云南省蚊媒病毒分离物的初步鉴定

本研究对前期从云南蚊虫获得的病毒分离物作进一步鉴定,以明确其分类地位。采用甲病毒通用引物进行RT－PCR检测,在5株病毒分离物扩增出目的基因片段。新分离株4株来自三带喙库蚊,1株来自中华按蚊。它们可使白蚊伊蚊细胞（C6／36）、猴肾细胞（Vero）及金黄地鼠肾细胞（BHK－21）发生规律性细胞病变。核苷酸序列分析显示5株病毒与盖塔病毒（ Getah virus, GETV）同源性最高,与GETV中国云南YN0540株、河北株 HB0234、海南株 M1及南韩株、 LEIV MPR 株、鹭山病毒的同源性为96．4％～99．2％,5株病毒之间的同源性为98．4％～100％。系统进化分析结果显示,新分离株与上述GETV处于同一进化分支。以上结果证实5株病毒分离物为盖塔病毒。     

三种蜱媒传染病在媒介蜱和鼠类中复合感染的研究

目的 了解中国部分地区埃立克体病和其他蜱媒传染病病原体的复合感染情况。方法 运用聚合酶链反应方法对内蒙古自治区、黑龙江省、北京市的蜱和鼠类标本粒细胞埃立克体、莱姆病螺旋体、斑点热群立克次体的感染进行检测，对福建省的蜱和鼠脾脏标本中查菲埃立克体、斑点热立克次体及莱姆病螺旋体的感染情况进行检测。结果 内蒙古采集的全沟硬蜱408只，人粒细胞埃立克体感染率68％，莱姆病螺旋体感染率7．8％，斑点热群立克次体感染率45．6％，其中粒细胞埃立克体与莱姆病螺旋体复合感染标本5份(5／408)，粒细胞埃立克体与斑点热群立克次体复合感染标本1份(1／408)。黑龙江采集的46只全沟硬蜱中人粒细胞埃立克体感染率6．5％，莱姆病螺旋体感染率10．8％，斑点热群立克次体感染率34．8％，其中粒细胞埃立克体与莱姆病螺旋体复合感染标本1份(1／46)。北京市采集的蜱类标本922只，有2只检测到莱姆病螺旋体的DNA片段。福建省宁化地区采集的优势蜱种越原血蜱283组(659只)中，查菲埃立克体最小阳性率为3．8％(25组阳性)，38份野鼠脾脏的阳性率为564％(21只阳性)，检测出有2只(2／659)蜱同时感染了粒细胞埃立克体和斑点热群立克次体，野鼠的脾脏标本中，也发现有一只同时感染了查菲埃立克体和斑点热立克次体。结论 人粒细胞埃立克体和莱姆病螺旋体复合感染以及查菲埃立克体和斑点热群立克次体复合感染可能在特定地区发生；其地区的蜱类、鼠类存在着极低的复合感染。     

东北部分地区蜱传埃立克体DNA的检测

目的 了解东北部分地区一些蜱种中是否携带埃立克体。方法 应用16SrRNA基因构建的特异性引物进行半套式PCR,检测蜱标本中埃立克体DNA,并对扩增产物进行克隆和序列测定,与基因库中已知序列进行同源性比较。结果从辽宁清原和吉林抚松、和龙、敦化、珲春的全沟硬蜱(Lpersuleatus)和森林革蜱(D．silvarum)中均扩增出了查菲埃立克体DNA,扩增片段与美国分离株(基因库M73222)相对应片段完全一致,同源性为100％;另外从吉林抚松、珲春的全沟硬蜱中扩增出了粒细胞埃立克体DNA,扩增片段与美国分离株(基因库U02521)相对应片段相差2个碱基,同源性为99.7％。结论 发现东北部分地区存在埃立克体病的病原学迹象,提示该地区可能存在埃立克体病的自然疫源地。     

北京林区蜱类及鼠类调查

目的：2000年4－10月对北京部分林分进行了设点调查，了解不同调查点蜱和鼠的组成，密度，优势种，季节消长。方法：用布旗法采集游离蜱，用夹日法捕获野鼠。结果：采集游离蜱1608只，分属长角血蜱，嗜群血蜱，森林革蜱；从野鼠体表检获寄生蜱14只，其中8只全沟硬蜱，6只血红扇头蜱。长角血蜱为优势蜱种，占捕蜱数的77．3％。除怀柔青龙峡外，各调查点均以长角血蜱为优势种，占捕获蜱数的70％以上。怀柔汤河口蜱于4－9月活动，在5月下旬出现高峰，7月上旬出现次高峰；房山区十渡蜱于4月下旬至10月活动，分别在6月下旬和7月下旬出现高峰和次高峰。夹日法捕获8种野鼠共87只，捕鼠率为2．42％（87／3 600），社鼠占的比例最高，为46％。结论：不同调查点蜱和鼠的组成，密度，季节变化不同，这可能与调查点的生境有关。本次调查共发现5种硬蜱和8种野鼠，它们可能在某些蜱传疾病的形成，维持和传播中起着重要作用。     

