中国人幽门螺杆菌尿素酶B亚单位的基因克隆及序列分析

目的 克隆人幽门螺杆菌（ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ,Ｈｐ）尿素酶Ｂ基因（ｕｒｅＢ）,并分析其核苷酸序列的特性。方法 用ＰＣＲ技术从临床分离的Ｈｐ菌株基因组中扩增出ｕｒｅＢ基因,将其克隆至ｐＨＰ质粒上进行序列分析。结果 克隆得到的ｕｒｅＢ基因长度为１７１３ｂｐ,其核苷酸序列与ＧｅｎＢａｎｋ公布的序列有６１个碱基存在差异,同源为９６４４％,推定的氨基酸序列同源性为９９．６５％。结论：我们所     

单纯疱疹病毒型特异性的鉴别诊断

单纯疱疹病毒(herpes simplex virus,HSV)分为HSV-1、HSV-2两个型别。两型的DNA有50%的同源性。目前血清学检测无法区分HSV型别。有效地鉴别HSV两型对疾病的诊断治疗和患者的身心健康至关重要。现对Ⅰ、Ⅱ型单纯疱疹病毒的鉴别诊断方法作一综述。     

Hp中性粒细胞激活蛋白研究进展

幽门螺杆菌(Hp)是一种参与多种胃、十二指肠疾病的重要人类病原体,可引起慢性胃炎和消化性溃疡,并与胃癌密切相关.人类幽门螺杆菌感染的特征是胃黏膜炎症部位中性粒细胞持续浸润.幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白(H.pylori neutrophil-activating protein,HP-NAP)正是由于其能活化中性粒细胞而被如此命名.HP-NAP不仅是重要的毒力因子,而且是主要的候选疫苗抗原.本文综述了HP-NAP的结构、生物学活性和致病机制等的研究进展,并对其应用前景进行了展望.     

人幽门螺杆菌基因组研究概述

随着人类基因组计划的启动和实施 ,作为模式生物的微生物基因组研究得到了快速发展。幽门螺杆菌 (Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ,Ｈｐ)是一重要病原微生物 ,它的基因组研究在一开始就被作为重要的突破口。1997年由Ｊｃａｎ ＦＴｏｍｂ等人顺利完成 2 6 6 95菌株全基因组的测序工作。 1999年又由ＲｉｃｈａｒｄＡ ,Ａｌｍ等人完成了Ｊ99菌株的测序工作。经对 2 6 6 95和Ｊ99基因组的比较 ,发现二者在基因组结构、基因顺序和编码蛋白组方面都具有极高的相似性 ,每一个菌株只有6 %～ 7%的特异性基因 ,而且其中一半是聚簇在一段高变区。…     

急性坏死性胰腺炎大鼠心肌核因子-κB激活及重组葡激酶的干预作用

目的研究重症急性胰腺炎（SAP）心肌功能损害时心肌核因子-κB（NF—κB）的活化及葡激酶的干预作用。方法63只SD大鼠随机分为假手术组（n=9）、ANP组（n=27）、葡激酶干预组（n=27），ANP模型采用5％的牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射方法建立。干预自造模前2d腹腔注射葡激酶1．5mg／kg体重，一天2次，共4次。ELISA法测定制模后6h、12h、24h各时点血TNF—α、IL-6含量；RT—PCR检测心肌NF—κB mRNA的表达；免疫组化法检测心肌NF—κB蛋白的表达，常规观察胰腺及心肌组织的病理变化。结果ANP组术后6h大鼠心肌NF—κB mRNA及NF—κB蛋白表达异常增高，TNF—α、IL-6呈进行性升高，干预组胰腺及心肌组织的病理变化减轻。心肌NF—κB mRNA及蛋白表达下调，血TNF—α、IL-6明显下降，与ANP组比较，差异均显著（P〈0．05）。结论ANP大鼠的心肌损伤可能与循环中TNF—α、IL-6水平升高导致的心肌NF—κB活化有关。葡激酶对SAP并发的心肌损伤具有防治作用。     

