国产标准化一氧化氮(NO)检测试剂盒问世

国产标准化一氧化氮（ＮＯ）检测试剂盒问世李文建１邹全明１自１９８７年Ｐａｌｍｅｒ等首次证实血管内皮细胞分泌的血管舒张因子（ＥＤＲＦ）与ＮＯ同质后，对ＮＯ的研究越来越受到广大医学科学工作者的重视。在生物体内，ＮＯ作为一种反应性极强的自由基，兼有第二信使...     

重组金黄色葡萄球菌疫苗免疫血清中功能性抗体OPK检测方法的建立

目的建立重组金黄色葡萄球菌疫苗免疫血清中功能性抗体检测方法。方法在参考美国阿拉巴马大学的多重调理吞噬实验(UAB-MOPA)方法的基础上,构建并鉴定HL-60效应细胞库及金黄色葡萄球菌工作种子批,完成补体浓度、调理和吞噬孵育时间及血清预稀释倍数等关键实验参数的优选。在此基础上对5种不同来源金黄色葡萄球菌进行调理吞噬杀菌(OPK)活性的检测。结果 HL-60细胞经0.8%DMF诱导分化4 d后,CD35表达量为87.1%,CD71表达量为2.82%,活细胞比例为75.7%;靶细菌工作种子批冻存复活率>90%,工作稀释度>1 000;体系中补体终浓度确定为6%;选择30 min、60 min作为调理和吞噬孵育时间;血清预稀释倍数为2倍;疫苗免疫血清对5种不同来源的金黄色葡萄球菌均表现出良好的OPK活性及标准的"S"型杀菌曲线。结论本研究优化建立的OPK检测方法,可有效评价重组金黄色葡萄球菌疫苗的体外功能性抗体水平,为疫苗临床试验样本检测及免疫有效性替代终点的确立提供了重要的技术支撑。     

大肠杆菌不耐热肠毒素的分子生物学特性

大肠杆菌不耐热肠毒素是由A、B两种亚单位组成的AB5型蛋白 ,其中A亚单位具有ADP 核糖基化酶活性 ,B亚单位具有与肠粘膜上皮细胞膜上的神经节苷脂 LT的受体结合的作用。它能引起人和猪等动物的腹泻。另外 ,它还是强有力的粘膜免疫原和粘膜免疫佐剂。本文就不耐热肠毒素的分子生物学作一综述     

幽门螺杆菌双亚单位表位疫苗的构建及免疫原性研究

目的构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)黏附素(HpaA)和尿素酶B亚单位(UreB)双亚基多表位疫苗,并对其免疫原性进行研究。方法设计引物采用PCR法将黏附素(HpaA)的一个B细胞表位与尿素酶B亚单位的三个TH表位及一个B细胞表位串联起来(HUepi),表位之间用两个赖氨酸(KK)间隔,T-A克隆后构建融合基因表达质粒pET-22b( )-HUepi,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,重组蛋白采用阳离子和疏水层析进行纯化,经鉴定后皮下免疫BALB/c小鼠,检测细胞免疫应答及体液免疫应答。结果PCR法扩增出了约233bp的目的片段;原核表达质粒pET-22b( )-HUepi经酶切及测序鉴定,目的基因序列与设计序列一致;重组蛋白HUepi表达率约20.0%,PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量(Mr)约8.38×103Dr,破菌后电泳证实目的蛋白以可溶形式表达,纯化后蛋白纯度大于97.6%,经N端测序证实为设计的表位疫苗蛋白,TH表位多肽、表位疫苗蛋白及rUreB均能够刺激表位疫苗致敏的小鼠淋巴细胞增殖(SI>2),并且此疫苗能够刺激机体产生特异性抗体。结论Hp HpaA、UreB双亚基表位疫苗HUepi经基因克隆获得了较高的表达量,并初步显示了较好的免疫原性。为新一代Hp疫苗的研制奠定实验基础。     

