维生素A对Hela细胞凋亡的影响

目的研究维生素A对Hela细胞凋亡的影响。方法应用光学显微镜、电子显微镜观察维生素A对Hela细胞凋亡形态的影响;分别应用细胞DNA琼脂糖凝胶电泳法及流式细胞仪分析维生素A诱导Hela细胞凋亡的生物化学特征、细胞特征及凋亡细胞百分率。结果光学显微镜下可见凋亡小体;电子显微镜下可见细胞固缩,核膜扭曲,核染色体聚集成块并靠近核膜等凋亡细胞特征;在琼脂糖凝胶电泳中由于细胞DNA被降解而呈现典型的“阶梯状”图谱;流式细胞仪检测结果显示二倍体核型的特征,在DNA直方图上,G1峰左侧出现亚二倍体细胞群的峰型;维生素A诱导Hela细胞凋亡具有时间依赖性。结论维生素A可诱导Hela细胞凋亡。     

幽门螺杆菌cag致病岛的研究进展

幽门螺杆菌(Helicobacter pyfori,Hp)是人类常见的致病菌,它的感染不但与B型胃炎和消化性溃疡的发生密切相关,而且与非溃疡性消化不良,MALT淋巴瘤和胃癌等也有重要关系H叫0。其致病物质有尿素酶、细胞相关毒素、空泡毒素(VacA),而cag致病岛(cag pathogenicity island,cag PAI)是坳中又一致病相关因素。所谓cag致病岛是指某些致病菌染色体上毒力因子群集的特殊区域。随着对Hp致病机制的深入研究,作为其重要结构的cag致病岛,已受到很多学者关注。本文将对其作一简要综述。     

基因盒-整合子系统与细菌的耐药性

近年来,细菌对抗生素耐药性不断上升和耐药性快速传播已经成为临床感染性疾病治疗的难题。研究表明,细菌的耐药性大多在外环境诱导下经可动遗传因子,如质粒（plasmid）、转座子（transposon）、噬菌体（bacteriophage）、整合子（integron）／基因盒（genecas-sette）等的传递获得。目前,由具有捕获及表达外来耐药基因盒能力的整合子系统介导的细菌耐药机制越来越引起研究者们的关注,其对多重耐药性研究有着非常重要的意义。整合子1989年由StokesHW等首次提出。     

环状RNA hsa＿circ＿0009735对胃癌细胞上皮间质转化、细胞周期和自噬的影响

目的：探讨环状RNA hsa＿circ＿0009735在胃癌组织和细胞中的表达,阐明其对胃癌细胞上皮间质转化(EMT)、迁移、细胞周期和自噬的影响。方法：取正常胃黏膜GES-1细胞、胃癌MGC-803细胞、 MKN-45细胞和HGC-27细胞。将hsa＿circ＿0009735小干扰RNA和阴性对照转染MGC-803细胞,将胃癌MGC-803细胞分为si-hsa＿circ＿0009735组和阴性对照组;将对照质粒和hsa＿circ＿0009735过表达质粒转染入HGC-27细胞,将胃癌HGC-27细胞分为OE-hsa＿circ＿0009735组和对照质粒组;MGC-803细胞转染细胞自噬质粒pcDNA-eGFP-LC3后分为空白组和不同浓度(0.25、0.50、1.00和2.00 mg·L^-1)雷帕霉素组。实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测胃癌组织和细胞中hsa＿circ＿0009735表达水平,激光共聚焦显微镜观察各组MGC-803细胞形态表现和细胞中自噬小体数,Transwell小室实验检测各组迁移细胞数,流式细胞术检测不同细胞周期各组细胞百分率,W...     

幽门螺杆菌virD4基因的克隆表达及其功能初探

目的研究幽门螺杆菌SBK临床分离株virD4的功能。方法通过T-A克隆获得virD4基因片段;构建pET-28a(+)-virD4原核表达载体,转化入Rosetta工程菌,IPTG诱导表达;KCl染色切胶纯化法获得重组蛋白质,SDS-PAGE法分析鉴定重组蛋白质;纯化的重组蛋白质免疫小鼠,获得多克隆抗体,ELISA法检测效价,western blot法分析抗原反应特异性;重组蛋白质与GES-1细胞共培养,检测其对细胞炎症因子的表达及细胞增殖的影响。结果 virD4基因全长为1 728 bp,序列与Shi470菌株的virD4基因同源性较高;成功构建原核表达载体,经诱导及纯化获得相对分子质量为63 000的重组蛋白质;成功免疫小鼠制备多克隆抗体,效价为512 000,抗原抗体反应具有特异性;virD4能诱导GES-1细胞分泌炎症因子和增殖。结论成功克隆并表达virD4基因,制备多克隆抗体,其重组蛋白质能诱导细胞因子分泌及细胞增殖。     

