长链非编码RNA与缺氧缺血脑损伤

长链非编码RNA是一类长度超过200nt、不编码蛋白质的结构复杂的转录本,长链非编码RNA可与DNA、mRNA及蛋白质相互作用,通过多种机制调控基因表达,进而参与调控多种生物过程。研究表明,长链非编码RNA在神经系统发育和疾病发生中具有重要作用。该文就长链非编码RNA在缺氧缺血脑损伤中的作用作一综述。     

端粒酶重建皮肤成纤维细胞迁移研究

目的 探讨端粒酶重建皮肤成纤维细胞生物学行为的改变,尤其是细胞迁移能力的变化及相关机制.方法 小儿包皮成纤维细胞分离培养,Lipofectamine介导将人端粒酶反转录酶(hTERT)真核表达质粒pGRN145转染培养的成纤维细胞,经潮霉素B筛选得到阳性克隆,扩增培养阳性克隆获取稳定表达hTERT的端粒酶重建成纤维细胞.TRAPEZE Telomerase Detection Kit检测细胞端粒酶活性.免疫组织化学染色法检测细胞波形蛋白和胶原表达以鉴定细胞类型.Boyden小室实验检测细胞迁移能力.RT-PCR和Western blot方法 检测迁移相关分子趋化因子受体CXCR4的表达.结果 pGRN145导入使细胞端粒酶得以重建,细胞寿命延长到160代以上,并稳定表达Ⅰ型胶原和波形蛋白.同时,在CXCL12刺激下,端粒酶重建皮肤成纤维细胞迁移能力明显增强.CXCR4 在RNA水平和蛋白水平均表达增高.结论 端粒酶重建皮肤成纤维细胞CXCR4表达上调,导致细胞迁移能力增强,可望在细胞治疗中更好的发挥作用.     

缺氧缺血新生大鼠神经元自噬基因表达节律及调控机制

目的通过新生大鼠缺氧缺血脑损伤后神经元自噬基因和节律基因的表达,探讨缺氧缺血引起神经损伤的新机制。方法将12只Sprague-Dawley大鼠随机分为缺氧缺血组和假手术组,每组6只。采用结扎并切断大鼠右侧颈总动脉并给予低氧处理的方法建立体内缺氧缺血脑损伤模型。Western blot检测两组大鼠大脑皮层和海马组织节律蛋白Clock表达情况。体外培养大鼠神经元细胞,随机分为氧糖剥夺(OGD)组和对照组,OGD组加入无糖无血清DMEM培养基模拟细胞缺血状态,并给予低氧处理建立体外缺氧缺血脑损伤模型。采用Western blot检测两组不同时间点自噬相关蛋白Beclin1和LC3,以及节律基因Clock蛋白表达情况。应用si RNA技术抑制神经元Clock蛋白表达后,检测Beclin1和LC3的表达变化。结果体外培养神经元Beclin1和LC3Ⅱ的表达呈现节律性波动;OGD处理后,体外培养神经元Beclin1和LC3Ⅱ的表达随着时间的延长逐渐升高,不再呈现节律性波动;与假手术组相比,缺氧缺血引起大鼠皮层和海马组织Clock表达降低(P0.05);体外培养神经元经OGD处理后,Clock表达也较对照组显著降低(P0.05);与阴性对照组相比,抑制神经元节律基因Clock表达后,自噬相关蛋白Beclin1和LC3Ⅱ的表达均显著下降(P0.05)。结论缺氧缺血引起神经元Beclin1和LC3Ⅱ表达节律紊乱,其机制可能与Clock参与调控Beclin1和LC3Ⅱ的表达有关。     

dn HIF-1α对宫颈癌细胞生物学行为的影响

目的 研究抑制性缺氧诱导因子-1α(dn HIF-1α)对人宫颈癌SiHa细胞生物学行为的影响,探讨HIF-1α在SiHa细胞的血管生成、缺氧保护、凋亡、增殖过程中的作用.方法 将表达dn HIF-1α的重组质粒pcDNA3.1-dn HIF-1α转染入SiHa细胞,采用免疫细胞化学法和Western Blotting检测dn HIF-1α转染SiHa细胞后其HIF-1α与血管内皮生长因子(VEGF)表达水平的变化;CoCl2化学缺氧法处理细胞,MTT法测定细胞增殖情况,原位缺口末端标记法检测细胞凋亡情况.同时与pcDNA3.1组和未转染组进行比较.结果 重组质粒pcDNA3.1-dn HIF-1α转染SiHa细胞后,其HIF-1α蛋白表达水平与其它两组相比差异无统计学意义,而VEGF蛋白表达水平有较明显的降低(P<0.05).转染dn HIF-1α的细胞,常氧培养和CoCl2诱导的化学缺氧条件下其增殖能力均低于其他两组(P<0.05),CoCl2处理后细胞凋亡增加,与其他两组相比,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 dn HIF-1α抑制SiHa细胞的增殖并促进CoCl2化学缺氧引起的细胞凋亡,同时能降低VEGF蛋白的表达.提示dn HIF-1α可望在宫颈癌治疗中发挥作用.     

Aurora A表达对人前列腺癌细胞生物学行为的影响

目的 研究Aurora A表达增高对人前列腺癌细胞LNCaP生物学行为的影响,以了解其在人前列腺癌发生发展中的作用.方法 克隆Aurora A全长基因,将其转染入LNCaP细胞中表达,采用四唑盐(MTT)法细胞增殖实验检测Aurora A表达升高的阳性细胞生长情况,采用改良的Transwell侵袭小室方法检测细胞侵袭能力;同时与转染空质粒(pcDNA3.1)细胞和未转染细胞进行比较.结果 成功构建重组质粒pcDNA3.1-Full Length Aurora A.Aurora A高表达的LNCaP细胞增殖速度较空质粒转染细胞和未转染细胞快,培养3 d后LNCaP-Aurora A组细胞较pcDNA3.1质粒转染细胞及未转染的LNCaP细胞增多,差异有统计学意义(P＜0.05).在体外细胞移动实验中,LNCaP-Aurora A组细胞也较另两组细胞表现出更强的穿膜能力(P＜0.01).结论 Aurora A表达增高与人前列腺癌细胞的恶性表型具有密切相关性,Aurora A在人前列腺癌发生发展中可能发挥重要作用.     

