幽门螺杆菌粘附素基因hpαA研究

目的 克隆表达幽门螺杆菌鞭毛粘附素基因hpαA，筛选Hp疫苗有效抗原成分。方法 采用PCR技术从幽门螺杆菌基因组中扩增hpαA基因，克隆至表达载体pET-28a( )中，IPTG诱导表达重组蛋白HpaA(rHpaA)，鉴定rHpaA蛋白的表达形式。结果 pPHA重组菌以包涵体形式表达rHpaA，表达量约占全菌的35％。纯化后的rHpaA免疫家兔获得了高效价的兔抗HpaA抗血清，且该抗血清能够与不同坳菌株中相应分子量条带发生抗原抗体反应，并能在一定程度上抑制由。Hp引起的RBC凝集现象。结论 坳鞭毛粘附素HpaA在重组大肠杆菌中能够高效表达，且具有良好的免疫反应性。     

微生物脂肽的疫苗学应用及进展

微生物脂肽是近几年研究的热点之一。天然微生物脂肽是由微生物产生的次级代谢产物,合成微生物脂肽则是在天然微生物脂肽的结构基础上进行结构修饰获得。现有研究表明,微生物脂肽具有显著的疫苗或佐剂活性,并且能发挥抗菌、抗病毒、抗肿瘤、抗黏附等作用,具有广阔的应用前景。本文通过对几种微生物脂肽的结构和功能进行简要总结,概述脂肽在疫苗领域的应用,为新疫苗和佐剂的设计提供借鉴。     

狙击幽门螺杆菌:征战"溃疡"3大战役

抗酸,保护胃黏膜,促进溃疡愈合——这是人们对治疗 消化性溃疡(包括胃溃疡和十二指肠溃疡)的传统认识和 治疗方法,也有不少患者经此治疗后溃疡病好转。然而, 现在患了溃疡病到医院就诊,医生不仅要求患者服用抗酸 或抑酸药物,而且还开出了针对细菌的抗生素。这是为什 么呢?     

肠出血性大肠杆菌O157:H7基因工程疫苗免疫小鼠的实验研究

目的 研究肠出血性大肠杆菌O157:H7基因工程疫苗免疫小鼠后对该菌感染的保护能力.方法 将60只BALB/c小鼠平均分为5组,分别为3种抗原单独免疫、三抗原联合免疫和PBS对照组,用注射方式免疫3次,抗原和佐剂均为每次100μg/只.采集免疫前和各次免疫后7d的小鼠血清检测抗体,末次免疫10d后以109CFU的0157全菌液经口感染小鼠.观察小鼠临床症状及死亡情况,检测粪便与肠道带菌情况,并作病理组织学检测.结果 各抗原免疫组小鼠特异抗体明显增加,感染后各组小鼠均有死亡,IntiminC300、Stx2B、HlyAN436和联合免疫组保护率分别为73%、64%、36%和91%.未病死小鼠粪便排菌情况:对照组22d,实验组为5～14d.肠道带菌情况:对照组阳性率为100%,实验组为25%～83%.病死小鼠肺脏、肝脏均有明显组织病理学改变.结论 Intim-inC300、Stx2B和HlyAN436疫苗对于O157感染具有一定的预防作用,而联合免疫效果又大于单独免疫.     

EHEC O157:H7志贺毒素ⅡA1亚单位蛋白的构建表达与免疫原性鉴定

目的 构建表达GST-STX2A1融合蛋白并鉴定其免疫原性.方法 通过PCR反应从EHEC O157:H7 EDL933标准株菌中扩增STX2A1基因,将此基因克隆到GST融合蛋白原核表达载体PGEX-6p-1,得到阳性克隆PGEX-6p-1/STX2A1,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导GST-STX2A1融合蛋白的表达,采用亲和层析纯化该蛋白,SDS-PAGE分析其表达量、表达形式和纯度;用纯化的融合蛋白免疫Balb/c小鼠,免疫双向扩散鉴定抗血清效价,Western blotting鉴定抗血清的特异性.结果 成功构建重组质粒PGEX-6p-1/STX2A1,经DNA测序证实插入序列与设计完全一致,并在大肠杆菌中表达出Mr约为5.3×104大小的可溶性目的 蛋白,经亲和层析纯化后纯度可达90%,免疫Balb/c小鼠产生的抗血清效价为1:16,Western blotting表明可与天然STx2A蛋白反应.结论 在大肠杆菌中成功表达了可溶性的GST-STX2A1融合蛋白,该蛋白具有较好的免疫原性,为O157:H7亚单位疫苗及制备抗STX2A1的单克隆抗体提供了必要的物质基础.     