重组细胞分泌可溶性IL-2R的动态检测及放免分析

ELISA检测表明:重组CHO细胞产生的IL-2Rα分子主要分布在细胞膜上,少量分泌到膜外成为可溶性IL-2R(sIL-2R)。sIL-2R产生的时相与膜IL-2Rα相似,但后者有一个较长的高浓度稳定期。此结果提示:膜IL-2Ra代谢比培养液中sIL-2R明显活跃,但sIL-2R的水平并不随膜IL-2Rα含量增加而改变,sIL-2R这种恒定的代谢方式可能包含着独特的免疫生物学意义。放免受体分析表明:重组IL-2Rα的最大结合容量(Bmax)为33000/细胞,KD为1.5×10~(-11)M。大剂量IL-2才能阻断Wu69McAb与IL-2Rα的结合。提示:IL-2与Wu69 McAb结合IL-2Rα的位点虽然不同,但可能十分靠近。     

新型冠状病毒疫苗研发进展与挑战

新型冠状病毒(2019-nCoV)感染暴发流行对全球公众健康构成了严重威胁,疫苗接种是有效预防病毒感染流行的手段。2019-nCoV与急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV)和中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)同属于β-冠状病毒。基于对SARS-CoV和MERS-CoV的了解,科学家对2019-nCoV病毒特征的研究、候选抗原及表位的鉴定、动物模型的建立、免疫应答的检测,疫苗的设计等工作取得了快速进展。新型冠状病毒疫苗(新冠疫苗)的研发也取得了快速进展,新冠疫苗类型几乎涵盖了目前疫苗研究的所有形式,包括灭活疫苗、重组蛋白疫苗、病毒载体疫苗、核酸疫苗(mRNA疫苗与DNA疫苗)等。至2020年3月,已有2项新冠疫苗进入了Ⅰ期临床试验,分别为我国军事医学科学院联合天津康希诺生物股份公司研发的基于腺病毒载体的重组新冠疫苗和美国Moderna公司的mRNA 疫苗,两种疫苗均以2019-nCoV的刺突蛋白为抗原靶标。同时,新冠疫苗研发仍面临着许多未知的挑战,如2019-nCoV病毒抗原特征、抗原变异、机体的保护性免疫应答特征以及对老年及基础病人群是否具有保护,新冠疫苗量产的生产工艺等方...     

新冠病毒DNA疫苗的研究现状及展望

全球新冠病毒的流行对社会生产和人民生活都带来了严重的不利影响。疫苗是控制新冠病毒传播的有力武器,其中DNA疫苗具有安全、高成本效益以及易于生产的特点,更重要的是其可以诱导机体产生免疫应答并阻断病毒感染。本文综述了已进入临床试验以及在临床前研究的新冠病毒DNA疫苗,并对其作用特点以及保护效果进行了分析。     

幽门螺杆菌双亚单位表位融合蛋白的构建、表达及鉴定

目的 构建和表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)黏附素(HpaA)和尿素酶B亚单位(UreB)表位串联体(HUepi)与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)融合蛋白(HUepi-LTB),并对其进行纯化和鉴定.方法 采用PCR技术分别扩增HpaA-UreB表位多肽编码基因HUepi和LTB的编码基因LtB,重叠延伸PCR将2段基因拼接起来,T-A克隆后构建融合基因表达质粒pET-22b( )-HUepi-LtB,经酶切鉴定后转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,采用阳离子和阴离子交换层析进行纯化,PAGE检测、N端测序和western blotting、ELISA检测、GM1活性检测.结果 成功构建表位串联体(HUepi)与LTB融合蛋白的高效表达质粒pET-22b( )-HUepi-LtB,重组工程菌pET-22b( )-HUepi-LtB/BL21经IPTG诱导目的蛋白表达率约28%,PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量(Mr)约20.7×103,破菌后电泳证实目的蛋白以包涵体形式表达,纯化后蛋白纯度达97 %,免疫学鉴定该融合蛋白与兔抗LTB抗血清可以发生特异性的结合.结论 Hp HpaA-UreB表位串联体(HUepi)与LTB融合蛋白(HUepi-LTB)经基因克隆获得了较高的表达量,并初步显示了较好的免疫活性.为新一代Hp疫苗的研制奠定基础.