临床免疫学及检验第二课堂对培养学生和教师综合素质的作用

第二课堂是指第一课堂外的教学活动,第二课堂活动具有突出作用,主要表现在拓展学生视野、激发学生学习兴趣、锻炼学生科研能力和提升学生综合素质等方面[1].因此,第二课堂活动在高等教育中特别是高等医学教育过程中被广泛应用,也受到在校大学生的热烈欢迎[2].临床免疫学及检验作为医学检验本科的一门主干课程,是其专业知识构成的核心组成部分和医学检验临床工作的理论基础,在高素质医学检验人才培养中具有非常重要的作用.     

梅素螺旋体两种检测方法的临床比较

近来 ,一种抗密螺旋体属特异性ＩｇＧ酶免疫测定法———捕获ＥＬＩＳＡ (ＣＡＰＴＩＡＳｙｐｈｉｌｉｓ Ｇ)逐渐成为梅毒的诊断方法。本文对于 89份血清标本的荧光密螺旋体抗体ＩｇＧ吸收试验 (ＦＴＡ ＡＢＳ)结果 (不采用盲法 ,检测人员知道标本的ＲＰＲ结果 )用ＣＡＰＴＩＡＳｙｐｈｉｌｉｓ Ｇ进行了评估。抗体指数≥ 0 6 5 0、≤ 0 90 0进行重复试验 ,如果重复结果 >0 90 0则被认为阳性。有 13份标本两种方法结果不符 ,若以ＦＴＡ ＡＢＳ为金标准方法 ,ＣＡＰＴＩＡＳｙｐｈｉｌｉｓ Ｇ的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分…     

重组幽门螺杆菌疫苗口服免疫BALB/c小鼠的研究

目的研究重组幽门螺杆菌疫苗口服免疫BALB/c小鼠后免疫保护效果和维持时间，并初步探讨其免疫机制。方法ELISA检测特异性抗体水平；同时ELISPOT检测派伊尔结特异性抗体分泌细胞；RT-PCR显示T淋巴细胞IFN-γ、IL-4 mRNA表达差异；以培养、组织切片、尿素酶试验结果判断攻毒保护率。结果(1)疫苗组在胃、肠、气管冲洗液和血清产生高水平抗体；(2)疫苗组小鼠派伊尔结特异性抗体分泌细胞显著升高(P=0)；(3)抗原刺激后，免疫组T淋巴细胞的IFN-γ、IL-4 mRNA表达量升高；(4)免疫组攻毒保护率为86．7％-92．8％，且至少维持30周。结论重组幽门螺杆菌疫苗口服免疫小鼠后有良好的预防Hp感染作用；疫苗诱导的可能是TH1／TH2型免疫应答。     

幽门螺杆菌双价亚单位分子内佐剂疫苗的构建表达与纯化

目的 克隆表达幽门螺杆菌外膜蛋白烷基过氧化氢还原酶ahpC、ureB414功能片段基因,与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位构建融合基因ahpC-ureB414-ltB(aul).方法 采用重叠延伸PCR的方法,以AhpC做为融合蛋白前端,与UreB414功能片段及黏膜佐剂ltB依次串联,在片段间引入5个氨基酸的柔性Linker GGGGS进行连接;将融合基因构建在原核表达载体pET-22b( )中,经酶切及测序鉴定后转化宿主菌E. coli BL21(DE3),IPTG诱导表达融合蛋白ahpC-UreB414.ltB(AUL).融合蛋白经AKTA-explore纯化仪纯化融合蛋白.结果 PCR扩增出1 350 bp的目的 基因片段aul,工程菌pET22b-aul/BL21经IPTG诱导后,SDS-PAGE显示有新生的蛋白表达条带,相对分子质量约为50×103,与预期值一致,目的 蛋白约占菌体总蛋白的28.7%,重组蛋白用Ni2 -NTA树脂提纯.纯化后的蛋白质经SDS-PAGE分析可见单一条带,图像软件分析表明纯度可达85%以上.Western blot显示重组蛋白质具有良好的免疫反应性.结论 成功构建、表达融合蛋白rAUL,纯化后的融合蛋白保持各亚单位组分及佐剂的独立免疫反应性.     

幽门螺杆菌感染对胃内正常菌群结构的影响

目的比较分析不同人群胃内菌群的特点,探讨幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染对胃内菌群结构的影响,探讨胃内菌群与Hp相关疾病的关系。方法分别采集Hp阴性者、Hp正常携带者和Hp感染患者的胃黏膜标本220例,采用多种选择性培养基分别在需氧、微需氧、厌氧情况下分离培养细菌,结合Hp感染情况,分析胃内主要菌群的结构组成及定植数量。结果220例胃镜受检者中,Hp阴性82例,Hp阳性138例,Hp检出率为62.73%;乳杆菌检出率在Hp阴性者(59.76%)和Hp感染患者(27.84%)比较,差异有统计学意义(P<0.05),其余细菌在3类人群中检出率差异无统计学意义(P>0.05);细菌总量在Hp阴性者胃内的定植量显著高于Hp正常携带者和Hp感染患者(P<0.05);Hp阴性者中的乳杆菌、肠杆菌、链球菌所占比例分别为41.39%、16.90%、18.28%,检出数量和所占比例明显均高于Hp感染患者(P<0.05);厌氧菌在Hp感染患者的检出率最高,所占比例为43.77%,显著高于Hp阴性者(P<0.05)。结论Hp感染严重影响胃内菌群变化,胃内菌群(特别是乳杆菌与厌氧菌)与Hp致病性密切相关...     