幽门螺杆菌Cag致病岛hp0527基因的缺失株构建和鉴定

目的:构建幽门螺杆菌(H.pylori)Cag致病岛编码hp0527基因的突变株.为Cag致病岛致病机制及H.priori功能研究奠定基础.方法:利用基因同源重组方法将卡那霉素抗性基因(KanR)连接到PCR扩增hp0527两端区域产生的2个目的基因片段之间,构建hp0527基因缺失的自杀质粒pBlueKM40-△hp0527;将带有卡那霉素抗性标志的缺失突变载体,通过抗生素卡那霉素筛选出缺失hp0527基因的突变株,并经PCR方法鉴定后,采用野生株和突变株的幽门螺杆菌分别与胃癌上皮细胞BGC-823共培养后,分析它们对细胞毒素相关蛋白CagA转运能力的影响.结果:成功构建出幽门螺杆菌hp0527基因突变的自杀质粒,突变载体经内切酶酶切分析显示:产生的条带与设计结果完全一致;抗生素筛选并经PCR鉴定后,获得了hp0527基因缺失株;CagA蛋白转运分析表明基因hp0527缺失前后,可以导致细菌转运CagA蛋白能力的丧失.结论:成功构建出1株缺失hp0527基因的H.pylori突变株,对于阐明该基因的功能及其在H.pylori致病中的地位及作用具有重要的研究价值.     

TROP2 shRNA真核表达载体转染胃癌BGC-823细胞的沉默作用

目的:构建TROP2特异性短发夹环RNA(shRNA)真核表达载体, 抑制人胃癌BGC-823细胞TROP2基因的表达.方法:构建TROP2短发夹环RNA, 产生重组质粒转染胃癌BGC-823细胞, 转染24 h后用G418(浓度400 mg/L)筛选, 待细胞稳定后收集, 分别命名为W组(未处理组), HK组(随机阴性对照质粒组), KB组(空质粒组), T1组, T2组, T3组. 并运用实时荧光定量PCR和Western blot检测TROP2的表达.结果:TROP2特异性shRNA片段被成功克隆进pGensil1.1质粒中, 重组质粒shRNA编码序列与设计片断的序列完全一致. 与未转染细胞组、随机阴性对照组、空质粒组相比, 转染shRNA重组质粒的人胃癌BGC-823细胞TROP2表达在mRNA和蛋白水平都受到抑制.与T1、T2组相比, T3组对TROP2 mRNA和蛋白抑制作用最明显, 差异具统计学意义(8.79±0.23 vs 9.54±0.20, 9.57±0.23; 3.66±0.11vs 6.46±0.36, 9.31±0.11, 均P<0.05).结论:成功构建了针对TROP2 的特异性shRNA真核表达载体并抑制了TROP2的表达,为进一步研究其基因功能打下了基础.     

中药防风的研究进展

目的了解中药防风的最新研究进展。方法对中药防风的化学成分、药理作用、配伍及临床应用的研究进展进行分析总结。结果展示了中药防风的最新研究进展。结论掌握中药防风的最新研究进展为防风的开发利用提供了有益的参考。     

多药耐药鲍氏不动杆菌β-内酰胺酶与膜孔蛋白carO基因研究

目的 了解多药耐药鲍氏不动杆菌中β-内酰胺酶基因和膜孔蛋白基因的存在与变异.方法 收集2009年12月-2011年4月住院患者痰标本中分离的多药耐药鲍氏不动杆菌共20株,用聚合酶链反应(PCR)的方法,分析37种β-内酰胺酶基因与膜孔蛋白carO基因.结果 20株多药耐药鲍氏不动杆菌共检出TEM、PER、ADC、OXA-23群等4种β-内酰胺酶基因,阳性率分别为95.0％、25.0％、100.0％、80.0％,膜孔蛋白carO基因突变率达100.0％.结论 携带4种β-内酰胺酶基因和膜孔蛋白编码基因carO突变,是该组鲍氏不动杆菌对β-内酰胺类药物耐药的主要原因.     

携带ystB基因小肠结肠炎耶尔森菌分子流行病学研究

目的了解我国携带ystB基因小肠结肠炎耶尔森菌的分子流行病学特征。方法通过PCR扩增ystB基因;通过血清凝集实验和生化反应分析其血清型及生物型;使用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对其进行分子分型,并将带型进行聚类分析;ATBG-5试剂条测定菌株的耐药情况。结果所分析250株小肠结肠炎耶尔森菌均为生物1A型;包括至少23种血清型;通过PFGE分型,250株细菌共产生167个型别;多数菌株对阿莫西林、头孢噻吩、替卡西林等抗生素耐药,所有菌株对环丙沙星以及阿米卡星敏感。结论ystB基因仅出现在生物1A型小肠结肠炎耶尔森菌中;多数菌株对阿莫西林和部分头孢菌素类抗生素高度耐药,可能与这些菌株表达β-内酰胺酶有关;PFGE不能对携带ystB基因小肠结肠炎耶尔森菌进行有效的分子分型。