缺氧诱导因子-1α：很有潜力的肿瘤治疗靶点

缺氧诱导因子-1α（hypoxia—induciblefactor-1α,HIF-1α）是在缺氧条件下广泛存在于人类和哺乳动物细胞内的一种核转录因子．对维持体内氧稳态起重要的调节作用。缺氧是实体肿瘤内部的常见现象,缺氧应激引起HIF-1α的聚集、活化,活化的HIF-1α通过与相应的靶基因序列结合调控多种缺氧反应基因的表达．以维持肿瘤细胞的自身氧稳态及能量代谢平衡,在肿瘤的发生发展中起着极为重要的作用。目前,对HIF-1α的研究已经成为肿瘤学研究中一个令人关注的领域．相关研究成果进一步加深了科学工作者对HIF-1α在肿瘤生物学进程中的作用及其信号通路调控的认识,为寻求肿瘤治疗的新靶点提供了重要科学依据和新思路。     

601家个体诊所执业现状分析及管理对策

通过对 6 0 1家个体诊所执业现状、医务人员的执业情况进行分析 ,找出个体诊所执业存在的主要问题和成因 ,提出新形势下的管理对策建议。     

儿童孤独症的发病因素研究

孤独症(autism)或称自闭症，属于广泛性发育障碍的一个亚型，是常见的儿童精神障碍之一。现代医学认为它属于一种脑功能障碍，涉及脑的较多部分，这种障碍的严重性表现为影响患儿的日常行为，阻滞正常发育，可以说影响儿童与世界联系的每一个方面。儿童孤独症的病因至今未明，可能是生物学因素与环境非生物学因素相互作用的结果。至今为止没有特效药物治疗，临床上治疗困难且颇有争议。许多父母一般不会发现，更不会接受孩子有病的事实，造成很多孩子未能及早发现，从而错过了最佳治疗时机。由于自闭症为患儿及其家庭带来沉重的负担，社会影响较大，越来越受到广泛关注。本文主要就儿童孤独症的病因加以综述。     

HIF-1α对人宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察缺氧诱导因子1α(HIF-1α)在缺氧条件下对宫颈癌SiHa细胞的增殖、生长和凋亡的影响,探讨HIF-1α在宫颈癌的发展过程中所起的作用.方法 将表达全长HIF-1α的重组质粒pcDNA3.1-full lengthHIF-1α和空质粒pcDNA3.1转染人SiHa细胞中,分别命名为fL HIF-1α组和pcDNA3.1组,未转染细胞组命名为未转染组.应用Western Blotting和免疫细胞化学法对细胞内的HIF-1α和VEGF表达量进行检测.应用MTT方法检测不同浓度的CoCl2处理后细胞的增殖情况;采用原位缺口末端标记(TUNEL)法检测细胞的凋亡情况.结果 免疫细胞化学和Western Blotting结果显示重组质粒pcDNA3.1-full length HIF-1α转染成功,转染细胞内HIF-1α及VEGF表达较未转染细胞和质粒pcDNA3.1转染细胞增高(P<0.05),显示在正常或缺氧条件下.fLHIF-1α组细胞的增殖能力均高于pc DNA3.1组和未转染组(P<0.05),凋亡率小于pcDNA3.1组和未转染组,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 HIF-1α在CoCl2诱导的缺氧条件下可以抑制SiHa细胞的凋亡,减少缺氧对细胞的损伤以及促进细胞的增殖,提示HIF-1α在官颈癌的发生发展中可能起着重要作用.     

组蛋白乙酰化调控对新生大鼠大脑皮层损伤的保护作用

目的研究组蛋白乙酰化调控对新生大鼠缺氧缺血大脑皮层损伤的保护作用。方法将90只3日龄新生大鼠分为假手术组、缺氧缺血模型组以及组蛋白去乙酰化酶抑制剂丁酸钠组。模型组及丁酸钠组大鼠腹腔注射LPS(0.05 mg/kg)2 h后行右侧颈总动脉结扎并置于低氧舱中(6.5%氧浓度)90 min;假手术组腹腔注射生理盐水后仅分离暴露右侧颈总动脉,但不予结扎和低氧处理;丁酸钠组在建模后立即腹腔注射丁酸钠(300 mg/kg),每天1次,共治疗7 d,假手术组及模型组注射等体积生理盐水。模型建立后第7天,采用Western blot方法检测各组大脑皮层组蛋白H3(HH3),乙酰化组蛋白H3(AH3),B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化型半胱天冬酶-3(CC3),以及脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白表达;采用免疫荧光法检测皮层细胞增殖指标Brd U表达。结果丁酸钠组HH3/AH3比值显著低于模型组(P0.05),提示丁酸钠组HH3乙酰化程度增加;丁酸钠组凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax比值较模型组显著增高(P0.05),CC3表达显著减少(P0.05),BDNF表达显著增加(P0.05);丁酸钠组较模型组皮层Brd U阳性细胞数显著增加(P0.05),主要表达在神经元。结论组蛋白乙酰化水平增加可通过减少细胞凋亡及促进神经元再生保护新生大鼠大脑皮层损伤,其机制可能与BDNF表达增加相关。