幽门螺杆菌粘附素基因hpαA研究

目的 克隆表达幽门螺杆菌鞭毛粘附素基因hpαA，筛选Hp疫苗有效抗原成分。方法 采用PCR技术从幽门螺杆菌基因组中扩增hpαA基因，克隆至表达载体pET-28a( )中，IPTG诱导表达重组蛋白HpaA(rHpaA)，鉴定rHpaA蛋白的表达形式。结果 pPHA重组菌以包涵体形式表达rHpaA，表达量约占全菌的35％。纯化后的rHpaA免疫家兔获得了高效价的兔抗HpaA抗血清，且该抗血清能够与不同坳菌株中相应分子量条带发生抗原抗体反应，并能在一定程度上抑制由。Hp引起的RBC凝集现象。结论 坳鞭毛粘附素HpaA在重组大肠杆菌中能够高效表达，且具有良好的免疫反应性。     

狙击幽门螺杆菌:征战"溃疡"3大战役

抗酸,保护胃黏膜,促进溃疡愈合——这是人们对治疗 消化性溃疡(包括胃溃疡和十二指肠溃疡)的传统认识和 治疗方法,也有不少患者经此治疗后溃疡病好转。然而, 现在患了溃疡病到医院就诊,医生不仅要求患者服用抗酸 或抑酸药物,而且还开出了针对细菌的抗生素。这是为什 么呢?     

利用α-溶血素系统分泌表达重组人白介素-6

目的 构建基于大肠杆菌α-溶血素(HlyA)分泌机制的原核胞外分泌表达载体系统,将重组人白介素6(rhIL-6)分泌至胞外培养基中.方法 利用分子克隆手段,从引起人泌尿道感染的大肠杆菌UPEC J96菌株染色体上获得了α-溶血素(HlyA)系统的分泌功能基因,与外源基因片段hIL-6一起克隆至pQE30骨架载体,构建了胞外分泌表达质粒pIsQ,转化E. coliTop10,诱导表达后通过Western blot检测培养上清中hIL-6的表达.结果 获得了与设计完全一致的pISU载体,Western blot结果显示,可以在pISQ/E. coli Top10培养液上清中检测到与His-hIL6-HlyAs融合蛋白相对分子质量大小一致的特异条带.结论 大肠杆菌HlyA分泌系统操纵子能够在染色体和质粒间传递,rhIL-6能够通过该系统被特异地分泌至胞外培养基中,以可溶形式存在,为后续生物学研究奠定了基础.     

肠出血性大肠杆菌O157:H7基因工程疫苗免疫小鼠的实验研究

目的 研究肠出血性大肠杆菌O157:H7基因工程疫苗免疫小鼠后对该菌感染的保护能力.方法 将60只BALB/c小鼠平均分为5组,分别为3种抗原单独免疫、三抗原联合免疫和PBS对照组,用注射方式免疫3次,抗原和佐剂均为每次100μg/只.采集免疫前和各次免疫后7d的小鼠血清检测抗体,末次免疫10d后以109CFU的0157全菌液经口感染小鼠.观察小鼠临床症状及死亡情况,检测粪便与肠道带菌情况,并作病理组织学检测.结果 各抗原免疫组小鼠特异抗体明显增加,感染后各组小鼠均有死亡,IntiminC300、Stx2B、HlyAN436和联合免疫组保护率分别为73%、64%、36%和91%.未病死小鼠粪便排菌情况:对照组22d,实验组为5～14d.肠道带菌情况:对照组阳性率为100%,实验组为25%～83%.病死小鼠肺脏、肝脏均有明显组织病理学改变.结论 Intim-inC300、Stx2B和HlyAN436疫苗对于O157感染具有一定的预防作用,而联合免疫效果又大于单独免疫.     

白细胞介素10的研究进展

白细胞介素10是由多种细胞产生的多效细胞因子.本文介绍了白细胞介素10的分子生物学特征、生物学功能、家族及其在临床上的应用和白细胞介素10的受体.     

树突状细胞在调节性T细胞产生中的作用

树突状细胞（Dendritic cells，DCs）是一类重要的专职抗原提呈细胞，虽在体内的数量较少，但具有超强的抗原提呈能力，而且能够活化初始T细胞（Naive T cells），在免疫应答的诱导中具有独特的地位。DCs既能诱导有效的免疫应答，同时在诱导免疫耐受中也十分重要。在中枢耐受中，胸腺内的DCs可以通过阴性选择清除自身反应性T细胞。近年来，越来越多的证据表明，DCs在外周耐受中也起着关键性的作用，可以通过诱导效应性CD4^＋T或者CD8^＋T细胞的无能，促进调节性T细胞（T regulatory cells，Treg）的分化来调控针对自身抗原的外周耐受。DCs的来源、表型和成熟状态都具有多样性和异质性，DCs的耐受功能可能依赖于其某一成熟阶段或者是某一亚群。本文就DCs在诱导产生Treg中的作用和应用进展做一简要综述。     

