终末期肾病患者血清蛋白质组二维电泳图像与正常血清蛋白图谱比较研究

目的建立和优化终末期肾病患者血清蛋白质组研究的双向电泳及相关技术,并与正常血清蛋白图谱比较。方法以固相pH梯度等电聚焦为第一向和垂直SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳为第二向,对终末期肾病患者血清蛋白质样品制备、上样量、IPG胶条、等电聚焦等进行条件优化。质谱鉴定有差异表达的其中4个蛋白点。结果成功获得终末期肾病患者血清蛋白质组电泳图谱,与正常者相比存在表达有明显差异的蛋白点。结论成功建立了终末期肾病患者血清蛋白质组研究的双向电泳技术平台。     

鲎试验毛细管法价值的探讨

本文用鲎试验毛细管法检测含不同浓度内毒素的重蒸馏水、血和尿标本各10份。同时用试管法、玻片染色法作了对照研究,结果表明三种方法的敏感度无明显差异,但毛细管法具有能大量节省鲎试剂、结果易判断、适用范围广等优点。     

保护素D1 通过抑制肾脏炎症及足突细胞上皮-间充质转化而抑制早期 糖尿病肾病小鼠肾纤维化

 目的：保护素D1 (PD1) 是一个潜在的抗炎症脂蛋白分子,本实验探讨其治疗早期糖尿病肾病（DN）肾纤维化的作用及机制。方法：用链脲佐菌素125 mg/kg 2次腹腔注射C57BL/6J雌性小鼠,建立早期DN小鼠模型。糖尿病模型成功后,用PD1（0.08 mg·kg-1·d-1）腹腔注射治疗,设正常鼠及DN鼠为对照。治疗8周后检测各组小鼠24 h尿蛋白及尿白蛋白定量、体重、肾重、肾重/体重比、血清及尿肌酐和肌酐清除率;用PAS染色法检测肾小球系膜区基质/肾小球面积比,用免疫荧光染色法检测肾皮质中巨噬细胞的数量,用Western blotting检测肾小球纤连蛋白（FN）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达,以及肾小球足突细胞特异性上皮标志蛋白zonula occludens-1(ZO-1)和P-cadherin的表达;同时,体外用高糖刺激小鼠巨噬细胞株RAW264.7,检测PD1对其分泌肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素1β（IL-1β）的抑制作用。体外用转化生长因子β1（TGF-β1）刺激小鼠足突细胞株,用Western blotting检测PD1对其诱导足突细胞上皮-间充质转化(EMT)中上皮细胞标志蛋白P-cadherin 和ZO-1减少的恢复作用,及间充质细胞标志蛋白成纤维细胞特异性蛋白1（FSP1） 和α-SMA过表达的抑制作用。结果：PD1能减少DN小鼠肾小球系膜基质的积聚、24 h尿蛋白及尿白蛋白定量、体重、肾重和肾重/体重比,抑制异常增高的肌酐清除率。PD1能减少DN小鼠肾皮质中巨噬细胞的数量,抑制DN小鼠肾小球FN和α-SMA的表达,恢复足突细胞特异性上皮标志蛋白ZO-1和P-cadherin的表达。PD1能抑制高糖诱导RAW264.7分泌TNF-α和IL-1β,能抑制TGF-β1诱导足突细胞FSP1和α-SMA表达的增加以及ZO-1和P-cadherin表达的减少。结论：PD1能减轻早期DN小鼠肾纤维化,其部分机制可能通过抑制肾脏的炎症及足突细胞EMT。     

蛋白激酶C-alpha对小鼠尿浓缩功能的调节机制初探

目的通过观察蛋白激酶C(PKC)-alpha基因敲除鼠血清加压素(AVP)水平及髓内水通道蛋白2(AQP-2)分布、表达和转运状态的变化,初步探讨PKC-alpha在小鼠尿浓缩功能中的调节机制。方法使用代谢箱收集PKC-alpha基因敲除鼠及SV129野生鼠24 h尿液并取血,采用渗透计检测尿渗透浓度。ELISA法检测正常饮食下24 h尿尿素排泄量。放射性免疫法(RIA)检测血清AVP水平。免疫荧光及半定量免疫印迹技术检测小鼠内髓AQP-2的分布和表达情况。分别使用V2受体拮抗剂SR141263及不同浓度去氨基精加压素(DdAVP)腹腔内注射,检测3 h内尿渗透浓度、尿量以观察两组小鼠AQP-2转运状态。结果正常饮食下PKC- alpha基因敲除鼠24 h尿尿素排泄量[(3．25±0．18)mmol／24 h比(3．83±0．42)mmol／24 h,P= 0．24]以及血清AVP水平[(4．64±0．43)pmol／L比[(5．03±0．44)pmol／L,P=0．55]与野生鼠相比,差异均无统计学意义。两组小鼠内髓AQP-2的分布及表达相似(P=0．48)。不同浓度DdAVP腹腔注射后两组小鼠尿量变化曲线完全一致。SR141263腹腔注射后PKC-alpha基因敲除鼠及野生鼠尿渗透浓度改变之间差异也无统计学意义[(0．20±0．02)mmol／L比(0．20±0．04) mmol／L,P=0．97]。结论PKC-alpha参与调节的小鼠尿浓缩功能与血清AVP水平、髓内AQP-2状态无关。