BalB/c小鼠口服重组幽门螺杆菌尿素酶B亚单位的免疫应答

目的：评价重组尿酶B亚单位（rUreB）作为幽门螺杆菌（Hp)口服疫苗成份的效果、探讨Hp的免疫保护机制。方法：采用重组Hp保护性抗原UreB与粘膜免疫佐剂霍乱毒素B亚单位（CTB）共口服免疫BalB/c小鼠，ELISA分析血清、唾液和粪便、胃粘液中IgG、IgA抗体水平，体外培养脾淋巴细胞在Hp刺激下的增殖情况及IL－4、IFN－γ的变化。结果：BalB/c小鼠口服rHreB和CTB混合制剂能有效激发机体产生全身和局部特异性的体液免疫应答和细胞免疫应答。结论：rUreB可以作为Hp疫苗成分用于Hp感染的预防和治疗。     

人白细胞介素-18在大肠杆菌中的高效表达

目的 在大肠杆菌中实现人IL－18成熟蛋白（mhIL-18）的高效表达。方法 采用RT－PCR由人肝脏Kupffer细胞中扩增mhIL-18基因，构建非融合型原核表达质粒petTT/mhIL-18，转化至大肠杆菌DH5α，用IPTG诱导热处理重组蛋白表达，超声裂解细胞提取包涵体，采用SDS－PAGE及Western blot分析重组蛋白的表达，包涵体蛋白经8mol/L尿素溶解，透析复性，ELISA检测重组蛋白诱导人外周血单个核细胞（PBMC）产生IFN－γ的能力。结果 所扩增的mhIL-18基因与GenBank公布的序列一到，经IPTG诱导，mhIL-18在大肠杆菌中的表达量占菌体蛋白的40％以上，，在细胞中以包涵体形式存在，复性的重组蛋白具有诱生IFN-γ的能力。结论 mhIL-18可在大肠杆菌中高效表达。     

肠出血性大肠杆菌O157:H7 EspA与IntiminC300融合蛋白的构建表达

目的构建表达肠血性大肠杆菌（EHEC）0157：H7Ⅲ型分泌蛋白EspA与紧密粘附素G端免疫保护性片断（Intindn C300）的融合蛋白（EspA-IntiminC300）。方法采用PCR技术从EHEC0157lH7基因组中扩增EspA的编码基因espA及IntiminC300的编码基因eaeC300，T-A克·隆后依次构建至表达载体pET-28a（＋），转化宿主细胞E．coliBL21（DE3），测序鉴定，IPTG诱导表达，SDS-PAGE检测其表达量及表达形式，亲和层析法纯化目的蛋白，免疫印迹分析免疫反应性。结果PCR法自EHEC0157tH7基因组中分别扩增出了约580bp（espA）和900bp（eaeC300）的目的片段，将二者融合构建了重组质粒pET-28a（＋）-espA-eaeC300，测序结果与理论预测值一致性为99．9％（1501／1502）。融合蛋白在工程菌中表达量约40％，PAGE初步测定目的蛋白的相对分子量（Mr）约54×10^3Da，破菌后电泳证实目的蛋白主要以包涵体形武表达，包涵体洗涤后纯化，获得目的蛋白纯度约90％。免疫印迹显示融合蛋白能分别与兔抗EspA和IntiminC300血清发生免疫反应。结论高效表达了融合蛋白（EspA-IntiminC300），此融合蛋白具有良好的免疫反应性和免疫原性，为研制EHEC0157：H7多亚单疫苗奠定了基础。     

幽门螺杆菌相关性疾病的研究现状

自从1983年Marshall首次分离出幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，简称耶）以来，国内外学者对Hp及其致病性进行了大量研究。Hp是一种全球性流行的病原菌。在发达国家，成人感染率为50％左右；在发展中国家，10岁以下儿童的感染率达50％。成人感染率达80％以上，且3／4是在儿童时期获得感染。现有资料表明：局部炎症可造成系统损害，持续感染能诱发慢性炎症和免疫反应，引起感染局部和远位器官的损害。除胃肠疾病与Hp相关外，Hp感染还可引起心脑血管、呼吸系统、肝胆、自身免疫性、皮肤、贫血等疾病。现综述如下。     

面向21世纪 培养高素质检验医学研究生

新时期检验专业研究生教育必须面向21世纪，实行以跟踪和掌握高、新、尖技术能力为代表的全面高素质教育，主要包括：无私的奉献精神教育；高水准英语运用及计算机网络操作能力训练；强烈的创新意识与创新思维培养；广博的知识结构组成。     

