著相关（Ｐ〈０．０５）;ｐ１６基因ｍＲＮＡ及其蛋白表达水平与乳腺癌的腋窝淋巴结转移呈现显著负相关（Ｐ〈０．０５）,而与乳腺癌的术后自下而上期呈显著正相关（Ｐ〈     

胰腺上皮内瘤变和胰腺癌组织中TGF-β/Smad信号通路相关蛋白表达

目的探讨转化生长因子(TGF)β/Smad信号传导通路中Smad相关蛋白、TGFβ1及其Ⅰ、Ⅱ型受体在胰腺上皮内瘤变(PanIN)和胰腺癌组织中表达的意义。方法用免疫组化EnVision法和SP法检测266灶不同级别PanINs和121例胰腺癌组织中Smad相关蛋白、TGFβ1及其Ⅰ、Ⅱ型受体的表达,并联系临床病理学指标进行相关分析。结果高级别PanIN病灶Smad4表达率(60.6%,20/33)低于低级别PanINSmad4表达率(79.8%,186/233)(P<0.05);而高级别PanIN中Smad7,TGFβ1,TGFβRⅡ表达率明显高于低级别PanIN(P<0.05)。胰腺癌组织中,Smad4蛋白表达率在淋巴结转移组和神经受累组低于各自对照组(P<0.05);Smad7、TGFβ1及其Ⅰ、Ⅱ型受体的表达率在淋巴结转移组和神经受累组则分别高于各自对照组(P<0.05)。PanIN和胰腺癌组织中Smad2、4、7蛋白,TGFβ1及其Ⅰ、Ⅱ型受体表达率的差异具有显著性(P<0.01)。结论从低级别PanINs到高级别PanINs再到胰腺癌中,Smad4蛋白表达率逐渐降低,而Smad7、TGFβ1及其Ⅰ、Ⅱ型受体表达率逐渐升高,支持胰腺癌形成的分子模型。