硒酸酯多糖增强荷瘤小鼠免疫功能和自身肿瘤杀伤活性的作用

本文研究了硒酸酯多糖(KSC)对荷S180肉瘤小鼠NK细胞活性、LAK细胞活性、IL-2分泌能力和自身肿瘤杀伤活性(ATK)的影响及抑癌效应.结果表明,KSC(40mg/kg·d×9d,ig)能增强荷瘤鼠NK细胞和LAK细胞活性,促进脾细胞产生IL-2,增强ATK活性;加强环磷酰胺(Cy,20mg/kg·d×9d,ip)的抑瘤作用,并能拮抗Cy对免疫活性细胞的抑制效应.体外用rIL-2激活荷瘤鼠脾淋巴细胞可诱生或增强ATK活性.本研究结果提示,KSC上调肿瘤宿主NK细胞和LAK细胞活性及IL-2的分泌水平,增强ATK活性,可作为生物反应调节剂(BRM)应用于肿瘤生物治疗.     

干扰素和环孢霉素A 协同逆转K562/ ADM细胞对阿霉素的耐药性

  目的 观察干扰素(α-Interleron，α-IFN)和环孢霉素A(Cyclosporine A,CsA)对白血病K562/ADM细胞耐药性的协同逆转效应。方法 以多药耐药基因／P-糖蛋白(Muhidrug resistance gene／P-glycoprotein，mdrl／P-gp)超表达的K562／ADM细胞为靶细胞，MTT比色法检测药物的细胞毒效应；流式细胞仪检测细胞P-糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)表达水平；激光共聚焦显微镜观察细胞内阿霉素含量变化。结果 K562／ADM细胞对阿霉素呈高度耐药性，并与柔红霉素和鬼臼乙叉甙交叉耐药，但与CsA无交叉耐药。CsA和α-IFN单独或联合应用均对K562／ADM细胞的耐药性有较强的抑制效应。流式细胞仪和激光共聚焦显微镜分析发现α-IFN和CsA单独或联合均不能下调细胞mdrl/P-gp的表达，反而应激性地刺激耐药细胞P-gp的合成增加，但可抑制P-gp的功能、增加K562／ADM细胞内阿霉素的积聚。结论 α-IFN和CsA联合可协同逆转耐药白血病细胞的耐药性，其作用机制为抑制P-gp的功能而非下调mdrl／P-gp的表达水平。     

靶向siRNA沉默mdr1基因表达及对白血病耐药细胞系K562/ADM的耐药逆转作用

目的 研究小干扰RNA（siRNA）对白血病多药耐药细胞系K562／ADM细胞mdr1基因表达的沉默作用和凋亡抑制的逆转效应。方法 K562／ADM为靶细胞，设计、筛选和合成2对针对mdr1基因mRNA的siRNA（mdr1 siRNA-1和mdr1siRNA-2），用脂质体介导转染K562／ADM细胞；实时荧光定量PCR（real—time PCR）法检测mdr1 mRNA的表达；流式细胞术测定P-糖蛋白（P—gP）水平和caspase-3活性；细胞形态学和FITC标记的膜联蛋白V／碘化丙锭（Annexin V—FITC／PI）双染色法检测细胞的凋亡。结果 筛选出的mdr1 siRNA-1和mdr1 siRNA-2显著抑制K562／ADM细胞mdr1的表达，mdr1 mRNA的表达分别降低91．2％和82．0％，P-gp水平下降74．1％和84．4％；增强caspase-3活性，活化caspase-3增加约40％；K562／ADM耐药细胞对阿霉素诱导凋亡的敏感性增强，Annexin V—FITC／PI染色检测细胞凋亡率提高约60％。结论 siRNA通过沉默mdr1 ／P—gp表达而逆转K562／ADM多药耐药细胞的凋亡抑制现象。     

