转基因CTL的构建及其生物学特性的研究

目的：构建TNF—α基因转染的CTL，并对其生物学特性进行研究。方法：用重组逆转录病毒载体介导将TNF—α基因导入CTL，构建转基因CTL。检测其增殖能力，TNF—α分泌量、细胞表型，观察其对BEL7404的体内、外抗肿瘤活性。结果：转基因CTL的形态、增殖活性及细胞表型与CTL相似。但具有高效表达TNF—α的能力，72h表达量为410pg／mL。转基因CTL对BEL7404具有较高的体外杀伤作用，其杀伤活性与作用时间及效靶细胞比正向相关。转基因CTL对荷瘤裸鼠过继免疫后，移植瘤的生成延迟、生长减慢，成瘤率降低。结论：转基因CTL的构建为肿瘤过继免疫治疗提供新型的效应细胞，具有进一步研究的价值。     

硬膜外麻醉下行腹腔镜胆囊切除术的体会

我院在硬膜外麻醉下行腹腔镜胆囊切除术 (ＬＣ)计达32 0 0余例 ,现报道如下。资料与方法一般资料　本组 32 0 0例 ,男 70 0例 ,女 2 5 0 0例 ,男女之比为 1∶3 5 ,年龄 18～ 83岁 ,其中 6 1岁以上 399例 (12 % ) ,71岁以上 6 0例 (1 8% ) ,术前心电图异常者 90 7例(2 7 9% ) ,心电图异常分类见表 1。合并其他疾病者 4 5 4例(14 2 % ) ,其分类见表 2。手术时间 30ｍｉｎ以内 834例 ,30～6 0ｍｉｎ 12 15例 ,6 0～ 90ｍｉｎ 775例 ,90～ 12 0ｍｉｎ 2 1例 ,12 0ｍｉｎ以上 115例。麻醉与监测　麻醉前 30ｍｉｎ常规肌注阿托品 0 5ｍｇ、苯巴…     

肿瘤坏死因子基因转导的肿瘤疫苗对小鼠机体免疫的影响

目的：用肿瘤坏死因子基因转导的人肝癌细胞作为肿瘤疫苗，研究其对小鼠机体免疫活性的影响。方法：小鼠分5组，采用经^60Co照射的含人肿瘤坏死因子基因的人肝癌细胞(BEL—7404—TNF—^60Co)、未经^60Co照射的含人肿瘤坏死因子基因的人肝癫细胞(BEL—7404—TNF)、经^60Co照射的人肝癌细胞(BEL—7404—^60Co)、未经^60Co照射的人肝癌细胞(BEL—7404)和生理盐水分别接种小鼠，用MTT法检测各组小鼠脾脏NK细胞活性，用SABC免疫组化法检测T淋巴细胞亚群。结果：肿瘤疫苗接种小鼠后，BEL—7404—TNF—^60Co组小鼠脾脏NK细胞活性及T淋巴细胞亚群CD4^ 、CD8^ 增高，与BEL—7404组、BEL—7404—^60Co组、生理盐水组相比差异有显著意义(P＜0．05、P＜0．01)。BEL—7404—TNF—^60Co组和BEL—7404—TNF组相比，NK细胞活性、T淋巴细胞亚群CD4^ 、CD8^ 均无显著差异(P＞0．05)。结论：肿瘤坏死因子基因转导的肿瘤疫苗具有提高小鼠机体免疫力的作用。     

外源性TNF基因对人肝癌细胞生长的影响

采用比利时Gent大学的质粒PATHNF(内含人TNF-α-cDNA),以及英国伦敦大学的重组逆转录病毒载体pRUFneo.将人TNF基因克隆到重组逆转录病毒载体pRUFneo,构建了含人TNFL-a基因重组逆转录病毒载体RUF-TNF.将RUF-TNF转染包装细胞FlyA13,经G41筛选获得稳定分泌含人TNF基因重组逆转录病毒的细胞株FlyRUFN14.FlyRUFN14产生的病毒上清液能直接转染靶细胞Saos-2.采用这一基因转移系统,将TNF基因转染到两株人肝癌细胞株SMMG-7721及BEL-7404,获得转基因肝癌细胞SMMC-7721 TNF及BEL-7404TNF.TNF基因对人肝癌细胞生长的影响采用细胞学实验及裸鼠实验两种方法进行研究.①细胞学实验:将转基因肝癌细胞SMMC-7721TNF及BEL-7404TNF作为实验组,原来的未转基因肝癌细胞株SMMC-7721及BEL-7404作为对照组,用MTT法研究两组的生长速度.结果:转基因肝癌细胞SMMG-7721TNF及BEL-7404TNF的生长速度明显慢于未转基因肝癌细胞,差别有显著意义(P<0.01).②裸鼠实验:     

