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41.
新时期检验专业研究生教育必须面向21世纪,实行以跟踪和掌握高、新、尖技术能力为代表的全面高素质教育,主要包括:无私的奉献精神教育;高水准英语运用及计算机网络操作能力训练;强烈的创新意识与创新思维培养;广博的知识结构组成。 相似文献
42.
对重组人白细胞介素-2(IL-2)工程菌pZL2分别进行温度诱导(42℃)和化学诱导(丝裂霉素C)培养,提取并测定其总RNA含量,然后使用地高辛标记的IL-2DNA探针进行RNA点渍杂交,定量分析了特异mRNA转录的动态变化。结果显示丝裂霉素C(MMC)对细菌总RNA的诱导强度高,但使IL-2基因转录发生的水平低,持续时间短;而42℃诱导对细菌总RNA的诱导强度较高,使IL-2基因特异转录的水平也 相似文献
43.
目的探讨耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)抗原IsdB活性片段(IsdB2)免疫保护作用。方法利用生物信息学技术预测分析出IsdB活性片段(IsdB2),PCR扩增编码IsdB2的基因片段,亚克隆至GST标签融合表达的原核表达载体pGEX-6P-2中,将载体转化入大肠杆菌XL-1 blue,通过IPTG诱导表达IsdB2/GST融合蛋白,利用GST亲和层析初步纯化获取IsdB2蛋白。用IsdB2蛋白抗原辅以氢氧化铝佐剂对小鼠进行免疫实验,统计小鼠存活率对IsdB2抗原的免疫性进行初步研究。结果重组质粒经过BamHⅠ和NotⅠ双酶切鉴定、核酸序列测定和IPTG诱导表达IsdB2/GST及酶切获取IsdB2蛋白的SDS-PAGE分析表明,IsdB2蛋白相对分子质量大小约72 000,GST标签相对分子质量大小约26 000,与预期相符合。用IsdB2蛋白对小鼠进行3次疫苗免疫实验,IsdB2对小鼠的保护率分别为84.6%、50%和60%。结论成功构建重组表达载体pGEX-6P-2-IsdB2,利用大肠杆菌表达系统、GST亲和层析和酶切方法获得IsdB2蛋白抗原,通过3次动物疫苗免疫实验结果表明IsdB2具有免疫保护性,为研制新型有效的MRSA疫苗奠定实验基础。 相似文献
44.
幽门螺杆菌hpaA真核表达质粒的构建及鉴定 总被引:1,自引:1,他引:0
目的 克隆幽门螺杆菌hpaA基因,并构建其真核表达质粒。方法 以HpNCTC11637基因组DNA为模板, PCR扩增hpaA基因,亚克隆至pMD18 T载体中,目的基因经酶切纯化后插入pTCAE,转化E.coliDH5α,酶切并测序鉴定正 确的重组质粒命名为pT hpaA。电穿孔法将pT hpaA转染CHO细胞,Westernblot检测HpaA蛋白的表达。结果 克隆重组 得到pT hpaA,将pT hpaA电穿孔法转染CHO后,培养上清经Westernblot检测,在相对分子量为30000条带处出现特异性抗 原抗体反应。结论 成功构建了幽门螺杆菌hpaA真核表达质粒,体外CHO细胞转染和Westernblot实验证实了HpaA蛋 白的表达,为进一步的免疫实验奠定了基础。 相似文献
45.
大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位基因工程菌发酵工艺的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
目的研究建立大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)基因工程菌的发酵工艺.方法先通过摇瓶培养初步确定工程菌的最适生长条件,然后以此为基础在发酵罐中比较、筛选影响菌体生长和目的蛋白表达率的各种条件,并进一步对发酵工艺进行改良优化.结果经试验确定了rLTB基因工程菌发酵罐培养的各项条件的最佳组合,优化后工程菌菌体产量平均可达40.5 g/L,目的蛋白的表达率平均为30.6%.结论建立了稳定、高效的工程菌发酵工艺. 相似文献
46.
47.
运用Bal 31末端缺失技术将人IL-2Rα cDNA进行3’—5’的单向缺失,获得了IL-2RαcDNA3’端的系列缺失子。经DNA顺序分析表明:这些缺失克隆分别含有不同位置上的Poly(A)信号序列,将它们克隆到穿梭质粒P~(91023)上,得到了系列缺失子的表达性质粒P~(91-IL2R),为进一步分析Poly(A)及3’非转译区(3’UTR)对IL-2Rα基因转译调控的影响创造了必要条件。 相似文献
48.
将人IL-2Ra cDNA导入CHOdhfr~-细胞,经ELISA对180个重组克隆的鉴定,筛选出13株高产克隆,其OD值均大于0.80。再经MTX扩增基因试验,获得了3株更高表达水平的克隆,其OD值分别为1.95、1.86及1.66。稳定性试验表明:MTX诱导前的高效表达水平在30代次时未见改变,MTX的扩增基因效果可维持15—20代次,rIL-2Ra的分子量为50—55kd,具有Tac抗原性和结合IL-2的能力。Southern分析证实:MTX是通过扩增外源基因的份额来提高重组产物的表达水平。本试验为发酵培养重组CHO细胞、大量制备IL-2Ra蛋白奠定了坚实基础。 相似文献
49.
重组幽门螺杆菌热休克蛋白A亚单位的高效表达及其初步纯化 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 在大肠杆菌中高效表达幽门螺直菌的热休克蛋白A基因(hspA),并对其初步纯化。方法 用巢式PCR扩增hspA基因。经测序证实后,克隆于表达载体pIM-1中,转化大肠杆菌。以SDS-PAGE和免疫印迹分析目的蛋白的表达,并测定N-端氨基酸的序列。采用固相镍离子亲和层析,对重组hspA进行初步纯化。结果 扩增的hspA基因为357bp,并在大肠杆菌中得到高效可溶性表达。重组蛋白的表达量最高可达细菌总蛋白的60.5%。免疫印迹及氨基酸测序结果证实,表达产物为幽门螺杆菌hspA亚单位。固相镍离子亲和层析初步纯化的重组HspA的纯度为87.8%,结论 hspA亚单位的高效表达与初步纯化,为批量获得Hp亚单位抗原打下了基础。 相似文献
50.
幽门螺杆菌cagA基因与致病性的研究 总被引:6,自引:1,他引:5
1材料和方法1.1材料1997/1998我校附属医院消化科门诊和住院部患者.通过临床和内镜镜检诊断为十二指肠溃疡病(DU)24例,胃溃疡病(GU)19例,慢性胃窦胃炎(GI)39例,无明显病变者20例.年龄21岁~69岁,男女比例相当.1.2方法①H... 相似文献