生物技术制药科研式实验教学的实践与体会

生物技术制药是当今世界科学发展中极为重要、极为活跃的领域。随着该产业的迅猛发展,对生物技术制药人才的需求也日益增加。鉴于此,第三军医大学从2007年开始在药学和生物技术本科专业开设了《生物技术制药》这门课程。该课程是一门新兴的交叉学科,目前国内开设本课程的院校较少,可借鉴的经验不多。教学实践过程中,本校通过充分利用国家免疫生物制品工程技术研究中心的平台优势,在该课程的实验教学中推广科研式的教学模式,取得了良好的效果,现将如何提高该课程实验教学质量的措施和体会总结如下。     

建立幽门螺杆菌感染动物模型需考虑的因素

幽门螺杆菌感染具有普遍性和长期性,感染后若不治疗,将持续存在并对胃的生理造成影响,从而引发各种疾病。目前幽门螺杆菌治疗主要以抗生素为主,随着耐药率上升,疫苗成为理想的对抗手段。在幽门螺杆菌疫苗的研究工程中,动物模型的建立至关重要。本文通过查阅文献,简要综述幽门螺杆菌感染模型建立需考虑的因素,根据菌株特性确定感染使用的菌株,再根据菌株确定动物种属,然后再细化感染细节,从而使模型更接近于人类感染情况,才能进一步验证疫苗的安全性和有效性,促进幽门螺杆菌疫苗的研发。     

IL-17多态性与慢性萎缩性胃炎的相关性研究

目的探讨白细胞介素-17A,-17F(IL-17A,-17F)基因多态性与慢性萎缩性胃炎(chronic atrophic gastritis,CAG)的相关性。方法采用病例-对照研究方法,收集经组织学确诊的慢性萎缩性胃炎患者129例和健康对照人群223例,收集外周血标本,提取DNA,运用TaqManMGB探针方法进行多态性检测。同时所有样本经组织快速尿素酶检测(RUT)和血清酶联免疫吸附法(ELISA)抗Hp-IgG抗体检测,以测定人群幽门螺杆菌(Helicobater pylori,Hp)感染率。结果IL-17A(rs2275913,G-197A)、IL-17F(rs76378,7488T/C)位点的基因型和等位分布在慢性萎缩性胃炎组和健康献血员正常对照组中差异均无统计学意义(P>0.05)。IL-17F(rs766748,6400A/G)在慢性萎缩性胃炎组中的等位频率显著高于正常对照组(P=0.004)。与未携带有IL-17F 6400A/GA等位的个体相比,携带有IL-17F 6400A/GA等位的个体显著的增加了慢性萎缩性胃炎的易感性。经非条件Logistic回归校正年龄、性别、Hp感染等因素后,在...     

pT-ureB及pT-hpaA核酸疫苗诱导小鼠免疫应答的实验研究

目的观察并比较携带Hp不同抗原基因的质粒pTCAE-ureB(pT-ureB)和pTCAE-hpaA(pT-hpaA)肌注小鼠后诱导的体液免疫应答。方法构建真核表达质粒pT-ureB;与已成功构建的质粒pT-hpaA分别作为疫苗方案,肌肉注射免疫BALB/c小鼠并设置空质粒对照,末次免疫后第2、4、6周分别用间接ELISA法检测小鼠血清特异性IgG抗体滴度。结果两免疫组在末次免疫后第2周均可出现特异性IgG,抗体滴度随时间逐渐增高;末次免疫后第6周,两免疫组的抗体滴度与对照组相比较,差异极显著(P<0.01);且pT-ureB免疫组抗体滴度显著高于pT-hpaA(P<0.01)。结论pT-ureB具有良好的免疫原性,诱导体液免疫应答的能力优于pT-hpaA。     

Th17细胞及IL-17在病原微生物感染中的研究进展

在机体的适应性免疫应答中,CD4+T细胞作为效应T细胞的重要成员之一,参与免疫应答的各个阶段,能协调固有免疫和适应性免疫系统的功能活性,并在免疫调节中发挥着关键作用.     

致病性大肠杆菌引发宿主细胞A/E损伤分析方法的建立

目的 建立一种能够对由致病性大肠杆菌引发的宿主细胞黏附及擦拭性损伤(A/E损伤)进行半定量分析的方法,为进一步研究其致病性提供评价手段.方法 以大肠杆菌黏附HeLa细胞作为感染模型.采用姬姆萨染色和荧光肌动蛋白染色实验,通过菌落计数及肌动蛋白聚集数量定量分析,统计学处理,比较EPEC 43095、EHEC 0157:H7 Sakai株和弱毒株EHEC 0157:H7 0013015以及E. coli DH5α对HeLa细胞的黏附能力,评价它们对细胞的损伤程度.结果 EPEC对细胞的黏附及擦拭性损伤程度大于EHEC(P<0.05).EHEC Sakai和00B015在黏附能力上差异不大(P>0.05),但是,Sakai在肌动蛋白聚集形成能力方面却明显强于00B015(P<0.05).结论 成功建立了一种能够对EPEC或EHEC所引发的宿主细胞黏附及擦拭性损伤进行半定量分析的方法.     

幽门螺杆菌疫苗的产业化对策思考

幽门螺杆菌疫苗项目研发启动于1995年,2008年已顺利通过国家食品药品监督管理局组织的审评,目前幽门螺杆菌疫苗已获得国家一类新药证书。该文对该项目产业化存在的问题进行了分析、并提出了实现产业的对策思考。     

中枢神经系统中细胞因子网络与AIDS痴呆综合征的相关性(综述)

一、AIDS痴呆综合征（ADC）及中枢神经系统中HIV一至的表达（－）AIDS痴呆综合征人类免疫缺陷病毒1型（HIV－1）在中枢神经系统（CNS）的感染是ADC发生的直接原因，在没有机会致病菌感染的情况下，ADC同样可以发生。80％的艾滋病成年患者伴有ADC这类亚急性脑炎。临床上，ADC表现为认知、运动和行为机能障碍。病理上，ADC表现为大脑萎缩及包括基底神经节在内的白质和深灰质结构异常。其结构异常包括：门）弥漫性白质苍白和空泡形成；（2）稀疏的病灶伴随着巨噬细胞、多形核细胞和淋巴细胞浸润。T淋巴细胞浸润在一定程度上受限…     

人淋巴细胞抑制素基因克隆与表达的研究

目的：获人SPN基因，构建SPN的原核表达载体。方法：采用RT－PCR的方法从激活的人外周血淋巴细胞的总cDNA中得到1493bp的人SPN基因，NdeI,BamH I双酶切后定向克隆到原核表达载体pET-11-c中，全自动测序仪测序，转化宿主菌BL21后，IPTG诱导，SDS－PAGE电泳分析。结果：成功克隆到人SPN基因，并构建表达质粒，SDS－PAGE电泳证实目的蛋白表达。结论：为进一步研究SPN的免疫抑制机理和作用以及探讨SPN作为新型生理性免疫抑制剂的可能性打下了坚实的基础。