幽门螺杆菌Ⅳ型分泌系统Cag3基因的克隆表达及其质谱鉴定

目的 构建表达幽门螺杆菌(Hp)Cag致病岛(Cag-PAI)编码的Cag3(hp0522)基因重组质粒,转入大肠杆菌中表达,纯化重组蛋白.方法 以Hp 11637基因组为模板,应用PCR技术扩增Cag3基因片段,克隆至pGEM-T载体中测序,然后克隆到高效表达载体pET-28a(+)上,得到了重组表达载体pET-28a(+)-Cag3,转化表达宿主菌大肠埃希菌BL21;经IPTG诱导表达后,将大量表达的重组蛋白用Ni2+-NTA亲和层析柱纯化;采用串联飞行时间质谱技术对Cag3-His融合蛋白进行鉴定.结果 成功克隆了Cag3基因.经SDS-PAGE分析,表达蛋白相对分子质量与预期大小一致;质谱检测到Cag3重组蛋白的表达.结论 成功构建了Cag3基因的原核表达载体pET-28a(+)-Cag3.     

酸浆醇提取物诱导人食管癌细胞凋亡的实验研究

目的探讨酸浆醇提取物(ethanol extracts of physalis alkekengi linn,EPL)能否诱导食管癌细胞株EC-1.71凋亡。方法用显微镜观察经EPL作用24、48、72 h后的EC-1.71细胞生长状况;流式细胞术检测EC-1.71细胞线粒体膜电位的变化及细胞凋亡率;western blot检测EC-1.71细胞PARP(poly ADP-ribose polymerase)裂解状况。结果在EPL作用下,EC-1.71细胞数量减少,细胞间接触疏松,凋亡细胞随着药物作用时间的延长而增多。流式细胞术结果表明,EPL作用后的细胞线粒体膜电位(△ψm)降低。与对照组比较,差异有统计学意义(P均<0.05)。作用48、72 h的细胞凋亡率随药物作用时间的延长而增高(P均<0.05)。western blot结果表明,在EPL作用48 h时可检测到相对分子量(Mr)为89 000的PARP片段。结论 EPL可以诱导EC-1.71细胞发生凋亡,其凋亡程度呈时间依赖性。     

Study on norcantharidin-induced apoptosis in SMMC-7721 cells through mitochondrial pathways

Objective: To investigate the mechanism of norcantharidin (NCTD)-induced SMMC-7721 hepatoma cell apoptosis. Methods: SMMC-7721 cell growth inhibition was measured by the MTT method. Apoptosis was detected by Annexin Ⅴ/propidium iodide staining. The mitochondrial membrane potential was measured by flow cytometry. Western blot analysis was used to evaluate the level of cytochrome c, caspase-3, AIF, Bcl-2 and Bax expression. Results: NCTD inhibited SMMC-7721 cell growth in a time-and dose-dependent manner. The cells treated with NCTD showed the loss of mitochondrial membrane potential. The activities of caspase-3, cytochrome c, AIF, and Bax were up-regulated after NCTD treatment at different doses. The expression of Bcl-2 was decreased after treatment with NCTD. Conclusions: NCTD could induce SMMC-7721 cell apoptosis. The activation of the mitochondrial pathway was involved in the process of NCTD-induced SMMC-7721 cell apoptosis.     

幽门螺杆菌hp0521基因编码蛋白的生物信息学分析

［摘要］目的: 对4株幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, Hp)中hp0521基因编码的细胞毒素相关基因2(cytotoxin associated gene 2,Cag2)蛋白从生物信息学角度进行基本理化性质、信号肽及功能的预测分析。方法: 用PCR技术克隆测序获得4株Hp菌株的hp0521基因序列,生物信息学工具分析其编码Cag2蛋白的基本理化性质、有无信号肽及蛋白指纹图谱。 结果： 成功克隆测序4株Hp菌株的hp0521基因序列,提交基因库后获得相应登录号;hp0521基因编码的Cag2蛋白氨基酸数目和相对分子质量大小不同,理论等电点偏碱性,为稳定亲水性蛋白,不存在信号肽;Cag2蛋白指纹图谱分析存在DNA拓扑异构酶Ⅰ、IL 3细胞因子、抗增殖蛋白BTG1家族、介导细胞壁延伸的蛋白、卤酸脱卤酶/环氧水解酶、调节染色体凝集功能RCC1家族等蛋白标签。结论： Hp中hp0521基因编码的Cag2蛋白可能介导细胞壁延伸和调节染色体凝集,参与致病信号通路的传导,可能具有DNA拓扑异构酶Ⅰ、卤酸脱卤酶/环氧水解酶等相应酶活性。     

桂皮醛对大鼠体内耐甲氧西林金黄色葡萄球菌生物膜的清除效应

目的:研究桂皮醛对大鼠体内耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)生物膜的清除作用.方法:采用皮下羧甲基纤维素钠(CMC)-囊袋法制备MRSA在SD大鼠体内的生物膜模型,并给模型大鼠连续4天腹腔注射桂皮醛(cinnamaldehyde,...     