内蒙古大兴安岭林区人埃立克体病自然疫源地的调查

目的人粒细胞埃立克体病和人单核细胞埃立克体病都是近10年来发现的2种经蜱传播的自然疫源性疾病。这2种病的公共卫生学意义已受到了许多国家的关注。由于病原体是专性细胞内寄生菌,直接培养和纯化较为困难。我们根据这2种埃立克体的16S rRNA基因序列,构建了一系列PCR引物对,对采自我国大兴安岭等北方地区的蜱、动物脏器和人血标本进行PCR扩增,并对扩增出的产物进行DNA序列分析,以期查清有可疑蜱媒地区是否存在埃立克体感染,并通过这次调查为今后进一步开展系统研究提供参考。方法与结果本研究采用半巢式PCR检测蜱标本2种埃立克体的带菌率。结果首次从内蒙古大兴安岭采集的全沟硬蜱和森林革蜱,新疆精河采集的全沟硬蜱和草原革蜱中扩增出390bp的特异和人单核细胞埃立克体16S rRNA基因片段;同时检测的大兴安岭的嗜群血蜱和北京灵山采集的长角血蜱均未扩增出相应的片段。大兴安岭莫尔道嘎林业局采集的全沟硬蜱携带此基因的阳性率为39.06％(25/64),森林革蜱为 10.00％(7/70),2种蜱的带菌率有显著差异(x~2=15.53,P<0.01)。新疆精河采集的蜱携带EC率也是全沟硬蜱(11组/190,最小阳性率为5.79％)高于森林革蜱(1组/60,最小阳性率为1.67％),但差别不显著(x~2=1.30,P>0.25)。还从大兴安岭林区捕捉的一只大林姬鼠的脏器中检测到这一16S rRNA基因片段。对一只从莫尔道嘎采集的全沟硬蜱蜱标本进行近1500bp的人单核细胞埃立克体 16S rRNA全基因扩增与序列分析,结果扩增出的序列与美国一株人单核细胞埃立克体(GenBank注册号U23503)的相应序列完全相同。同样应用半巢式PCR和序列分析技术,从蜱标本中扩增出441bp的特异的人粒细胞埃立克体16SrRNA基因片段。内蒙古大兴安岭莫尔道嘎采集的全沟硬蜱和森林革蜱人粒细胞埃立克体的阳性率分别是 6.25%(4/64)和 2.86%(2/70);内蒙古大兴安岭乌尔旗汗采集的全沟硬蜱和嗜群血蜱的阳性率分别为3.81％(最小阳性率,8组/210)和2%(1/50);新疆精河采集的全沟硬蜱和草原革蜱最小阳性率分别为3.16％(6组/190)和1.67%(1组/60)。这是首次在亚洲从蜱标本中检测到人粒细胞埃立克体。同时检测的北京灵山采集的长角血蜱未扩增出相应的片段。对一只从莫尔道嘎采集的全沟硬蜱标本进行近1500bp的人粒细胞埃立克体 16S rRNA全基因分析,结果扩增出的序列与美国一株人粒细胞埃立克体(GenBank注册号U02125)的相应序列完全相同,一个碱基不差。另外还从内蒙古大兴安岭采集的森林工人血标本中扩增出特异的EC和人粒细胞埃立克体16SrRNA基因片段。这是首次在亚洲从人血中扩增出人埃立克体DNA。对一份人血标本进行近1500bp的人粒细胞埃立克体 16S rRNA全基因分析,结果仅在第81位与美国这株人粒细胞埃立克体差一个碱基,相差的位置正好位于高变区。结论根据检测结果,本研究建立的系列半巢式PCR扩增方法可以快速、灵敏地检测蜱、脏器、血等标本中的EC和人粒细胞埃立克体,并能较快地分析出其16S rRNA全基因。据报道,莱姆病的流行区往往也是人埃立克体病的流行区。为此我们在大兴安岭林区进行了人埃立克体病和莱姆病的流行病学调查。血样检测发现了人粒细胞埃立克体和 EC 16S rRNA基因阳性的病例共6名,病例均有近期蜱咬史,有埃立克体病的临床表现,潜伏期也相符;血清抗体检测发现检测人群中有HGE阳性抗体。2种病例的发现均为亚洲之首次。通过莱姆病螺旋体感染流行因素的单因素和多因素Logistic回归分析,发现在调查的流行因素中,职业和蜱咬史是影响该疫区人群感染莱姆病螺旋体的主要危险因素。这一调查结果也为该地区人埃立克体病和其他蜱传病的防治提供了参考。     