壳聚糖-海藻酸钠幽门螺杆菌全菌蛋白微球的制备及表征

目的以壳聚糖、海藻酸钠为主要材料包裹幽门螺杆菌(HP)全菌超声蛋白抗原,制备新型HP疫苗制剂。方法将海藻酸钠、壳聚糖、大豆油以及HP超声全菌抗原制备成W/O/W型微球。通过扫描电镜、粒径分布仪等检测微球粒径大小;药物溶出度仪、BCA蛋白试剂盒检测微球的蛋白包封率及药物释放速率。结果所制备的微球形态规则,平均粒径3.33μm;蛋白包封率约为64.8%;微球呈显著缓释模式,缓释时间可达6d。结论壳聚糖-海藻酸钠微球包裹全菌蛋白可以作为HP疫苗的新型缓释制剂。     

人IL-24基因重组腺病毒的构建及其在A549细胞中的表达

目的构建含有人IL-24基因的重组腺病毒载体,并转染肺腺癌细胞A549细胞观察其感染能力,为进一步的基因治疗奠定实验基础.方法采用基因工程技术将人IL-24基因cDNA亚克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV上,采用PAdEasy系统进行细菌内同源重组,后通过脂质体将正确重组体包裹并转染293T细胞以包装并扩增病毒.采用PCR方法对重组腺病毒进行鉴定, 利用穿梭质粒中所带绿色荧光蛋白GFP报告基因,对病毒滴度和感染效率进行检定;最后采用免疫组化法对IL-24在A549中的表达进行检测.结果酶切和PCR结果证实IL-24基因重组腺病毒载体构建成功,病毒滴度达1.2×1010 pfu/ml,能够成功转染A549细胞并在其中进行表达.结论成功构建了有较强感染能力的含人IL-24基因的重组腺病毒载体.     

益活清胰汤与葡激酶在大鼠重症急性胰腺炎治疗中的协同作用

[目的]研究葡激酶(r-Sak)和益活清胰汤对大鼠重症急性胰腺炎(SAP)的治疗作用及2药合用的协同作用.[方法]162只SD大鼠随机分为假手术(A)组(n=18)、造模(B)组、益活清胰汤治疗(C)组、r-Sak治疗(D)组及益活清胰汤合用r-Sak治疗(E)组(均n=36).每组随机选9只用于测定18 h存活情况,SAP造模术后6、12、18h各取9只测定胰腺血流量,计算腹水量,测定血清淀粉酶(AMY)、脂肪酶(LPO),并在光镜下观察胰腺病理变化.[结果]A、B、C、D和E组大鼠18 h存活数分别为9、2、6、7、8只.A、C、D、E 4组SAP术后6、12、18 h AMY、LPO、腹水均较B组明显降低,C组较D组低,E组较C、D组低(均P＜0.05).术后各时点B组胰组织血流量呈逐渐下降趋势,B、C、D、E组较A组显著下降(P＜0.05).C、D、E 3组各时点胰组织血流量降低值＜B组,D组＜C组,E组＜C、D组(均P＜0.05).C、D、E组胰腺的病理损伤程度较B组减轻.[结论]r-Sak及益活清胰汤均对大鼠SAP具有治疗作用,且2药具有协同作用.     

重组人白细胞介素10的临床研究进展

白细胞介素10(IL-10)是人体多效细胞因子,在免疫系统中发挥着免疫抑制、抗炎及免疫调节的功能.就IL-10治疗银屑病、类风湿关节炎、克隆病、慢性丙型肝炎、器官移植等多种疾病的临床试验研究进展作一综述.     

抗重组人表皮生长因子单克隆抗体的制备及生物学特性鉴定

目的　制备出高效价的抗重组人表皮生长因子 (EGF)单克隆抗体。方法　以重组人表皮生长因子作为抗原 ,免疫Balb/c小鼠 ,以未免疫的Balb/c小鼠脾细胞为饲养细胞 ,运用细胞杂交瘤技术制备 ,间接ELISA法筛选产生针对人表皮生长因子的单克隆抗体细胞株 ;以体内诱生法产生腹水 ,并采用ProteinA Sepharose柱对其纯化 ,快速定性试纸鉴定McAb的Ig亚类 ,采用间接ELISA法相加实验鉴定抗原识别表位。结果　获得 3株产生针对人表皮生长因子的单克隆抗体细胞株EGF B2 、EGF C7、EGF A8,Ig亚分别为IgG1κ型 ,IgG1λ型 ,IgG3 κ型 ,亲和力常数分别为 2 .76× 10 10 、3.2× 10 9、1.4 5× 10 9。结论　成功制备 3株稳定分泌抗rhEGF的杂交瘤细胞株 ,产生的McAb特异性好 ,亲和力高 ,为探讨EGF的作用机制及临床应用奠定了基础 ,为肿瘤的诊断与治疗提供具有实用价值的研究工具 ,此外 ,为EGF的纯化提供实验材料