重组卡介苗的研究进展

卡介苗（BCG）不仅是目前预防结核病的有效疫苗，而且随着人们对其生物遗传学性质的深入研究证实，许多外源基因都可在BCG中获得表达且具有较好的免疫效果。利用BCG表达外源基因制备重组卡介苗在预防及治疗疾病方面具有潜在的应用前景。     

Th细胞在幽门螺杆菌疫苗诱导肠粘膜免疫中的调节作用

幽门螺杆菌 (helicobacter pylori,Hp)是慢性胃炎、消化性溃疡的主要病原菌 ,并且与胃粘膜相关淋巴组织淋巴瘤和胃癌的发生发展密切相关 [1 ] 。采用疫苗预防、治疗 Hp感染 ,已成为近年来的研究热点 [1 ] 。本研究采用 Hp全菌超声上清和佐剂大肠杆菌不耐热肠毒素口服免疫 BAL B/ c小鼠 ,从分子水平分析肠粘膜免疫主要诱导部位派伊尔小结 (PP)的 Th1、Th2细胞在粘膜免疫应答中的调节作用 ,为 Hp口服疫苗研制提供免疫学依据。1　材料与方法1.1　实验动物　雌性 BAL B/ c小鼠 (本校实验动物中心提供 ) ,6～ 8周龄 ,18～ 2 5 g,2 0只随机…     

长程高脂饲料对雌雄大鼠胰岛功能损害差异的探讨

目的动态观察长程高脂饲料对雌雄大鼠糖耐量和胰岛素作用的影响，并探讨其可能的机制。方法取正常SD大鼠100只，抽签式随机分组，其中雄性和雌性大鼠普通饲料组各20只，雄性和雌性大鼠高脂饲料组各30只。每个月动态监测大鼠体质量及空腹血糖的变化，在第14个月时进行腹腔注射糖耐量试验（IPGTT），检测葡萄糖耐量减退（IGT）的情况，测定第14个月时的空腹胰岛素分泌量及大鼠胰腺组织匀浆液中线粒体和微粒体的丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）和过氧化氢酶（calalase，CAT）水平。结果第14个月时无论普食组或高脂组雄性大鼠腹腔注射糖耐量都受损，而雌性大鼠都未达到糖耐量受损，腹腔糖耐量测试表明雌雄大鼠在120min时血糖有显著性差异（P〈0．05）；14个月时高脂组雄性大鼠空腹胰岛素分泌量显著高于雌性大鼠（P〈0．05）；胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）显示高脂组雄性大鼠胰岛素抵抗程度较雌性大鼠显著升高（P〈0．05）；早相胰岛素分泌功能显示经过长程高脂喂养，雄性大鼠早相胰岛素分泌功能显著低于雌性大鼠（P〈0．05）；胰腺组织匀浆液中线粒体的MDA、细胞质的GSH和CAT的水平雌雄大鼠间虽然无显著性差异（P〉0．05），但总体趋势是无论是普食组还是高脂组，雄性大鼠氧化应激水平都高于雌性大鼠，抗氧化应激水平都低于雌性大鼠。结论雌性大鼠具有抵抗高脂诱导的糖耐量受损作用，其胰腺组织氧化应激水平较低可能是机制之一。     

重组人幽门螺杆菌尿素酶B亚单位及其生物学性质

目的基因重组人幽门螺杆菌(Hp)尿素酶B亚单位(UreB)并分析重组蛋白的生物学性质。方法采用PCR从我国临床分离的Hp菌株中克隆UreB基因,并通过DNA重组技术构建非融合表达UreB的重组质粒pET-11C-UreB,转化至大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达。结果重组UreB在大肠杆菌中表达,相对分子质量约62 000,表达率26%,N端15个氨基酸序列为MKKISRKEYVSMYGP,肽图及氨基酸组成成分分析结果与理论预测值吻合。以重组UreB免疫BalB/c小鼠,能产生抗UreB抗体。ELISA及Western blotting分析显示,重组UreB具有良好的免疫原性和反应性,表现出与天然Hp UreB相似的生物学功能。结论为重组UreB作为Hp亚单位疫苗成分奠定了免疫学基础。