SSCP突变分析技术新进展

单链构象多态性是突变分析中的一项重要技术。近年来 ,在分辨率、自动化、高通量等方面有了较大改进 ,是现代分子遗传学研究中用于已知基因突变检测和未知基因突变筛查的一种非常有用的工具。     

脊髓性肌萎缩症的分子遗传学研究新进展

脊髓性肌萎缩症是一种常染色体隐性遗传病,以脊髓运动神经元退化为特征,是由运动神经元存活基因突变引起功能性的运动神经元存活蛋白水平降低所致.该基因及其蛋白功能的阐明为临床基因诊断提供了依据.     

terlipressin对肝大部切除术后早期门静脉高灌注综合征的保护性治疗研究

目的：探讨terlipressin对大鼠肝大部切除术后再灌注早期门静脉高灌注综合征的保护性治疗作用及其机制。方法：将36只大鼠随机分为特利加压素(terlipressin)治疗组（Th组,n=18）及生理盐水治疗对照组（Ch组,n=18）。两组大鼠分别在给药前及再灌注后30 min,1 h,2 h 4个时点进行血流动力学观察,并依此各再分为3亚组：Th1/2,Th1,Th2及Ch1/2,Ch1,Ch2组,每亚组6只大鼠。另20只大鼠随机分为特利加压素治疗存活组（Ts组）10只及生理盐水治疗存活对照组（Cs组）10只。采用肝大部切除术（90%）加肝门阻断（30 min）动物模型,将Th组及Ts组大鼠在肝门阻断前通过阴茎背静脉注射terlipressin,Ch组及Cs组用同法在相同的时间给予同等体积的无菌生理盐水。观察terlipressin对小体积肝大鼠生存率及血流动力学的影响。结果：所有大鼠存活超过24 h;Ts组10 d存活率（80.0%）明显高于Cs组（30.0%）（P＜0.05）。Th1/2亚组门静脉压力［（13.21±0.32）cm H2O］明显低于Ch1/2亚组的［（16±1.03）cm H2O］（P＜0.05）;Th1亚组门静脉压力降到最低,达（11.52±0.17）cm H2O,明显低于Ch1亚组的（13.5±0.18）cm H2O（P＜0.05）。与相对应组基础门静脉压力比较,Ch1/2亚组显著性增加（P＜0.05）。Th1/2亚组门静脉血流［（7.21±0.21）mL/min］与Ch1/2亚组［（9.50±0.35）mL/min］比较, Th1亚组［（6.11±0.28）mL/min］与Ch1亚组［（6.99±0.19）mL/min］比较,差异均有统计学意义。同时,与相对应基础门静脉血流量比较,Ch1/2亚组显著增加（P＜0.05）。Th1/2［（88.12±1.28）mmHg］,Th1［（80.83±1.79）mmHg］及Th2［（76.29±0.89）mmHg］亚组平均动脉压明显高于相对应的Ch1/2［（57.97±2.01）mmHg］,Ch1［（59.86±1.75）mmHg］及Ch2［（63.71±1.37）mmHg］亚组（均P＜0.05）。Th1/2,Th1,Th2亚组亦显著高于相应的基础平均动脉压（均P＜0.05）。两组各亚组之间及各组内每个亚组与基础中心静脉压比较差异无统计学意义。结论：肝大部切除术后肝门静脉高灌注状态属一过性改变。terlipressin能有效缓解门静脉高灌注状态,可以降低门静脉压力及血流量,能显著提高肝大部切除术后小体积肝存活率。     

pEGFP-C3/Tsarg1融合蛋白在GC-1 spg细胞中的表达与定位

目的构建pEGFP-C3/Tsarg1真核表达载体并在GC-1spg细胞中表达,为研究Tsarg1在生精过程中的机制提供实验基础。方法应用RT-PCR从大鼠睾丸中扩增Tsarg1的开放阅读框(ORF),并将PCR产物插入到T载体中测序验证。随后,将Tsarg1cDNA片段亚克隆入载体pEGFP-C3,筛选阳性克隆,构建pEGFP-C3/Tsarg1真核表达载体。脂质体介导重组体pEGFP-C3/Tsarg1转染GC-1spg细胞,荧光显微镜观察融合蛋白在细胞内的表达与定位。结果成功构建了pEGFP-C3/Tsarg1真核表达质粒,EGFP-Tsarg1融合蛋白能够在GC-1spg细胞中表达,Tsarg1蛋白定位于细胞胞浆。结论 pEGFP-C3/Tsarg1真核表达载体的成功构建及带GFP标签的Tsarg1融合蛋白在GC-1spg细胞中的成功表达为进一步研究Tsarg1的生物学功能奠定了基础。     

肥胖、糖脂代谢障碍对美托洛尔降压疗效的影响

目的 探讨肥胖、糖脂代谢障碍对选择性β1肾上腺素能受体阻滞剂美托洛尔降压疗效的影响. 方法筛选血压分级为1级或2级的原发性高血压患者300例,给予美托洛尔治疗8周,根据血压的降低判断其疗效,并分析肥胖或中心性肥胖、糖尿病和高脂血症对美托洛尔疗效的影响.结果 肥胖或中心性肥胖、糖脂代谢障碍可显著影响美托洛尔的降压疗效,正常体质指数组的降压有效率(68.4%)均高于超重组(47.4%)和肥胖组(39.4%),非中心性肥胖组的有效率(62.8%)也高于中心性肥胖组(46.6%),高脂血症和糖尿病对疗效的影响有性别差异.Logsitic 回归分析发现,体质指数是对美托洛尔疗效影响最大的因素. 结论肥胖、糖脂代谢障碍可影响美托洛尔的降压疗效,后者对男性影响更大.     