幽门螺杆菌空泡毒素及其致病性

幽门螺杆菌感染呈全球性分布,与多种胃部疾病有密切关系,人群感染率在50％以上。该菌分泌的空泡毒素VacA在其致病过程中起重要作用。不同幽门螺杆菌菌株的VacA存在基因型和表型的差异。不同基因型的致病性不同,不同地区的基因型分布亦不同。研究该菌VacA基因(vac4)及其产物,以及不同基因型与疾病的关系,对于进一步阐明幽门螺杆菌与临床症状的关系、幽门螺杆菌感染性疾病的防治都有十分重要的意义。     

标准菌株和临床菌株oipA基因的检测及其核苷酸序列比对

目的：检测幽门螺杆菌标准菌株NCTC11637及临床分离菌株Hp1和Hp2的oipA基因,分析其核苷酸序列,比对其与国际标准菌株Hp 26695的同源性.方法：常规方法培养幽门螺杆菌,提取DNA,PCR法扩增oipA基因,检测其核苷酸序列,并比较其与Hp 26695的同源性.结果：NCTC11637及Hp1、Hp2均表达oipA基因.其核苷酸序列与Hp 26695比对,NCTC11637有48个突变位点、Hp1有48个突变位点、Hp2有50个突变位点,同源性均为94%.NCTC11637与Hp1的同源性为100%、与Hp2的同源性为97%.结论：NCTC11637、Hp1、Hp2均表达oipA基因,但不同菌株oipA基因的核苷酸序列有所不同.     

唐氏综合征胎儿、新生儿及其孕母血清铜蓝蛋白的表达特点

目的 探讨胎儿、新生儿及其孕母血清铜蓝蛋白的表达与唐氏综合征(Down syndrome,DS)的关系. 方法 采用双向凝胶电泳+质谱的蛋白组学技术检测6例DS胎儿孕母和6例正常胎儿孕母血清中差异蛋白的表达,采用Western印迹技术验证蛋白组学结果.采用酶联免疫吸附试验检测11例DS胎儿孕母、10例正常胎儿孕母、11例DS新生儿及10例正常新生儿血清铜蓝蛋白的含量.组间差异比较采用两独立样本t检验. 结果 在DS胎儿孕母血清中鉴定出29种差异蛋白,其中铜蓝蛋白上升最为显著,与正常胎儿孕母相比,蛋白表达密度比值达5.43,差异有统计学意义(t=2.7102,P＜0.05).Western印迹结果显示,DS胎儿孕母血清中铜蓝蛋白表达水平(0.95±0.24)明显高于正常胎儿孕母(0.37±0.14)(t=2.9521,P＜0.05),而DS新生儿血清铜蓝蛋白表达水平(0.74±0.03)显著低于正常对照新生儿(0.89±0.06)(t=-2.9515,P＜0.05).酶联免疫吸附试验显示,DS胎儿孕母血清铜蓝蛋白含量为(346.5±111.8) ng/ml,明显高于正常胎儿孕母血清的(248.6±78.3)ng/ml,差异有统计学意义(t=2.301,P＜0.05).然而,DS新生儿血清铜蓝蛋白水平[(166.1±55.0) ng/ml]却低于正常对照新生儿[(244.0±36.0)ng/ml],差异有统计学意义(t=-3.873,P＜0.01). 结论 孕母及新生儿血清铜蓝蛋白表达水平异常可能与DS存在密切联系.     

幽门螺杆菌cagL基因缺失株的建立

目的:构建幽门螺杆菌Ⅳ型分泌系统cagL基因缺失株,为研究cagL基因的功能奠定基础。方法:利用同源重组原理,PCR扩增该基因编码区两侧序列,作为同源臂,构建出带卡那霉素抗性标志的载体,采用电穿孔法将其转化入受体菌中,并经PCR验证后获得了cagL基因缺失株;突变株和野生株分别与胃上皮细胞GES-1共培养后,检测其对CagA蛋白转运的影响。结果:构建cagL基因缺失的自杀质粒,并获得一株cagL基因缺失株;CagA转运实验表明,cagL基因缺失后,导致幽门螺杆菌CagA转运功能的丧失。结论:成功获得了幽门螺杆菌cagL基因缺失株,该基因参与CagA蛋白的转运,是该菌IV型分泌系统中重要组成成分之一。     

中青年女性癌症患者决策准备的潜在类别分析

目的 探讨中青年女性癌症患者决策准备的潜在类别,为构建个性化决策辅助方案提供依据。方法 采用便利抽样法选取2021年6月至2022年11月镇江市两所三级甲等医院的504名中青年女性癌症患者为研究对象,采用一般资料调查表和决策准备量表进行调查。采用潜在类别分析将中青年女性癌症患者决策准备进行分类,多元Logistic回归分析不同类别组患者特征的差异。结果 中青年女性癌症患者被分为决策信息失衡型(33.33%)、强利弊-弱沟通型(11.51%)、强沟通-弱利弊型(11.31%)和决策准备充足型(43.85%)4个潜在类别组。多元Logistic回归分析显示,文化程度、医疗付费形式、月收入及疾病分期是其潜在类别分型的影响因素(均P<0.05)。结论 中青年女性癌症患者决策准备具有4个潜在类别,医护人员应注重不同患者的决策准备特征,制定针对性的决策辅助方案,以提高其决策准备水平。