重组人IFN-γ诱导自身免疫性疾病机制的初步探讨

目的观察IFN-γ是否能诱导健康人外周血和脐带血中B细胞分泌产生抗体,以及两者产生抗体的差异,初探IFN-γ是否通过影响CD5＋BI细胞的功能而诱发自身免疫性疾病,为进-步阐明IFN-γ诱发自身免疫性疾病的机制、研究自身免疫性疾病的临床防治提供实验依据。方法无菌采集健康人外周血、脐带血,RosetteSeprTM法分离得到B细胞,流式细胞仪检测B细胞纯度,将分离得到的外周血B细胞和脐带血B细胞分别经IFN—γ刺激,于培养的第3、5、7dELISA法检测抗体的含量变化,对照组为未加任何刺激的外周血B细胞组和脐带血B细胞组。运用SAS统计软件将所得抗体的浓度进行统计学分析。结果经流式细胞仪检测,B细胞纯度为81．4％,两种来源B细胞经IFN-γ刺激后,于第3d开始产生IgM。但是,在同-时间段,外周血与脐带血来源B细胞经培养后所产生IgM的量的差异均无统计学意义（P〉0．05）;在血液来源相同的情况下随着时间的延长产生IgM的量逐步增加,三个时间段产生IgM的量进行两两比较的差异有统计学意义（P〈0．01）;所有实验组均未检测到IgG,空白对照组未检测到IsM、IsG。结论IFN-γ可刺激B细胞分泌产生抗体,且对B细胞的种类没有选择性;只刺激产生IgM,而无IgG产生,但其产生的抗体IgM的性质有待于进-步确定,其可能通过Ⅲ型超敏反应机制诱导自身免疫疾病的发生。     

兔肾缺血再灌注损伤时TNF-α、ATPase的变化及黄芪对其的影响

目的：探讨肾缺血再灌注损伤时TNF—α、ATPase的变化和黄芪在兔肾缺血再灌注损伤中的作用。方法：健康成年日本大耳白兔27只，随机均分为手术对照组、单纯缺血再灌注(IR)组和黄芪连注射液处理组(黄芪 IR)。在肾缺血1h再灌注48h后测血清肌酐(Cr)，肾组织肿瘤坏死因子(TNF—α)和ATP酶(Na^ —K^ ATPase、Ca^2 ATPase，Mg^2 ATPase)含量。结果：与对照组相比，IR组Cr、TNF—α显著增高(P＜0．05，P＜0．05)，ATP酶活性下降(P＜0．05)；与IR组相比，黄芪 IR组cr、TNF—α显著降低(P＜0．05)，黄芪 IR组Na^ —K^ ATPase、Ca^2 ATPase活性明显升高(P＜0．05)。结论：黄芪具有减轻肾IR损伤的作用，其机制可能与其减少TNF—α含量、增强ATPase的活性有关。     

临床医学本科生医学免疫学教学调查及对策研究

对临床医学本科生医学免疫学学习情况进行了调查，发现96．6％的学生认为免疫学重要，近50％的学生认为免疫学难理解；66％的学生认为难记忆。认为激发学生的兴趣，内容上以必需为准，适量为度，加强学习方法指导，是改进免疫学难教难学的有力措施。     

中性粒细胞自发性凋亡及槲皮素对其影响的研究

中性粒细胞是机体早期炎症反应中最重要的炎症细胞,它在炎症反应中处于核心位置。中性粒细胞具有快速地组成自发凋亡的内在生命特征。通过自发性凋亡这一机制,保持中性粒细胞的正常消亡,使其达到动态平衡和内环境稳定。有证据表明,炎症部位老化的中性粒细胞通过自发性凋亡的形式逐渐丧失其生物学功能,最终被周围吞噬细胞吞噬清除掉。然而,炎症细胞被清除的机制只要在时空、位置、强弱、速度、细胞／分子间相互作用等方面调控不当,则可能出现自身的炎症细胞对自身组织细胞的损伤。     

人源性天然噬菌体展示文库的构建及鉴定

目的:构建人源性天然噬菌体展示文库并对文库进行鉴定。方法:从未经主动免疫健康志愿者的外周血淋巴细胞中提取总RNA,反转录合成cDNA,用直接PCR及半巢式PCR扩增人抗体重链(VH)及轻链(Vκ和Vλ)可变区基因。采用改进的重叠延伸PCR法将VH基因和VL(Vκ和Vλ)基因连接成人单链抗体(scFv)基因,并将scFv文库基因克隆到噬菌体载体pCANTAB-5E中,电转化E.coliTG1,构建单链抗体文库。结果:采用直接PCR和半巢式PCR扩增得到42条VH基因片段,16条Vκ基因片段,18条Vλ基因片段。混合的VH和VL等摩尔比连接后,产生的单链抗体文库基因大小为750bp左右;转化后构建了文库容量为1.35×108的单链抗体文库。BstNⅠ酶切分析文库中的单链抗体基因结果显示,酶切得到的scFv指纹图谱均不相同。结论:构建的抗体文库多样性好,可用于多种人源性单链抗体的筛选。     