血小板生成素从CD34^＋细胞体外扩增巨核祖细胞

目的 探讨血小板生成素(Tpo)对CD34^ 细胞增殖分化巨核细胞，体外扩增巨核祖细胞集落形成的影响。方法 采用Dynal M—45CD34免疫磁珠分离纯化再障(AA)骨髓CD34^ 细胞，应用Tpo、IL—3、IL—6等不同组合的扩增效应。结果 Tpo具有明显的体外扩增作用，含Tpo组其扩增CFU—MK的能力明显强于不含Tpo组。IL—3、IL—6单独作用时，对巨核祖细胞有不同程度的生长刺激。但该作用均低于Tpo组，其中Tpo 20ng/ml为CFU—MK培养的最佳浓度。结论 Tpo具有促使干细胞进入增殖周期的作用，对造血细胞同样具有协同扩增作用。     

内皮抑素联合血管抑素诱导白血病细胞凋亡

目的　探讨重组人内皮抑制素因子 (rhES)联合人血管抑制素因子 (hAS)诱导白血病细胞凋亡的作用。方法　采用克隆 pCX的表达产物和用亲和层析及胰蛋白酶消化进行重组人内皮抑制素(rhES)和人血管抑制素 (hAS)的制备和纯化 ;以原代白血病细胞为靶细胞 ,应用MTT法、DNA琼脂糖电泳、流式细胞术检测白血病细胞凋亡。结果　内皮抑制素和血管抑制素联合对白血病细胞的生长、增殖有抑制作用 ,同时对白血病细胞具有诱导细胞凋亡作用 ,与单独相比有差异 (P <0 .0 1 )。结论　联合应用两种血管形成抑制因子对白血病细胞具有阻止细胞生长、增殖和诱导细胞凋亡的协同作用     

氯霉素刺激粒系祖细胞生成

本文观察了低浓度氯霉素对人GM-CFU生成作用的初步探讨。结果提示,10~(-8)Mol/L浓度氯霉素有促进GM-CFU生成的作用,与对照组比较,差异非常显著(P<0.001～0.025)。本实验还发现,低浓度氯霉素对人骨髓GM-CFU的生成有选择性,从而结论,低浓度霉氯素可作为一种“再障探剂”进行研究。     

白血病细胞获得性耐药的干预对策研究

白血病耐药性是自血病治疗中的难点,也是目前白血病治疗研究领域的热点之一。本研究项目以人白血病多药耐药细胞K562/ADM细胞为模型,通过系列系统研究工作,提出和建立了白血病细胞获得性耐药的逆转、分化诱导、促凋亡和预防的综合干预策略,取得了如下主要成果。 1.白血病细胞耐药的诱导分化策略白血病细胞发生耐药后其生物学特性发生了许多变化,本研究对耐药白血病细胞尝试性进行了分化诱导研究,证     

T-AK细胞和IL-2脂质体联合硒酸酯多糖抗白血病效应的研究

目的研究抗ＣＤ３单克隆抗体与ＩＬ－２共同诱导的Ｔ－ＡＫ细胞和ＩＬ－２脂质体（Ｌ－ＩＬ－２）联合硒酸酯多糖（ＫＳＣ）对Ｌ１２１０小鼠白血病的治疗作用。方法用ＤＢＡ／２小鼠建立Ｌ１２１０白血病模型，正常小鼠脾细胞诱生制备Ｔ－ＡＫ细胞，按设计方案转输Ｔ－ＡＫ细胞和ＩＬ－２脂质体，ＫＳＣ灌胃，检测ＮＫ细胞活性、脾淋巴细胞增殖活性和ＩＬ－２诱生水平，观察荷瘤小鼠生存期。结果Ｌ１２１０白血病小鼠的免疫功能急剧降低，生存期为１６．４３±１．９２天；转输Ｔ－ＡＫ细胞（５×１０６）和Ｌ－ＩＬ－２（１０４Ｕ／ｋｇ）能部分逆转白血病小鼠低下的细胞免疫功能，生存期延长（２４．７８±３．９４天），并有１４．３％小鼠长期存活；ＫＳＣ（４０ｍｇ／ｋｇ）对Ｔ－ＡＫ／Ｌ－ＩＬ－２的抗白血病作用有明显的增强效应，荷瘤小鼠细胞免疫功能进一步增强，生命延长率、长期存活率分别提高３６％和９９．９％。结论硒酸酯多糖具有生物反应调节剂（ＢＲＭ）样作用；以应用Ｔ－ＡＫ细胞和ＩＬ－２脂质体为主体，硒酸酯多糖为辅佐的生物治疗方案对白血病小鼠具有显著的免疫抑瘤作用