我国北方部分地区土拉弗菌感染宿主动物的分子流行病学研究

目的：了解我国北方部分地区宿主动物感染土拉弗菌状况和基因型别.方法：鼠夹诱捕鼠,从鼠脾组织提取DNA,应用巢式PCR检测土拉弗菌,计算并比较各地区及各鼠种阳性率.阳性标本用型特异性引物及短串联重复序列（SSTR9、SSTR16）引物扩增两区域并测序,用ClustalX（5.0）和DNA Club软件对序列进行比较分析.结果：共捕获鼠421只,分属14种鼠种,其中7个鼠种20份标本PCR检测阳性,总阳性率为4.75%.吉林、新疆、黑龙江、内蒙古和浙江的阳性率分别为11.65%,10.00%,6.54%,1.76%和0%.地区间阳性率差异显著（χ^2 = 20.90,P = 0.0003）;不同鼠种间阳性率未见差异（χ^2 =11.82,P = 0.066）.对20份扩增阳性标本进行型特异性扩增及SSTR9、SSTR16序列测定并对比分析,结果显示均为土拉弗菌B亚型,但型内差别较大,标本及菌株相互比较均显示基因多态性程度高且地区间有交叉.结论：我国北方部分地区可能依然存在B亚型土拉弗菌型感染（宿主动物）情况,且其基因型内差异较大.     

103例SARS患者的临床特点及IgG血清抗体变化规律

目前SARS的流行特点和规律还不明确,传播途径和致病机理也不十分清楚。为了更好地诊治和预防SARS,我们对某医院爆发的病例进行了个案和血清流行病学调查。     

SARS患者粪便、痰标本病毒RNA阳性检出率与病程变化的关系

目的 探讨严重急性呼吸综合征(SARS)患者粪便、痰标本中病毒RNA阳性检出率与病程变化的关系。方法 采取一步法逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)对不同病程的临床标本进行SARS冠状病毒(SARS-associated coronavirus,SARS-CoV)RNA的扩增和序列测定,并采用趋势X~2检验探讨标本阳性检出率与不同发病时间的关系。结果 被检样品中扩增出的特异性片段,经测序验证为SARS-CoV序列(同源性100％)。在检测的临床标本中,粪便标本阳性检出率最高(21.55％)。趋势X~2检验显示SARS患者粪便和痰标本中病毒阳性检出率均随着发病时间的增长而下降,X~2=12 55和16.408,P=0.0004和P=0.000 05。结论 一步法RT-PCR可以有效检测SARS患者临床标本存在的SARS-CoV;SARS患者粪便、痰标本RT-PCR阳性率随着发病时间的增长而下降。     

mxA基因多态性与SARS病毒易感性的病例对照研究

目的探讨黏病毒抗性蛋白1（MxA）基因多态性与人群严重急性呼吸综合征（SARS）发病间的关系。方法采用病例对照研究，用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析检测mxA基因启动子-88位G／T多态性位点，对SARS传播的相关因素进行问卷调查，并用SPSS软件进行单因素和多因素分析。结果选取了66例SARS病例和64名对照进行研究。与GG基因型相比，含等位基因T的基因型（GT＋TT）在病例中的构成比（81．3％）显著高于对照组（62．5％），0R值（95％CJ）为2．700（1．208～6．037）。多因素logistic回归分析结果表明，在调整了与SARS病例接触时戴口罩，穿防护服，戴眼罩等相关因素后，与GG基因型相比，含等位基因T的基因型（GT＋TT）仍与SARS发病有显著性关联，调整OR值（95％CI）为2．911（1．027～8．250）。结论mxA基因启动子-88位G／T多态性可能与中国汉族人群SARS发病的基因易感性有关。     

产吲哚金黄杆菌耐药性和耐药基因研究

目的本研究拟了解临床分离产吲哚金黄杆菌的耐药特性,检测其耐药基因分析耐药机制,为临床合理使用抗菌药物提供科学依据。方法收集四川省人民医院2013年10月至2015年2月临床分离的产吲哚金黄杆菌菌株,分析其耐药谱。利用聚合酶链反应(PCR)技术筛查其耐药基因,扩增阳性产物进行序列测定然后将其结果与GenBank数据库进行比对分析以确定其基因型。结果共收集到6株产吲哚金黄杆菌,6株菌株对青霉素类、头孢菌素类、碳青霉烯类等抗菌药物表现为耐药。耐药基因检测结果:5株细菌携带IND-2、IND-LIKE、CIA耐药基因;未检测到携带IND-1、IND-3、IND-4耐药基因的细菌。结论该院临床分离的产吲哚金黄杆菌表现为多重耐药,其耐药基因型以IND-2和CIA为常见。