垂体催乳素瘤的病因及发病的细胞和分子生物学机制的实验研究

垂体催乳素瘤(prolactinoma,以下简称PRL瘤)是一种常见的内分泌疾病,也是常见的颅内肿瘤,对人类的身体健康危害极大,尤其是青壮年.因此,20世纪80年代末,中国医学科学院设立重大研究课题基金资助垂体腺瘤的研究,从此我们开始垂体催乳素瘤(PRL瘤)病因及发病的细胞和分子生物学机制的实验研究.历经10多年的系统探讨,获得了许多重要进展,择要归纳如下.     

高脂血症家兔体内不同部位巨噬细胞载脂蛋白E mRNA表达的研究

高脂血症家兔体内不同部位巨噬细胞载脂蛋白ＥｍＲＮＡ表达的研究王宗立，许漫，段宏伟，张颖，赵三妹，夏人仪，佘铭鹏（中国医学科学院基础医学研究所病理研究室，北京１００００５）高脂血症时除单核细胞进入动脉内膜吞噬脂质外，全身各部位的巨噬细胞均可发生脂质沉积...     

表达反义单核细胞趋化蛋白-1的重组逆转录病毒对家兔动脉平滑肌单核细胞趋化蛋白-1基因表达的影响

为研究反义单核细胞趋化蛋白－１ 转基因表达对单核细胞进入动脉壁的作用,首先构建了表达反义单核细胞趋化蛋白－ １ 基因的逆转录病毒重组体,并观察它在培养的细胞中的表达。将家兔单核细胞趋化蛋白－ １ ｃＤＮＡ 反向插入到ｐＬＮＣＸ,构成ＬＮＣＸ－ａｎｔｉ－ ＭＣＰ－１ 重组病毒质粒。再将重组质粒转染φ－２ 细胞,继以φ－ ２ 细胞产生的病毒上清感染ＰＡ３１７细胞,取得Ｇ４１８ＰＡ３１７ 抗细胞克隆。上述细胞经扩增培养,收集病毒上清并感染ＮＩＨ３Ｔ３ 细胞后进行检测。结果发现,病毒的滴度为５．６×１０７ ＣＦＵＬ,感染的ＮＩＨ３Ｔ３ 细胞中有重组病毒的整合。重组病毒感染培养的家兔动脉平滑肌细胞后,用聚合酶链反应检测发现,感染的平滑肌细胞基因组ＤＮＡ中有重组病毒整合;ＲＮＡｓｌｏｔ 杂交结果显示,感染的平滑肌细胞中有反义单核细胞趋化蛋白－１ 的表达,与未感染的平滑肌细胞相比,感染的平滑肌细胞中单核细胞趋化蛋白－ １ ｍＲＮＡ 的表达明显受到抑制。结果提示,反义单核细胞趋化蛋白－ １ 逆转录病毒表达载体在培养的动脉平滑肌中能表达反义基因并抑制靶基因的表达,为进一步开展体内实验研究奠定了基础     

α脂蛋白对防止树鼩实验性动脉粥样硬化斑块形成作用的探讨

国内外对动脉粥样硬化斑块形成和血脂关系的研究日趋深入。已知影响斑块形成的因素很多,但其中低密度脂蛋白和斑块形成的关系尤为密切。根据过去调查26一116只恒河猴皿脂、动脉壁脂质、结缔组织(醛酸和释脯氨酸)和自发性粥样斑块的关系以及对47只恒河猴观察     

树鼩血清脂蛋白的分离、提纯和鉴定

近年来的流行病学调查和实验室生物学研究结果均表明,血清高密度脂蛋白(HDL)似乎能防止动脉粥样硬化斑块的形成,又能促使斑块的消退。树鼩是一种低级灵长类动物。发现其血清中高密度脂蛋白含量高达血清脂蛋白总量的70％左右。还证实,经高胆固醇—高蛋白饲料较长时间喂养,HDL含量维持不变,LDL也无增加趋势。并发现在动物的胆囊和胆管中有大小不一的胆石颗粒。树鼩有特殊的能力来处理食入的胆固醇,因此认为它是一种理想的模型动物,可用来研究HDL代谢及其在预防动脉粥样斑块形成中的作用。为此,有必要首先分离,提纯三种脂蛋白。     

高密度脂蛋白及载脂蛋白A_1防止实验性动脉粥样硬化斑块形成

根据临床流行病学调查和实验研究,已明确高密度脂蛋白(HDL)和缺血性心脏病(动脉粥样硬化)的发病率呈负相关。动脉粥样硬化的发生和血清HDL-胆固醇的量降低有密切关系,HDL是一保护因子,可防止动脉粥样斑块形成。HDL是一种脂质和蛋白的复合体,组成它的主要载脂蛋白有apoA_1, A_2,A_4,apoB,apoC和apoE等,其中以apoA_1所占的比例最大,约为65％。体外细胞实验表明,HDL抑制低密度脂蛋白(动脉粥样硬化的主要致病因子)穿过动脉内膜,并抑制内皮细胞和LDL结合     

反义MCP-1转染兔平滑肌细胞及对其生长的影响

构建逆转录病毒载体反义单核细胞趋化蛋白1（LUCX-Anti-MCP－1）表达质粒,利用阳离子脂质体（Lipofectamine）将反义MCP－1导入体外培养的平滑肌细胞,通过PCR、Northern杂交检测外源基因的转染及其mRNA表达情况。应用3H胸腺嘧啶核苷（3H－TdR）掺入法了解反义MCP－1基因对细胞生长的影响．结果显示：Lipofectamine可以成功的将反义MCP－1基因导入体外培养的主动脉平滑肌细胞中,并实现外源基因的转录表达。且反义MCP－1基因对体外培养的平滑肌细胞生长没有影响。     

高脂饲料诱导的大鼠胰岛素抵抗及其与血清瘦素的关系

摄入大量脂肪被认为是胰岛素抵抗（insulin resistance,IR)形成的一个主要因素，本工作根据Storlien LH的配方制作高脂饲料，分别喂饲成年雄性SD大鼠30d和／或60d，用Kraegen EW方法建立正糖钳技术评估IR，观察IR形成和发展过程中基础血清瘦素和胰岛素刺激下血清瘦素的变化。结果喂饲大鼠高脂饲料30d形成IR，其血糖，血清瘦素水平，肩胛区脂肪、肾周脂肪、附睾脂肪垫重量均较对照组显著升高（均P＜0．01），但血清胰岛素水平与对照组比较无差别；喂饲大鼠高脂饲料60d,IR程度和高血糖水平与30d高脂组仍一样，血清瘦素水平和三处脂肪重量进一步升高（P＜0．001和0．01），出现高胰岛素血症（P＜0．05）；但喂饲高脂30和60天动物体重增长和正糖钳实验中灌流胰岛素2h后的血清瘦素水平与对照组无差别。结果：提示高脂饲料可诱导正常成年大鼠形成IR，体脂增高，高血糖，高瘦素血症是这类IR大鼠的特征，而高瘦素血症可能是IR形成的原因，而高胰岛素血症是IR的结果。