人层粘连蛋白α4链LG3-4组件的克隆和表达

目的利用基因工程技术获得重组人层粘连蛋白α4链LG3-4组件(human laminin Alpha4 LG3-4 Module, hLNα4LG3-4)蛋白并检测其抗原性.方法采用RT-PCR方法从人胎盘组织扩增hLNα4LG3-4的cDNA片段,T/A克隆法将其插入pMD-18T载体进行测序.亚克隆法构建原核表达载体pET-28a-LG3-4,在BL21(DE3)中表达hLNα4LG3-4融合蛋白.融合蛋白经SDS-PAGE鉴定、Ni-NTA亲和层析纯化及Western印迹分析.结果成功获得hLNα4LG3-4 cDNA片段,与GenBank中序列同源性为98%,突变碱基不改变蛋白的氨基酸序列.12%SDS-PAGE电泳检测显示:经IPTG诱导后BL21(DE3)/pET28a-LG3-4细菌裂解液总蛋白中出现一条分子量为44×103的新蛋白带,纯化后目的蛋白纯度达95%以上,且Western印迹可特异地检测到目的蛋白所对应转移带.结论成功表达和纯化了hLNα4LG3-4蛋白,从而为研究LG组件在疾病发生过程中的作用及其功能位点打下了基础.     

hLNα4LG1基因克隆、表达及生物学活性检测

目的克隆并表达具有生物学活性的人层黏连蛋白α4链LG1组件(human laminin alpha4 chain LG1 module,hLNα4LG1)蛋白.方法RT-PCR扩增hLNα4LG1的cDNA片段并将其插入pMD-18T载体进行测序.将测序片段亚克隆入原核表达载体pET-28a并在BL21(DE3)大肠杆菌中进行表达,Western blot对表达蛋白进行鉴定.用Ni-NTA亲和柱对目的蛋白进行纯化,并通过细胞黏附与伸展实验对其生物学活性进行检测.结果成功克隆了hLNα4LG1的cDNA片段,SDS-PAGE及Western blot分析显示,经IPTG诱导后BL21(DE3)/pET28a-LG1总蛋白中出现一条分子量为26×103的新蛋白带.与对照组相比,Ni-NTA亲和层析纯化的目的蛋白有明显促进A549细胞伸展与黏附的作用.结论克隆并原核表达了hLNα4LG1蛋白,目的蛋白具有促进细胞黏附与伸展的活性,为深入研究hLNα4LG1的功能奠定了基础.     

医学生物技术专业基因工程教学的体会

为了讲好医学生物技术专业学生的基因工程课程,依据教学经验,从教学内容、教学方法以及课外教学等方面提出了一些教学体会和思考,通过改革教学内容,加强绪论的讲解,采用案例教学和读书报告等方法,并增加课外实践和见习等方式,可激发学生学习兴趣,提高教学效果.     

应用多种教学方法提高生物化学课堂教学质量

生物化学是一门重要的医学基础课,也是一门较难掌握的课程。介绍了在生物化学教学过程中,如何采用多种方法来活跃课堂氛围,激发学生的学习兴趣,从而提高教学质量。     

人层黏连蛋白α4链LG1-3组件的克隆及酵母表达

目的:利用巴斯德毕赤酵母表达系统获得重组的人层黏连蛋白LG1-3组件蛋白,为进一步研究LG1-3的结构和功能间的关系奠定基础。方法:利用RT-PCR从人胎盘组织总RNA中扩增LG1-3组件cDNA,并重组入pPICZαA,电转化入毕赤酵母GS115,利用甲醇诱导表达目的蛋白。结果和结论:获得了1 800 bp LG1-3组件cDNA,利用体外定点突变将SacⅠ酶切位点GAGCTC突变为GAGCGC,经SDS-PAGE和W estern印迹检测到相对分子质量为67.48×103的LG1-3组件蛋白的表达。     

层黏连蛋白α4链中αvβ3整合素结合肽的精细鉴定与功能分析

目的 利用点突变、缺失突变及功能实验确定αvβ3整合素在已鉴定人层黏连蛋白α4链(human laminin alpha4,LNα4)G19肽段中的最小结合位点及关键氨基酸残基.方法 采用同源序列比较确定G19肽中的保守氨基酸残基,点突变确定其中的关键氨基酸残基,缺失突变确定αvβ3整合素结合的最小肽段,并通过人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)管样结构形成实验及鸡胚尿囊膜(chick chorioallantoic membrane,CAM)实验验证鉴定肽的生物学功能.结果 同源性比较分析发现,G19肽中共存在10个保守性氨基酸残基位点.点突变分析发现第4位的I、第10位的H及第16位的Y是αvβ3整合素结合的关键位点,缺失突变分析确定G1124-1137肽段(G14肽)是αvβ3整合素结合的最小肽段, 合成的G14肽可以浓度依赖性地促进HUVEC管样结构的形成及CAM的血管生成.结论 成功鉴定了αvβ3整合素在LNα4中的最小结合位点及关键氨基酸残基.所鉴定的肽段具有促HUVEC成管样结构及促CAM血管生成的生物学功能.     

左旋棉酚通过细胞自噬下调Namalwa细胞中B淋巴细胞刺激因子的表达

目的探讨左旋棉酚[(-)-gossypol]下调Namalwa细胞中B淋巴细胞刺激因子(B lymphocyte stimulator,BLyS)的可能机制。方法采用CCK8、台盼蓝活细胞染色检测左旋棉酚在体外对Namalwa细胞的生长抑制作用,吖啶橙(acridine orange,AO)染色观察经左旋棉酚处理后细胞自噬的形态特征,Western blot检测细胞中BLyS和自噬蛋白微管蛋白轻链3(LC3)的表达情况。结果左旋棉酚对Namalwa细胞有明显的增殖抑制作用,并且具有时间和剂量依赖性;AO染色后细胞内可观察到明显的细胞自噬小体;Western blot结果显示,左旋棉酚可下调Namalwa细胞中BLyS的表达,并上调LC3Ⅱ蛋白的表达;自噬特异性抑制剂3-methyladenine(3-MA)可显著抑制左旋棉酚对BLyS的下调与LC3Ⅱ的上调作用。结论左旋棉酚可能通过诱导细胞自噬来下调B淋巴细胞中BLyS的表达,从而抑制细胞生长。     

教学方法改革在提高生物化学教学质量中的探讨

教学方法改革是本校推进人才培养模式转型的重要举措。生物化学是高校医学专业的必修课程,是进行教学方法改革的重要学科。为进一步提高生物化学教学质量,本研究在不同层次学生的生物化学教学中选择合适的教学方法,进行课堂教学方法改革,取得了理想的教学效果,从而为教学方法改革的应用积累了一定的经验。     

优化分子生物学教学过程，培养研究生创新思维

针对以往研究生分子生物学教学过程中存在的教学内容陈旧、考试方式落后等弊端，采用新型的分子生物学教学策略，通过精选教学内容、组织专题讲授、改革考核方式、积极交流反馈等手段对教学过程进行了优化。实践表明，新型教学策略在培养研究生的创新思维方面收到了良好的效果。