少汗性外胚叶发育不全(HED)家系ED1基因的突变检测

目的：研究少汗性外胚叶发育不全引起先天缺牙的ED1基因突变。方法：对3个少汗性外胚叶发育不全核心家系进行外周血基因组DNA的提取。利用聚合酶链反应、DNA直接测序进行突变检测，进一步采用限制性内切酶酶切验证突变。结果：3个家系中的每位患者均存在ED1基因外显子不同位点的单碱基错义突变，分别为C412G、A1201G和C1375T，其中前两个突变位点是国内外首次报道的。结论：ED1基因的单碱基突变是引起此3个核心家系少汗性外胚叶发育不全的致病突变。     

短重复序列PCR产物变性胶电泳影子带新解——正负链电泳行为的差异

目的　探讨短重复序列 Ｐ Ｃ Ｒ 产物变性胶的电泳影子带形成机理，并设法消除影子带。方法采用 Ｐ Ｃ Ｒ和不对称 Ｐ Ｃ Ｒ，通过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳观察影子带产生的情况。结果　利用不对称 Ｐ Ｃ Ｒ，某些二核苷酸（ Ｃ Ａ）ｎ 重复序列的影子带减少一半，四核苷酸重复序列的影子带消除；正负链的电泳速度有差异。结论　正负链电泳行为的差异是影子带产生的原因之一，利用不对称 Ｐ Ｃ Ｒ 可部分或完全消除影子带。     

短重复序列PCR产物变性胶电泳影子带新解—正负链电泳行为

目的 探讨短重复序列ＰＣＲ产物变性胶的电泳影子带形成机理,并设法消除影子带。方法 采用ＰＣ手不对称ＰＣＲ,通过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳观察影子带产生的情况。结果 利用不对称ＰＣＲ,某些二核苷酸（ＣＡ）ｎ重复序列的影子带减少一半,四核苷酸重复序列的影子带消除;正负链的电泳速度有差异。结论 正负链电泳行为的差异是影子带产生的原因之一,利用不对乐ＰＣＲ可部分或完全消除影子带。     

网织红细胞中提取的VRIRQTIK序列

按Bishop方法给新西兰兔注射盐酸苯肼(2.5％)0.3ml/kg体重/d,连续6d致贫血,收集血液用生理盐水洗去白细胞后,得到的网织红细胞用冻融法使细胞裂解,用乙醇、氯信选择性变性除去血红蛋白,再于1OO℃加热变性2min,去除大部分杂蛋白,经Sephadex G-100凝胶过滤,再连续经HPLC反相柱,HPLC monoQ阳离子交换柱后,提到一活性蛋白质,分子量7～8kD,在SDS-PAGE电泳图中为单一蛋白条带。将此条带印迹在immobiton-P膜上,进行蛋白质的氨基酸序列分析,得到8个氨基酸的序列为VRIRQTIK(477A氨基酸测序仪,美国),经计算机检索分析,未发现同源序列。     

人趋化素样因子上游启动子区的单核苷酸多态性及其与哮喘的相关性

目的 寻找趋化素样因子(CKLF)基因上游启动子区的单核苷酸多态性(SNP),明确其与支气管哮喘发病的相关性.方法 提取245例北京地区汉族人(其中哮喘患者119例,健康对照126例)基因组DNA,采用PCR方法扩增CKLF上游启动子区1553碱基的DNA片段并进行直接测序,分析发现的SNPs的等位基因频率、基因型频率和单倍型分布频率及其与哮喘的发病和临床表现的相关性.结果 在CKLF上游启动子区共发现4个SNPs:SNP88(T>C)、SNPl96(T>C)、SNP568(C>G)、SNP1047(C>G).其等位基因频率分别为0.168(SNP88C)、0.168(SNP196C)、0.352(SNP568G)和0.167(SNP1047G),与以往报道的其他种族的结果明显不同.SNP88与SNP196之间、SNP88与SNP1047之间,以及SNP196与SNP1047之间存在完全连锁不平衡(D1=1.000,r2=1.000),SNP568与SNP88、SNP196及SNP1047问存在连锁不平衡(r2=0.366).哮喘组与对照组4个SNPs的等位基因频率、基冈型频率和单倍型频率差异无显著性.结论 北京地区汉族人群CKLF编码基因上游调控区的基因多态性有其独特的分布特点及连锁不平衡特征,虽然与哮喘的发病无明显相关性,但其分布特点可能为其他疾病相关性研究提供有价值的资料.