人B细胞膜分子CD5的研究进展

人CD5 B1细胞是B细胞的一个分支,通常根据B细胞的发育来原可将B细胞分为B1细胞和B2细胞两类,根据是否表达CD5分子,又可将B1细胞分为Bla和Blb两种亚型,表达CD5分子的为Bla细胞即CD5 B1细胞,B2和Blb不表达CD5分子.CD5 B1细胞以其独特的表型、争议的来源、多特异性抗体的分泌以及在某些自身免疫性疾病和恶性肿瘤中所起的作用越来越受到学者们的重视.CD5 B1细胞可产生IgM类多反应性抗体(polyreactive antibodjes),可识别多种细菌表面抗原,包括细菌表面的多糖、脂多糖(LPS),因而能抵御病原微生物感染,是机体抵抗外来病原微生物感染的第一道防线[1,2].     

MTT法进行活菌计数的方法学探讨

目的 :建立一种快速、稳定、灵敏并可反映细菌活性的细菌计数方法。方法 :以大肠杆菌为研究对象 ,探讨MTT法用于细菌计数的可行性及反应时间、测量细菌数量的范围、MTT的用量、是否加入溶解剂等实验条件。结果 :细菌数在 3.8× 10 7～ 1.2× 10 9 ml范围内测出的OD值与细菌浓度呈良好的正相关 ,反应时间为 2 0分钟 ,MTT10 μl、2 0 μl均可 ,2 0 μl效果更佳。可不用溶解剂。 结论 :MTT比色分析法可用于检测活菌数量     

NK细胞胞浆内游离Ca^2＋浓度和分布的测定

目的确定NK细胞胞浆内Ca2+的浓度及分布的检测方法.方法应用共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)观察人外周血中NK细胞胞浆内Ca2+的分布,并用Fluo-3/AM和PluromicF-127对胞浆内游离Ca2+的浓度进行测定.结果最佳负载条件是用2μmol/ml的Fluo-3/AM在37℃恒温下孵育60分钟,同时加入1μl/ml25%的Pluronic F-127以阻断Ca2+荧光示踪Fluo-3/AM的外排和房室化.静息状态下NK细胞胞浆内Ca2+分布不均衡,Ca2+浓度为91.3±4.8nM(-x±s).结论应用Fluo-3AM和PluronicF-127结合CLSM技术是研究NK细胞胞浆内游离Ca2+的准确,简单,灵敏的方法之一.     

NK细胞膜受体与膜分子在Ca^2＋信号传导中的作用

自然杀伤细胞是抗肿瘤和抗病毒感染细胞，其介导的自然细胞毒效应主要依赖于表面众多的膜受体和膜分子接受刺激，通过Ca^2 的信号传导作用而产生。这些膜受体和膜分子作用强度不一，缺乏典型的传导细胞毒信号的膜受体，但它们功能多样，作用协调，有效地调控了NK细胞功能的发挥。     

黄芪和当归注射液对兔肾缺血再灌注损伤时ATP酶的影响

目的：观察黄芪、当归注射液在肾缺血再灌注（IR）损伤中的作用及机制。方法：将33只健康成年日本大耳白兔，随机分为手术对照（control)组、单纯肾缺血再灌（IR）组、黄芪注射液处理IR组（黄芪＋IR）和当归注射液处理IR（当归＋IR）组。肾缺血1h再灌注48h,取肾作电镜检查；测血清肌酐（Cr)、肾组织中ATP酶活性。结果：IR组肾组织变性改变显，黄芪、当归组病变较IR组明显减轻。与对照组相比，IR组血清Cr的含量升高（P＜0．05），肾中ATP酶活性降低（P＜0．05）；黄芪＋IR组，当归＋IR组较IR组血清Cr含量降低（P＜0．05），肾中ATP酶活性升高（P＜0．05），同对照组差异无显性（P＞0．05）。黄芪＋IR组与当归＋IR组血清Cr含量及肾中ATP酶活性差异无显性（P＞0．05）。结论：黄芪和当归可能通过保护ATP酶而减轻IR肾损伤。