急性坏死性胰腺炎大鼠心肌核因子-κB激活及重组葡激酶的干预作用

目的 研究重症急性胰腺炎(SAP)心肌功能损害时心肌核因子-κB (NF-κB)的活化及葡激酶的干预作用.方法 63只SD大鼠随机分为假手术组(n = 9)、ANP组(n = 27)、葡激酶干预组(n = 27),ANP模型采用5%的牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射方法建立.干预自造模前2 d腹腔注射葡激酶1.5 mg/kg体重,一天2次,共4次.ELISA法测定制模后6 h、12 h、24 h各时点血TNF-α、IL-6含量;RT-PCR检测心肌NF-κB mRNA的表达;免疫组化法检测心肌NF-κB蛋白的表达,常规观察胰腺及心肌组织的病理变化.结果 ANP组术后6 h大鼠心肌NF-κB mRNA及NF-κB蛋白表达异常增高,TNF-α、IL-6呈进行性升高,干预组胰腺及心肌组织的病理变化减轻.心肌NF-κB mRNA及蛋白表达下调,血TNF-α、IL-6明显下降,与ANP组比较,差异均显著(P＜0.05).结论 ANP大鼠的心肌损伤可能与循环中TNF-α、IL-6水平升高导致的心肌NF-κB活化有关.葡激酶对SAP并发的心肌损伤具有防治作用.     

治疗性疫苗研究的现状及展望

18 90年Ｋｏｃｈ提出用结核菌素和甘油悬液注射来治疗结核病 ,开创了用疫苗治疗疾病的先例。此后的几十年中 ,人类对疫苗疗法进行了大量的研究并取得了一定的成就。但是 ,自从抗生素问世以来 ,疫苗作为一种治疗传染病的方法几乎被遗忘 ,疫苗疗法的研究陷入低潮。直到证实疫苗治疗能增强获得性免疫缺陷综合征患者对人类免疫缺陷病毒 (ＨＩＶ)的天然免疫力 ,人们再一次转向通过刺激免疫防御机制来治疗传染病[1 ] 。一、治疗性疫苗发展的必要性和可能性第一 ,必要性。目前已有大量关于细菌和原虫耐药的报道 ,个别微生物几乎能耐所有药物。就结…     

Balb/c小鼠口服幽门螺杆菌疫苗rLTB-HspA的免疫应答

目的　研究幽门螺杆菌 (Hp)热休克蛋白A (rHspA)与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位 (LTB)融合蛋白 (rLTB HspA)作为口服疫苗的免疫应答效果。方法　采用rLTB HspA口服免疫Balb c小鼠 ,ELISA分析小鼠血清、胃肠黏液中IgG、IgA抗体水平 ,体外培养脾淋巴细胞在Hp刺激下的增殖情况及IL 4、IFN γ的变化。结果　Balb c小鼠口服rLTB HspA能有效激发机体产生全身和局部特异性的体液免疫应答和细胞免疫应答。结论　Balb crLTB HspA可作为预防和治疗Hp感染的候选疫苗之一     

应用Hoefer GE 200 Gel Eluter纯化重组的LTB

目的：纯化基因重组表达的大肠杆菌毒素B亚单位（LTB），方法：采用Hoefer GE 200 Gel Eluter从聚丙烯酰胺凝胶中回收LTB蛋白，SDS－PAGE，HPLC分析其纯度，western-blot分析其免疫学性质，结果：电洗脱1次可获得300ug重组蛋白，纯化蛋白经Tricine-SDS-PAGE电泳表现为单一蛋白质带，HPLC检测纯度为99．46％，免疫印迹证实其保持有免疫学活性。结论；该系统纯化LTB蛋白操作方便，快捷，所得蛋白纯度好，回收率高。     

幽门螺杆菌保护性免疫机制及疫苗投递途径研究现状

早在1994年WHO就已将幽门螺杆菌(helicobacterpyloyi,HP)确认为一级致癌因子。但长期以来对HP感染的药物治疗一直受到根除率低、费用昂贵、病人依从性差以及耐药菌株出现等诸多因素制约,使现阶段全球感染人数仍呈上升趋势。HP疫苗的研制和应用对有效控制及降低HP感染率、发病率     

重组大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位的表达、纯化及黏膜佐剂活性研究

目的　对大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)进行基因克隆、重组表达、蛋白纯化和黏膜佐剂活性分析。方法　应用PCR技术从产肠毒素大肠杆菌基因组中扩增出不耐热肠毒素B基因,将此构建于原核表达载体pET 11C,并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,然后采用D(+) immobilizedgalactose亲和层析柱对重组蛋白进行纯化。以纯化后重组LTB为佐剂,与幽门螺杆菌重组尿素酶B亚单位蛋白(rUreB)共同口服和滴鼻免疫BALB c小鼠,分析重组LTB的黏膜佐剂活性。结果　PCR扩增出390 bp LTB基因,与GenBank公布的核苷酸序列的相似性为99.5%。重组LTB蛋白的表达率为6%,以胞周质分泌形式表达,经亲和层析后蛋白纯度大于95%。该重组蛋白保持了与神经节苷脂GM1结合的生物学活性和良好的免疫原性及免疫反应性。动物试验表明,重组LTB与rUreB抗原共同口服和滴鼻免疫小鼠后的特异性血清IgG及鼻腔、气管、胃黏膜和小肠黏膜sIgA水平显著高于单独rUreB抗原免疫组(P<0.05)。结论　所获得的重组LTB具有较好的黏膜佐剂活性,为其在黏膜疫苗中的应用奠定基础。     

PELA幽门螺杆菌口服疫苗微球黏膜免疫研究

目的：应用复乳挥发法制备PELA泛影葡胺显影微球与缨门螺杆菌超声上清口服疫苗微球，并进行靶向与黏膜免疫研究。方法：采用CT技术，研究显影微球的靶向，PELA幽门曙杆菌超声上清口服疫苗微球口服免疫小鼠后，运用ELISA法检测血清，唾液，肠粘液的抗体改变情况，ELISPOT法分析派伊尔氏结（PP结）抗原特异性抗体形成细胞（ASC）的数量增减，结果；口粒径在10um以下的微球，首先粘附在胃肠黏膜表面，后投递于PP结；H.pylori疫苗微球免疫后可诱导较高的唾液sIgA水平和肠道sIgA反应，PP结抗原特异性抗体形成细胞（ASC）数量与肠道 sIgA水平密切相关，结论：可生物降解的PELA微球可用于靶向口服疫苗的研究。