含淤胆血清的培养体系从大鼠骨髓细胞中筛选与扩增肝干细胞亚群

目的：探讨采用含淤胆血清的培养体系从骨髓细胞中筛选与扩增骨髓源性肝干细胞的可行性。方法：制备含2％、5％、7％和10％淤胆血清的筛选培养液，培养大鼠骨髓细胞，4d时加入肝细胞生长因子促进肝干细胞生长，2周时行免疫组化与RT—PCR检测肝干细胞标志、糖原染色和尿素合成试验分析功能。结果：在2％淤胆血清中，骨髓细胞不能形成克隆，7％与10％的血清则骨髓细胞逐渐凋亡。在5％的淤胆血清时，骨髓源性肝干细胞在此病理筛选培养液中能够生存并选择性生长，而其他类型细胞则脱落凋亡；第2周时，形成肝细胞样集落，细胞表达胚胎时期肝细胞特征性蛋白，具有肝细胞特有糖原和尿素合成功能。结论：含淤胆血清的微环境筛选培养体系能够有效地从骨髓细胞中筛选骨髓源性肝干细胞，为临床肝细胞替代治疗的获取丰富供体细胞来源提供了新的思路。     

人参皂甙与肝细胞生长因子诱导骨髓间质干细胞分化为肝细胞的实验研究

目的探讨人参皂甙(CS)与肝细胞生长因子(HGF)体外诱导骨髓间质干细胞(MSC)分化为肝细胞的协同效应及分子机制。方法采用 Ficoll-Paque 液离心分离鼠 MSC,体外扩增,在 LDMEM 培养液中加入 HGF 和 GS 进行诱导分化。通过细胞形态学观察、免疫组化检测白蛋白、CK8/18的表达以及 RT-PCR 检测白蛋白、CK18等肝细胞特征性蛋白的 mRNA 转录水平、糖原染色等来分析诱导分化的效果。结果鼠MSC 体外扩增3代,细胞数可达(1～2)×10~7左右。加入 HGF 和 GS 诱导后,MSC 形态逐渐分化为肝细胞样,免疫组化染色见胞浆内出现棕黄色颗粒,表达肝细胞特有的白蛋白以及 CK8/18等蛋白。RT-PCR 显示有白蛋白、CK18等的 mRNA 转录。糖原染色亦呈阳性反应。结论人参皂甙与肝细胞生长因子在体外可以诱导骨髓间质干细胞分化为肝细胞样细胞。     

儿童卵巢未成熟畸胎瘤合并腹膜胶质瘤病1例并文献复习

目的 探讨儿童卵巢未成熟畸胎瘤（OIT）合并腹膜神经胶质瘤病（GP）的诊治经验。方法 回顾性分析2014年中山大学孙逸仙纪念医院收治的1例儿童OIT合并GP的临床资料、病理特征、治疗及预后并复习国内外文献。结果 患儿女,1岁11个月,腹胀10 d。CT示腹部巨大混合密度肿块,内见脂肪、结节状钙化及液性密度影,伴大量腹腔积液,考虑恶性畸胎瘤可能。血清甲胎蛋白（AFP）295.98 μg/L。术中见肿物位于右侧卵巢,大小约20 cm×15 cm×15 cm,表面不规则;腹腔积液量约1000 mL,其中可见囊性小肿物漂浮;盆腔、腹壁、网膜、双侧膈下及肝门区散布大量鹅卵石样大小不等肿物。行右侧卵巢巨大肿瘤切除、大网膜切除、右侧膈下肿物切除术。病理显示肿物符合未成熟畸胎瘤（WHO 3期）特征;鹅卵石样肿物镜下显示为成熟神经胶质组织。免疫组织化学染色结果：NSE（+）,Syn（+）、S-100（+）;Vimentin（+）,bcl-2部分（+）,Ki67约20%（+）,CgA（-）。术后复查AFP 179.50 μg/L。采用PEB方案（顺铂、依托泊苷、博来霉素）化疗,至今6个疗程,化疗2个疗程后血清AFP转阴性。4个疗程后腹部CT示腹膜、网膜及肠系膜弥漫性增厚,以肝周及膈下腹膜为著。5个疗程后PET/CT示右侧肋膈角、肝包膜及肝门区多发低密度灶伴高密度钙化,局部代谢增高,血清AFP 1.58 μg/L。目前患儿病情稳定。结论 OIT合并GP是一种儿童罕见病症,治疗应根据OIT的分期及分级,采取相应的手术或手术+化疗治疗,是否需要针对GP行相应化疗,其临床意义有待进一步研究。     

沉默NANOG基因表达对侧群表型肝癌干细胞化疗耐药的影响

目的观察沉默NANOG基因对侧群表型肝癌干细胞化疗耐药的影响,初步探讨提高肝癌化疗效果的新方法。 方法基于侧群（SP）细胞分选法,采用流式细胞术从肝癌细胞Hep3B中分选SP细胞和非侧群（NSP）细胞,通过特异性靶向NANOG基因的siRNA沉默SP细胞中NANOG基因表达,MTT法检测SP细胞对化疗药物阿霉素（DOX）的敏感性,实时荧光定量PCR（real-time PCR）和免疫印迹（Western blotting）检测NANOG和耐药相关基因ABCB1的表达。 结果（1）肝癌细胞Hep3B中分选的SP细胞比例为（13.3±1.8）%。（2）MTT法结果显示DOX处理后SP细胞存活率为（65.3±5.4）%,NSP细胞存活率为（41.2±4.7）%;SP细胞对DOX的耐药性高于NSP细胞（P<0.05）。（3）NANOG和ABCB1 mRNA在SP细胞中的表达水平分别是NSP细胞的4.5、4.0倍;NANOG和ABCB1蛋白在SP细胞中表达水平分别是NSP细胞的4.2、3.6倍,差异均有统计学意义（P<0.05）。（4）RNAi沉默NANOG表达后,siNANOG组SP细胞NANOG、ABCB1的mRNA和蛋白表达水平均较Mock组和siNC组明显下降（P<0.05）,SP细胞对阿霉素DOX的耐药性显著降低（P<0.05）。 结论NANOG基因在维持SP表型肝癌干细胞耐药性起重要作用,沉默NANOG表达后SP细胞耐药性受到抑制,可能与ABCB1表达下调有关。     

先天性巨结肠症的再次手术处理：附7例分析

本文报告７例先天性巨结肠症再次手术处理的原因及对策。     

肝细胞生长因子诱导骨髓间质干细胞分化为心肌细胞

目的:探讨肝细胞生长因子(HGF)体外诱导骨髓间质干细胞(MSC)定向分化心肌细胞的一种新方法。方法: 分离SD大鼠骨髓MSC,培养至4-6代后,添加HGF(终浓度10 μg/L)持续培养30 d,倒置显微镜下动态观察分化细胞的自律性搏动和对0.1%异丙肾上腺素和无Ca²⁺孵育液的反应,并行心肌肌凝蛋白表达鉴定。结果: 分化第14-20 d骨髓间质干细胞增殖形成集落,10%-50%克隆中开始出现持续节律收缩的细胞群体,节律频率为70-90次/min,异丙肾上腺素加快其搏动速率,无Ca²⁺孵育液则抑制之。细胞心肌肌凝蛋白表达鉴定为心肌细胞。结论: HGF可诱导骨髓间质干细胞分化为心肌细胞,且有较高的诱导效率。