两种麻醉方法下CO2气腹对冠心病Q-T离散度的影响

目的 :观察两种麻醉方法下冠心病患者行腹腔镜胆囊切除术 (LC)术中CO2 气腹对Q -Td的影响。方法 :择期行LC手术 ,ASAⅠ级～Ⅲ级患者 4 0例 ,随机分为无冠心病硬膜外组、冠心病硬膜外组、冠心病全麻组、无冠心病全麻组 4组 ,硬膜外组用 0 5 8%布比卡因作局麻药 ,全麻组常规快诱导插管 ,分别测出气腹前、气腹后 15min、 2 0min时的Q -Tmin、Q -Tmax、Q -Tcd及HR、MAP、RPP进行比较。结果 :冠心病硬膜外组和全麻组气腹后 2 0min时QTcd延长、RPP值下降较气腹前有明显差异 ,P <0 0 5。结论 :推测冠心病患者LC手术中冠脉血流量明显减少 ,CO2 气腹是LC手术中的重要影响因素 ,与麻醉方法无直接关系     

肝细胞癌DNA异倍体及nm23-H1、C-erb B-2和p53癌基因蛋白表达的临床意义

目的 探讨肝细胞癌ＤＮＡ异倍体、ｎｍ２３－Ｈ１、Ｃ－ｅｒｂＢ－２和Ｐ５３癌基因蛋白表达与肝细胞癌侵袭性的关系及其临床意义。方法采用ＤＮＡ图像分析系统定量测定５２例肝癌２的肝癌细胞的ＤＮＡ含量,用免疫组化方法检测癌基因蛋白在肝癌中的表达。结果ＤＮＡ异倍体在≤５ｃｍ肝癌组为５０．０％,在〉５ｃｍ肝癌为８２．１％;ＤＮＡ异倍体与肝癌肝内转移及合并癌栓有关。肝癌伴有肝内转移者的ｎｍ２３－Ｈ１阳性率是明显     

腹腔镜胆囊切除术二氧化碳气腹对心肌酶谱的影响

腹腔镜胆囊切除术 (ＬＣ)是一种损伤小的内镜手术 ,手术的重要环节是人工ＣＯ2 气腹。近年来 ,ＣＯ2 气腹对呼吸及循环系统的血液动力学的影响研究较多 ,但对心肌酶谱的影响尚末见报道。为探讨ＣＯ2 气腹对心肌的影响 ,我们观察了 2 0例ＣＯ2 气腹病人心肌酶谱的变化。资料与方法一般资料　本组 2 0例 ,男性 6例 ,女性 14例 ,年龄 37～6 2岁 ,ＡＳＡⅠ～Ⅱ级 ,术前心电图、肝、肾功能均正常。随机分为Ⅰ组 (ＣＯ2 气腹组 )、Ⅱ组 (非气腹组 ) ,两组手术时间为35～ 80分钟。麻醉方法　两组均采用连续硬膜外麻醉。术前常规肌注阿托品 0 5ｍｇ…     

应用肿瘤坏死因子基因转染肿瘤浸润淋巴细胞进行肝癌基因治疗的实验研究

目的：探讨转基因肿瘤浸润淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocytem,TIL)治疗肝癌的价值。方法：用转基因技术将肿瘤坏死因子(TNF—α)基因导人人肝癌肿瘤浸润淋巴细胞，构建转基因TIL。用肝癌细胞株BEL7404注射裸鼠建立裸鼠肝癌移植瘤，用转基因TIL分原位及异位进行治疗，并用TIL作对照。结果：转基因TIL表现出较高的抑制肿瘤作用，对肿瘤的生成率、生长速度的抑制作用比未转基因TIL强。原位注射转基因TIL的抗肿瘤作用较强，优于异位注射治疗。结论：转基因TIL对裸鼠移植性肝癌的实验治疗具有较好作用，本研究为人肝癌的基因治疗研究提供依据。     

肿瘤体外药敏试验三磷酸腺苷生物发光法（ATP-TCA）检测技术在化疗中的应用（简报）

肿瘤体外药敏试验三磷酸腺苷生物发光法(ATP-TCA)，是近年发展起来的针对恶性实体肿瘤有较高可评估率的新方法。ATP-TCA法的检测原理：由于ATP是活细胞最基本的能量来源，其水平与活细胞数呈正相关线性关系。用荧光素-荧光素酶试验定量测定细胞内源性ATP的含量，荧光酶在有氧条件下，可以和底物结合后催化ATP转变成ADP，并且释放出荧光(波长562mm)。通过测定内源性ATP的含量所产生的荧光强度，直接反映出细胞的数量。