幽门螺杆菌沙鼠感染模型的定量分析研究

目的　建立幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,Hp)蒙古沙鼠感染模型 ,并通过比较定量培养、快速脲酶试验和ELISA三种方法 ,确定Hp动物模型的最佳评判指标。方法　采用临床分离的Hp强毒株对 2 0只蒙古沙鼠进行感染 ,4周后剖杀。取血按常规ELISA法检测抗Hp抗体 ;分别剪取胃窦、胃体和胃底粘膜组织作定量培养 ;其余组织作快速脲酶试验及病理检查。结果　经定量培养结果显示沙鼠的Hp感染率达到 80 % (16/ 2 0 ) ,胃窦、胃体和胃底的Hp定植密度的对数均值分别为 5 2 4± 1 5 0、4 11± 3 2 2、和0 97± 2 3 9;16只Hp阳性沙鼠中脲酶试验有 4只阳性 ,ELISA有 7只阳性 ,阳性鼠的感染均值显著高于阴性鼠。结论　经筛选的Hp强毒株成功感染沙鼠后 4周 ,Hp主要定植于胃窦和胃体部 ;定量培养仍是评价Hp动物模型的最有效方法     

不同诱导因素对PLPR启动子控制下人IL—2基因转录的影响

对重组人白细胞介素－２（ＩＬ－２）工程菌ｐＺＬ２分别进行温度诱导（４２℃）和化学诱导（丝裂霉素Ｃ）培养，提取并测定其总ＲＮＡ含量，然后使用地高辛标记的ＩＬ－２ＤＮＡ探针进行ＲＮＡ点渍杂交，定量分析了特异ｍＲＮＡ转录的动态变化。结果显示丝裂霉素Ｃ（ＭＭＣ）对细菌总ＲＮＡ的诱导强度高，但使ＩＬ－２基因转录发生的水平低，持续时间短；而４２℃诱导对细菌总ＲＮＡ的诱导强度较高，使ＩＬ－２基因特异转录的水平也     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌IsdB活性片段的克隆、表达及抗原免疫保护性初步研究

目的探讨耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)抗原IsdB活性片段(IsdB2)免疫保护作用。方法利用生物信息学技术预测分析出IsdB活性片段(IsdB2),PCR扩增编码IsdB2的基因片段,亚克隆至GST标签融合表达的原核表达载体pGEX-6P-2中,将载体转化入大肠杆菌XL-1 blue,通过IPTG诱导表达IsdB2/GST融合蛋白,利用GST亲和层析初步纯化获取IsdB2蛋白。用IsdB2蛋白抗原辅以氢氧化铝佐剂对小鼠进行免疫实验,统计小鼠存活率对IsdB2抗原的免疫性进行初步研究。结果重组质粒经过BamHⅠ和NotⅠ双酶切鉴定、核酸序列测定和IPTG诱导表达IsdB2/GST及酶切获取IsdB2蛋白的SDS-PAGE分析表明,IsdB2蛋白相对分子质量大小约72 000,GST标签相对分子质量大小约26 000,与预期相符合。用IsdB2蛋白对小鼠进行3次疫苗免疫实验,IsdB2对小鼠的保护率分别为84.6%、50%和60%。结论成功构建重组表达载体pGEX-6P-2-IsdB2,利用大肠杆菌表达系统、GST亲和层析和酶切方法获得IsdB2蛋白抗原,通过3次动物疫苗免疫实验结果表明IsdB2具有免疫保护性,为研制新型有效的MRSA疫苗奠定实验基础。     

幽门螺杆菌hpaA真核表达质粒的构建及鉴定

目的　克隆幽门螺杆菌hpaA基因,并构建其真核表达质粒。方法　以HpNCTC11637基因组DNA为模板, PCR扩增hpaA基因,亚克隆至pMD18 T载体中,目的基因经酶切纯化后插入pTCAE,转化E.coliDH5α,酶切并测序鉴定正 确的重组质粒命名为pT hpaA。电穿孔法将pT hpaA转染CHO细胞,Westernblot检测HpaA蛋白的表达。结果　克隆重组 得到pT hpaA,将pT hpaA电穿孔法转染CHO后,培养上清经Westernblot检测,在相对分子量为30000条带处出现特异性抗 原抗体反应。结论　成功构建了幽门螺杆菌hpaA真核表达质粒,体外CHO细胞转染和Westernblot实验证实了HpaA蛋 白的表达,为进一步的免疫实验奠定了基础。