利用α-溶血素系统分泌表达重组人白介素-6

目的 构建基于大肠杆菌α-溶血素(HlyA)分泌机制的原核胞外分泌表达载体系统,将重组人白介素6(rhIL-6)分泌至胞外培养基中.方法 利用分子克隆手段,从引起人泌尿道感染的大肠杆菌UPEC J96菌株染色体上获得了α-溶血素(HlyA)系统的分泌功能基因,与外源基因片段hIL-6一起克隆至pQE30骨架载体,构建了胞外分泌表达质粒pIsQ,转化E. coliTop10,诱导表达后通过Western blot检测培养上清中hIL-6的表达.结果 获得了与设计完全一致的pISU载体,Western blot结果显示,可以在pISQ/E. coli Top10培养液上清中检测到与His-hIL6-HlyAs融合蛋白相对分子质量大小一致的特异条带.结论 大肠杆菌HlyA分泌系统操纵子能够在染色体和质粒间传递,rhIL-6能够通过该系统被特异地分泌至胞外培养基中,以可溶形式存在,为后续生物学研究奠定了基础.     

Th17细胞及IL-17在病原微生物感染中的研究进展

在机体的适应性免疫应答中,CD4+T细胞作为效应T细胞的重要成员之一,参与免疫应答的各个阶段,能协调固有免疫和适应性免疫系统的功能活性,并在免疫调节中发挥着关键作用.     

EHEC O157:H7志贺样毒素Ⅱ(Stx2)的克隆表达与活性研究

目的克隆表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157：H7志贺样毒素Ⅱ(Shiga like toxinⅡ,Stx2),并鉴定其生物学活性。方法采用PCR法自EHEC O157：H7基因组扩增志贺样毒素Ⅱ的编码基因stx2,T-A克隆后构建原核表达质粒pET-11c(+)-six2,经测序鉴定后转化E．coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,以SDS-PAGE、Western blot分析目的蛋白的表达。以EHEC O157：H7野生菌株作对照,通过对HeLa细胞的细胞毒作用及对小鼠攻毒实验,鉴定重组蛋白的生物学活性。结果扩增的stx2基因约1230bp；原核表达质粒pET-11c(+)-stx2经酶切和测序鉴定与预期序列一致；并在E．coli BL21 (DE3)中得到表达,蛋白表达率约25％；PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量(M_r)约72×10~3；重组蛋白Stx2对HeLa细胞具有细胞毒作用,CD_(50)为35pg/ml；Stx2对小鼠致死剂量LD_(100)为10μg。结论成功克隆并表达了Stx2重组蛋白,为探讨O157：H7菌的感染机制及其防治研究奠定了一定的基础。     

EHEC O157:H7志贺样毒素Ⅱ结合亚单位Stx2B的基因克隆、表达与纯化

目的克隆表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157H7志贺样毒素B亚单位(Shiga liketoxin 2B,Stx2B),并对其初步纯化.方法设计引物采用PCR法自EHEC O157H7基因组扩增志贺样毒素B亚单位的编码基因stx2b,T-A克隆后构建原核表达质粒pET-22b(+)-stx2b,经测序鉴定后转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,以Tricine-PAGE和Western blot分析目的蛋白的表达,并采用固相镍离子亲和层析纯化重组蛋白.结果扩增的stx2b基因约210 bp;原核表达质粒pET-22b(+)-stx2b经酶切和测序鉴定与预期序列一致;并在E.coli BL21(DE3)中得到高效可溶性表达,蛋白表达率约30%;PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量(Mr)约7×103;经固相镍离子亲和层析纯化后,蛋白纯度可达90.1%.结论EHEC O157H7志贺样毒素B亚单位的高效表达与初步纯化,有利于进一步的生物学性质研究.