不同冷冻方法对小鼠不同成熟时期卵母细胞纺锤体的影响

目的:探讨不同冷冻方法对小鼠成熟期(MⅡ期)及生发泡期(GV期)卵母细胞的纺锤体及胚胎发育的影响。方法:收集GV期和有纺锤体的MⅡ期小鼠卵母细胞,随机分为3组:慢速冷冻-快速复温组、超高速玻璃化冷冻组和对照组(未冷冻组)。Polscope观察解冻0、3、6h后存活的MⅡ期及体外培养成熟GV期卵母细胞的纺锤体,有明显纺锤体的行卵胞浆内单精子显微注射受精,评价胚胎发育。结果:(1)超高速玻璃化GV组的存活率、卵裂率均显著高于慢冻GV组(P<0.05);(2)两冷冻MⅡ组解冻后0、3及6h纺锤体出现率和优质胚胎率均显著低于对照MⅡ组(P<0.05);(3)超高速玻璃化GV组体外成熟后纺锤体的出现率、优质胚胎率均显著高于超高速玻璃化MⅡ组(P<0.05)。结论:慢速冷冻-快速复温法对小鼠不同成熟时期卵母细胞的纺锤体损伤较大;超高速玻璃化冷冻对小鼠生发泡期卵母细胞纺锤体的影响则较小,是一种简便、快捷、高效的冷冻方法。     

宫内节育器对大鼠子宫内膜血管内皮生长因子及其受体表达影响的研究

目的:研究置固定式铜宫内节育器(FCu-IUD)和固定式吲哚美辛铜宫内节育器(FICu-IUD)的大鼠子宫内膜组织中血管内皮生长因子(VEGF)及其受体Flk-1的表达。方法:采用蛋白印迹法(Western blotting)检测FCu-IUD组、FICu-IUD组大鼠子宫内膜组织VEGF及Flk-1的表达,逆转录聚合酶联反应(RT-PCR)检测各组VEGF mRNA的表达。以未置器一侧作为对照。结果:大鼠置器侧与对照侧子宫内膜均可检测到与VEGF121和VEGF165两种VEGF亚型相对应的mRNA与蛋白表达。FCu-IUD组大鼠置器侧子宫内膜VEGF121及VEGF165表达在mRNA水平和蛋白水平均显著升高,与对照侧比较差异有统计学意义(P<0.001,P<0.05)。置器侧Flk-1蛋白的表达明显高于对照侧(P<0·01)。FICu-IUD组置器侧与对照侧比较,VEGF、Flk-1蛋白及VEGF mRNA表达差异均无显著性。结论:Cu-IUD引起的子宫异常出血可能与VEGF的增加有关,吲哚美辛减少Cu-IUD引起的子宫异常出血的作用可能与通过抑制前列腺素合成从而使VEGF生成减少有关。     

核因子-κB在小鼠胚泡着床前后子宫表达的初步研究

探讨核因子-κB(NF-κB)在小鼠胚泡着床过程中是否存在的短暂激活。方法:采用免疫组织化学检测小鼠子宫内膜NF-κB的亚基p65蛋白的定位和表达,Western印迹法检测子宫内膜NF-κB的抑制性蛋白IκBα的降解。结果:p65在小鼠胚胎着床前后子宫内膜均有表达,其部位主要在腔上皮细胞和腺上皮细胞的胞浆部分,基质细胞和子宫肌层也有微弱表达。妊娠后子宫内膜p65的表达增加,妊娠d5达最高值,d8仍然维持较高水平;而d5IκBα的降解最明显。结论:NF-κB可能通过其短暂激活来参与调节小鼠胚泡着床。     

白细胞介素-1β对人早孕期细胞滋养层细胞核因子-κB的激活机制

目的:研究核因子-κB(NF-κB)在离体培养的人早孕期细胞滋养层细胞激活的机制。方法:离体培养人早孕期细胞滋养细胞,以白细胞介素-1β(IL-1β)和NF-κB抑制剂——吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(PDTC)作为处理因素,通过免疫荧光检测NF-κB的亚基p65的核转位;凝胶电泳迁移率改变分析(EMSA)法检测NF-κBDNA结合活性。结果:①IL-1β作用30min后细胞滋养细胞出现了p65的核转位;②细胞滋养细胞NF-κBDNA结合活性显著增高;PDTC能显著降低NF-κBDNA结合活性。结论:IL-1β在离体培养的人早孕期细胞滋养细胞可引起NF-κB的短暂激活,PDTC可以抑制IL-1β诱导的NF-κB的激活。这为进一步研究激活或抑制NF-κB是否能调节NF-κB的靶基因、尤其是在胚胎着床和妊娠发挥重要作用的靶基因提供了理论基础。     