EHEC O157:H7志贺毒素ⅡA1亚单位蛋白的构建表达与免疫原性鉴定

目的 构建表达GST-STX2A1融合蛋白并鉴定其免疫原性.方法 通过PCR反应从EHEC O157:H7 EDL933标准株菌中扩增STX2A1基因,将此基因克隆到GST融合蛋白原核表达载体PGEX-6p-1,得到阳性克隆PGEX-6p-1/STX2A1,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导GST-STX2A1融合蛋白的表达,采用亲和层析纯化该蛋白,SDS-PAGE分析其表达量、表达形式和纯度;用纯化的融合蛋白免疫Balb/c小鼠,免疫双向扩散鉴定抗血清效价,Western blotting鉴定抗血清的特异性.结果 成功构建重组质粒PGEX-6p-1/STX2A1,经DNA测序证实插入序列与设计完全一致,并在大肠杆菌中表达出Mr约为5.3×104大小的可溶性目的 蛋白,经亲和层析纯化后纯度可达90%,免疫Balb/c小鼠产生的抗血清效价为1:16,Western blotting表明可与天然STx2A蛋白反应.结论 在大肠杆菌中成功表达了可溶性的GST-STX2A1融合蛋白,该蛋白具有较好的免疫原性,为O157:H7亚单位疫苗及制备抗STX2A1的单克隆抗体提供了必要的物质基础.     

人IL-24基因的克隆、 表达、 纯化及体外诱导肿瘤细胞凋亡的研究

目的:克隆人白细胞介素-24(IL-24)基因,在大肠杆菌中融合表达,纯化复性,研究此融合蛋白的抗肿瘤活性。方法:分离人外周血单个核细胞,ConA刺激培养,提取细胞总RNA,RT-PCR技术克隆人IL-24基因。将IL-24插入到pET32a( )中,构建重组表达载体IL-24/pET32a,IPTG诱导在E.coli表达。Edman法N端测序,将鉴定正确的蛋白亲合层析纯化。MTT比色法体外分析杀伤肿瘤细胞的活性。结果:获得人IL-24基因,序列分析与GenBank公布一致。表达载体用双酶切和PCR鉴定正确。重组工程菌经IPTG诱导后表达相对分子质量(Mr)约为35000的融合蛋白。N端测序正确,鉴定该蛋白以包涵体形式表达。包涵体经洗涤、溶解后,亲合纯化得到纯度大于95%的融合蛋白。复性后表达产物能显著诱导MCF-7乳腺癌细胞凋亡(P<0.05)。结论:IL-24融合蛋白在原核细胞中高效表达,并获得高纯度、在体外明显诱导乳腺癌细胞凋亡的重组蛋白,为后续的研究提供实验基础。     

LT质粒的新法提取及无毒突变体LTS63K的构建和序列分析

目的：获取野生型产毒性大肠杆菌不耐热肠毒素（LT）基因、构建LTS63K突变体并进行序列分析。方法：用改进的细菌基因组提取含野生型LT基因质粒，用PCR技术扩增LT的DNA，并亚克隆至pMD18-T中进行点突变和序列分析。结果：从野生型大肠杆菌提取大质粒的新法可行，所克隆的LT基因与GenBank公布的完全一致，点突变正确。结论：所克隆的基因和突变基因可用于重组表达和 免疫佐剂的相关研究。     

EHEC O157:H7志贺样毒素Ⅱ(Stx2)的克隆表达与活性研究

目的克隆表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157：H7志贺样毒素Ⅱ(Shiga like toxinⅡ,Stx2),并鉴定其生物学活性。方法采用PCR法自EHEC O157：H7基因组扩增志贺样毒素Ⅱ的编码基因stx2,T-A克隆后构建原核表达质粒pET-11c(+)-six2,经测序鉴定后转化E．coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,以SDS-PAGE、Western blot分析目的蛋白的表达。以EHEC O157：H7野生菌株作对照,通过对HeLa细胞的细胞毒作用及对小鼠攻毒实验,鉴定重组蛋白的生物学活性。结果扩增的stx2基因约1230bp；原核表达质粒pET-11c(+)-stx2经酶切和测序鉴定与预期序列一致；并在E．coli BL21 (DE3)中得到表达,蛋白表达率约25％；PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量(M_r)约72×10~3；重组蛋白Stx2对HeLa细胞具有细胞毒作用,CD_(50)为35pg/ml；Stx2对小鼠致死剂量LD_(100)为10μg。结论成功克隆并表达了Stx2重组蛋白,为探讨O157：H7菌的感染机制及其防治研究奠定了一定的基础。