靶向HER2的通用型CAR-T细胞来源的细胞外囊泡的制备及功能鉴定

目的 利用可持续传代的T淋巴细胞系,制备携带靶向人表皮生长因子受体2(HER2)蛋白的嵌合抗原受体(CAR)的细胞外囊泡(EV),并检测其对HER2⁺肿瘤细胞的杀伤能力。方法 采用分子克隆技术构建重组慢病毒质粒。利用成簇的规律间隔的短回文重复序列(CRISPR)/CRISPR相关蛋白9(Cas9)技术和慢病毒感染的方法构建底盘Jurkat细胞。流式细胞术检测底盘Jurkat细胞、嵌合抗原受体T(CAR-T)细胞和CAR-Jurkat细胞的构建。通过聚乙二醇6000(PEG6000)浓缩方法和细胞挤压方法制备EV;微粒子追踪分析(NTA)和Western blot法鉴定EV。萤光素酶报告基因系统检测细胞和EV对肿瘤细胞的杀伤作用。荧光显微镜观察免疫细胞对EV的吞噬作用。结果 酶切鉴定和基因测序结果表明重组质粒构建成功。流式细胞术结果显示底盘Jurkat细胞、 CAR-T细胞和CAR-Jurkat细胞顺利制备。NTA结果显示制备的EV大小正确。萤光素酶报告基因系统证明CAR-T细胞、 CAR-Jurkat细胞、 CAR-T EV和CAR-Jurkat EV对HER2<...     

人防御素-α克隆表达纯化及生物活性初步检测

防御素（Defensin）是一类阳离子大环形多肽,在人体多种器官和组织广泛存在,起着重要的屏障防御作用,对G＋/-菌、真菌及病毒都有杀灭作用.临床观察表明,测定血浆及各种体液中防御素的改变有助于某些炎症性疾患的诊断,如脓毒症、细菌感染及早产等.此外,提纯或重组防御素作为“超级抗生素”来取代传统的抗生素已成为药学界的研究热点.本研究拟在大肠杆菌中表达人防御素-α,建立稳定表达的工程菌和纯化、复性技术途径,获得活性蛋白,为进一步研究提供材料.     

pHGF对肝癌细胞株（HCC─9204）P53基因mRNA表达的抑制

ｐＨＧＦ对肝癌细胞株（ＨＣＣ┐９２０４）Ｐ５３基因ｍＲＮＡ表达的抑制尤玉琴１高辉２余耀宙１路凡２高磊２张宜俊１（１广州空军医院肝病研究所广州５１０６０２２第四军医大学生物化学教研室）关键词促肝细胞生长素Ｐ５３基因表达中图号Ｒ７３４．７促肝细胞生长素（...     

人α防御素融合表达、纯化及生物活性检测

目的:获得大量重组人α防御素(HDα)并检测其活性,为其深入研究提供必要的材料。方法:体外化学合成得到带有羟氨裂解位点编码序列的HDα基因片段,克隆入pBV220-IL-4表达载体构建重组表达载体pBV220-IL-4-HDα。测序正确后将重组质粒转入大肠杆菌DH5α中进行温度诱导表达。经羟氨裂解去除IL-4后,对所得蛋白进行纯化、复性,以SDS-PAGE和生物学活性检测鉴定其特性。结果:经温度诱导后,融合蛋白主要以包涵体的形式表达,表达产物约占菌体总蛋白的20%;羟氨裂解切除IL-4后,所得目的蛋白的纯度约为99.8%。抑菌活性试验和克隆形成试验显示,所得HDα对细菌生长有明显的抑制作用。结论:成功地构建了HDα基因的重组表达质粒,获得稳定表达的工程菌,并建立了复性与纯化技术,为进一步对其进行功能研究与应用奠定了基础。     

中医治疗慢性肾盂肾炎70例疗效观察

目的：探讨中医方法治疗慢性肾盂肾炎的临床疗效。方法：将治疗组70例采用中医治疗与对照组72例采用西医治疗进行疗效比较观察。结果：治疗组治愈率为60.00%,总有效率为91.43%;对照组治愈率为34.72%,总有效率为68.06%;治疗组疗效明显优于对照组,经统计学处理差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：中医治疗慢性肾盂肾炎能有效改善患者的中医证候,提高临床疗效及患者的生活质量。     

医学研究生分子生物学实验教学的体会

分子生物学实验技术既是分子生物学的重要组成部分,也是学科藉以发展所不可或缺的工具。对于分子生物学实验课的教学,通过教学实践,对于实验课教学内容的安排、教学形式的选择以及追求怎样的教学效果等问题提出了思考与看法。     

生长因子及维甲酸对外胚间充质细胞中DLX1、DLX2基因的调控作用

目的：探讨EGF、FGF2、BMP2和维甲酸对外胚间充质细胞中DLX1、DLX2基因的调控作用。方法：采用斑点杂交方法，分析不同因子作用的外胚间充质细胞中DLX1、DLX2基因的表达水平。结果：FGF2及10^-6和10^-7维甲酸作用后的外胚间充质细胞中DLX1、DLX2基因的表达水平增加，而EGF作用后无明显变化。BMP2作用后的外胚间充质细胞DLX2基因的表达水平为对照组的2倍，但DLX1基因则无明显变化。结论：GFG2、BMP2及维甲酸可以调控外胚间充质细胞中DLX1、DLX2基因的表达，进一步参与细胞分化。     

改良消减杂交法克隆人乳腺癌MCF-7细胞凋亡相关基因

目的 克隆人乳腺癌MCF-7肿瘤细胞凋亡相关的基因,分析所克隆基因与凋亡的关系。方法 用全反式维甲酸诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡,建立肿瘤细胞凋亡模型;运用基于聚合酶链式反应（PCR）的改良消减杂交技术,克隆肿瘤细胞凋亡的相关基因。结果 在筛选出的5个特异表达的基因中,4个是已知基因,1个新基因,在4个已知基因中,3个与凋亡关系密切,其中hsp-90和rb-L3与凋亡的关系文献报道较少。结论 维甲酸所诱导的肿瘤细胞凋亡是一个多基因参与的过程,这种基于PCR的改良消减杂交技术为克隆新基因提供了一个新的方法和思路。     

Restin基因启动子的克隆及其在HeLa细胞中的转录活性

目的：扩增细胞静息因子（restin）基因启动子并构建该启动子的荧光报告系统,探讨其对全反式维甲酸（alltrans retinoic acid,ATRA）刺激的反应．方法：①对restin基因上游约2000bp基因组序列进行计算机生物信息学分析．②利用PCR技术扩增restin基因上游序列,将其克隆入pG5-luc中,插入荧光素酶报告基因上游,取代5个GAL-4结合位点及腺病毒启动子,构建Rp—luc质粒．③将构建的质粒转染入HeLa细胞,ATRA诱导检测该质粒中荧光素酶的表达．结果：酶切及测序结果均证实成功克隆了restin基因上游序列,已将该序列插入到荧光素酶基因的上游;ATRA诱导转入HeLa细胞中的真核表达载体Rp—luc,荧光素酶表达明显增加．结论：成功构建了含有restin基因启动子序列的荧光报告系统,为进一步研究restin基因功能及其转录调控奠定了基础．