显微受精试管婴儿的基础及临床应用系列研究

目的:进行显微受精试管婴儿的基础及临床应用系列研究。方法:采用显微受精试管婴儿(卵胞浆内单精子显微注射,ICSI)治疗男性不孕症,同时进行了系列基础研究:显微激光薄化人胚胎透明带进行辅助孵出的效果研究;应用显微激光系统附带软件测量人胚胎透明带厚度(ZPT)及厚度变化率(ZPTV)与体外受精-胚胎移植妊娠结局的关系的研究。结果:显微受精试管婴儿应用于临床取得了可喜的成绩,我省首例显微受精试管婴儿于1999年11月在我中心妊娠成功并顺利分娩,填补了省内空白。截止2004年11月,共行显微受精试管婴儿533个周期,临床妊娠率达30%,已出生健康婴儿140个,系列基础研究为提高临床妊娠率提供了理论基础。结论:显微受精试管婴儿是目前治疗男性不孕症最有前景的辅助生殖技术。显微激光薄化人胚胎透明带可有效地增加胚胎种植潜力,提高临床妊娠率。ZPTV而非ZPT是评价胚胎质量的一个有效指标,对妊娠结局有很高的预测价值。     

人脑星形细胞瘤组织中转化生长因子α与肿瘤增殖细胞核抗原检测

目的:探讨人脑星形细胞瘤组织中转化生长因子α(TGF-α)蛋白的表达与肿瘤增殖细胞核抗原(PC-NA)及预后的关系.方法:采用免疫组化SP法检测50例人脑星形细胞瘤(其中星形细胞瘤18例,间变性星形细胞瘤20例,多形性胶质母细胞瘤12例)石蜡标本和10例正常脑组织中TGF-α蛋白表达和PCNA标记指数(PCNA-LI),并随访比较50例人脑星形细胞瘤患者术后1 a的生存率.结果:10例正常脑组织中TGF-α、PCNA-LI蛋白无表达;50例人脑星形细胞瘤组织中TGF-α蛋白表达总阳性率为60.0%(30/50),总PCNA-LI为(67.86±28.68)%;随着肿瘤病理分级的增高,TGF-α蛋白表达和PCNA-LI也显著增高,各级别组间差异有统计学意义(P＜0.05);TGF-α蛋白表达和PCNA-LI呈正相关(r=0.864,P＜0.01),TGF-α蛋白表达强弱和PCNA-LI高低反映患者预后(P＜0.01).结论:人脑星形细胞瘤中存在TGF-α和PCNA蛋白高表达,联合检测TGF-α蛋白和PCNA-LI对评估人脑星形细胞瘤的生物学行为具有重要意义.     

减少优质胚胎移植数目对重复体外受精-胚胎移植妊娠结局的影响

目的:探讨减少优质胚胎移植数目对重复体外受精-胚胎移植(IVF-ET)患者妊娠结局的影响。方法:回顾性分析重复IVF-ET治疗的不孕患者427个周期,根据胚胎移植数分为2枚组和3枚组,分别比较年龄<35岁患者及年龄≥35岁患者移植2枚或3枚优质胚胎的妊娠结局。结果:年龄<35岁患者中,重复周期移植2枚优质胚胎组与3枚组临床妊娠率、流产率和活产率均无明显差异(P>0.05),但2枚组多胎妊娠率显著低于3枚组(P<0.05),新生儿体重显著高于3枚组(P<0.05);年龄≥35岁患者中,两组妊娠率、流产率、活产率和新生儿体重均无差异,但2枚组多胎妊娠率显著低于3枚组(P<0.05)。结论:对于不同年龄段重复周期患者,移植优质胚胎数从3枚减少到2枚,并不会明显降低临床妊娠率,但可减少多胎妊娠的发生,获得更好的妊娠结局。     

精子荧光原位杂交技术在胚胎植入前遗传学诊断中的作用

,1例克氏综合征患者正常胚胎比例为33.3%(4/12).(3)PGD中正常精子的比例与正常胚胎的比例呈正相关关系(r=0.75,P=0.02).结论 精子FISH分析对PGD前生殖遗传咨询有重要的临床意义.     

应用单核苷酸多态性微阵列技术进行胚胎植入前遗传学诊断的价值

胚胎植入前遗传学诊断(preimplantation genetic diagnosis,PGD)克服了常规产前诊断技术因终止异常妊娠带给患者身心痛苦的缺陷,在辅助生殖技术中越来越受到重视。目前,PCR和荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)是PGD中广泛应用的方法,但单细胞FISH和PCR存在污染、     

卵丘细胞对成熟卵母细胞玻璃化冷冻保存及临床妊娠结局的影响

随着体外受精-胚胎移植等辅助生殖技术的发展,低温保存技术的作用越来越重要.由于卵母细胞本身所特有的一些生物学特性,使其冷冻效果尚不能像胚胎冷冻一样大规模地用于临床.影响卵母细胞冻存的因素很多,卵丘细胞的存在能否有效改善卵母细胞冷冻保存效果,各研究结果存在较大差异[1-3].本研究回顾性分析保留卵丘细胞对成熟卵母细胞玻璃化冷冻保存、胚胎发育及临床妊娠结局的影响,现将结果报道如下.