自发性高血压大鼠心肌β1肾上腺受体过表达对美托洛尔降压疗效的影响

目的 探讨自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR)心肌β1肾上腺受体(β1-AR)表达上调对美托洛尔降压疗效的影响。方法 24只SHR随机分为AAV/Adrb1组、假手术组、AAV/Adrb1+美托洛尔组(AAV/Adrb1+Met组)和假手术+美托洛尔组(Sham+Met组),每组6只。携带β1-AR质粒的AAV载体病毒(AAV/Adrb1,2×10¹² vg·mL^-1)经腹心包腔内注射术转染SHR。病毒干预4周后,应用RT-PCR、Western blot法及免疫组化法检测AAV/Adrbl组和假手术组大鼠心肌β1-AR表达,观察AAV/Adrb1对SHR心肌β1-AR表达的影响;分别给予AAV/Adrb1+Met和Sham+Met组美托洛尔(25 mg·kg^-1·d^-1)灌胃处理,持续4周监测SHR血压,观察心肌β1-AR表达上调对美托洛尔降压疗效的影响。结果 与假手术组相比,AAV/Adrbl组心肌β1-AR mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。美托洛尔干预时,AAV/Adrb1+Met组大鼠收缩压降低幅度显著高于Sham+Met组(P<0.05)。结论 SHR心肌β1-AR过表达提高美托洛尔的降压疗效,心肌β1-AR表达水平可能是影响美托洛尔疗效个体差异的因素之一。     

三亚地区新生儿唐氏综合征流行病学调查及相关发病因素研究

目的：了解三亚地区活产婴儿唐氏综合征（DS）的发生率,并探讨其相关影响因素。方法将三亚地区住院分娩的新生儿共25032例纳入调查对象,通过外周血染色体分析对临床疑似为DS的患儿进行确诊。同时收集患儿及其双亲的临床资料,计算该地区DS发生率,并分析各相关发病因素。结果该地区DS总的发生率为9．59／万,其中汉族为8．34／万,黎族为14．42／万;DS患儿母亲平均育龄为29．8岁,DS发生率随母龄增长呈上升趋势。患儿母亲孕前有毒物、药物等“暴露”史者占45．8％。结论三亚地区DS发生率较高,提高该地区妇女孕期唐氏筛查及产前诊断率十分必要。     

猪内源性逆转录病毒在异种移植中的感染风险

猪作为异种移植供体可有效解决人类同种移植供体短缺的问题,但猪内源性逆转录病毒具有潜在的感染风险,严重影响了猪器官、组织、细胞在临床中的应用。因此,在异种移植应用于临床前,阐明猪内源性逆转录病毒的感染风险性至关重要。     

INSIG2稳定表达细胞系的建立及该基因对脂肪代谢的影响

目的 建立胰岛紊诱导基因2(INSIG2)稳定表达细胞系,观察过表达INSIG2后对脂肪代谢的影响.方法 构建INSIG2真核表达质粒,经脂质体转染313-L1细胞,RT-PCR、免疫细胞化学法鉴定INSIG2阳性细胞株及检测胰岛素诱导基因1(INSIG1)、脂肪酸合成酶(FAS)mRNA表达;ELISA检测细胞培养液中游离脂肪酸(FFA)的含量;油红"O"染色检测脂肪细胞的分化.结果 pcDNA3.1( )-INSIG2成功转染3T3-L1细胞,过表达INSIG2后,INSIG1、FAS mRNA表达均下调,细胞培养液中游离脂肪酸含量降低,脂肪细胞分化明显抑制.结论 获得了INSIG2稳定表达细胞系,过表达INSIG2对脂肪代谢具有抑制作用.     

pEGFP-C3 -insig2融合基因真核表达质粒的构建、表达及其对下游基因的影响

目的：构建insig 2基因的真核表达质粒, 转染3T3-L1细胞并观察对下游脂肪酸结合蛋白（AP2）mRNA、脂联素mRNA表达的影响.方法：采用RT-PCR法获取小鼠全长insig 2基因, 并克隆入真核表达载体pEGFP-C3中.酶切、测序鉴定后, 经脂质体转染入3T3-L1细胞, 通过荧光显微镜观察及RT-PCR检测其在3T3-L1细胞中的表达及下游基因的变化.结果：成功地构建了pEGFP-C3-insig 2融合基因的真核表达载体, 荧光显微镜观察到pEGFP-C3-insig 2融合蛋白在转染的3T3-L1细胞胞质中的表达, insig 2基因的转录明显上调.转染后24 h、 72 h较0 h AP 2 mRNA和脂联素mRNA的转录水平明显下调.结论：构建了insig 2基因的真核表达质粒, 在转染的3T3-L1细胞中insig 2的过表达可能影响该细胞的脂肪代谢.