CD277~(+/-)的备选抗原递呈细胞在γδ T细胞识别不同抗原中的限制性递呈作用

目的研究CD277~(+/-)备选抗原递呈细胞(APC)在γδT细胞识别抗原中的限制性递呈作用。方法将流式分选的结核患者胸水或脐带血中的γδT细胞,用CFSE标记后与CD277~(+/-)备选抗原递呈细胞按1∶1比例混合培养,加或不加HMBPP或多肽E7刺激,使用流式细胞术检测γδT细胞增殖情况;以Transwell小室共培养法研究细胞相互接触对其增殖的影响。结果磷酸化抗原HMBPP或结核特异性多肽E7的体外刺激作用下,结核患者胸水和脐带血中的CD277~(+/-)的备选抗原递呈细胞都可引起γδT细胞不同程度的活化增殖,且CD277~+细胞的活化作用强于CD277~-细胞。不同个体来源的单核细胞系的备选APCs相对于淋巴细胞系的备选APCs更容易引起γδT细胞的增殖,其中以CD1a~+CD277~+CD14~-CD1b~-CD1c~-的细胞的抗原递呈效应最为明显,且通过小室实验证实了γδT细胞的增殖过程需与APCs相接触来实现。结论 CD277分子对γδT细胞识别不同抗原有一定限制性递呈作用,需进一步研究相关分子机制从而为γδT细胞的抗结核免疫机制以及相关的免疫治疗提供依据。     

结核性胸膜炎胸水CD4+与CD8+ T细胞的TCR和CDR3谱型分析

本研究的目的是了解结核性胸膜炎患者胸水中CD4^＋、CD8^＋T细胞聚集情况，并建立高效、灵敏的TCRα和β链多重PCR扩增方法，扩增出其特异性CD4^＋、CD^＋T细胞的TCRα和β链全长编码序列，研究病变局部特异性克隆增殖TCR的重排特点以及CDR3（complementarity-determining region 3）谱型，可供构建结核分枝杆菌（Mtb）特异反应性TCR四聚体参考。     

PCR和分离培养检测细胞培养支原体污染的比较

目的：检测细胞培养中支原体的污染,建立支原体通用的ＰＣＲ方法。方法：根据已出版的序列设计并合成一对支原体（柔膜体纲）１６Ｓ ｒＲＮＡ基因组特异引物。对实验室所存的１２种支原体、大肠杆菌、变形杆菌及无支原体污染的组织培养细胞进行了ＰＣＲ扩增。以ＰＣＲ与分离培养比较检测了３３份细胞培养标本。结果：１２种支原体均出现了约６２０ｂｐ左右的特异性扩增带,敏感性为１００￣１０００个支原体细胞,且常见的６种细胞     

免疫印迹分析肺炎支原体抗原与抗体成分

分别以ＭＰ国际标准株ＦＨ株和地方株北京８２株兔免疫血清对自制的ＦＨ株，北京８２株全细胞抗原和美国产ＣＴ抗原三种抗原作了免疫印迹分析。同时用以上三种抗原分析了６２例肺炎儿童血清和７９例健康大学生血清。     

酶联免疫斑点法对抗结核治疗期肺结核患者多肽特异性IFN-γ的检测

目的运用酶联免疫斑点法检测结核患者外周血IFN-γ探讨结核患者结核多肽特异性IFN-γ,分泌水平随抗结核治疗的变化。方法采用结核混合多肽E6＋E7＋C14、E6＋E7作为刺激抗原,对331个处于治疗前或1、2、3、4、5和6个月治疗期的肺结核患者外周血标本进行多肽特异性IFN-γ酶联免疫斑点法（ELISPOT）检测。结果治疗前的肺结核患者其ELISPOT阳性检测率均高于痰涂片和痰培养阳性率（E6＋E7＋C14-ELISPOT92．5％、E6＋E7-ELISPOT89．7％、痰涂片41．0％、痰培养59．0％）,且差别均有统计学意义（P〈0．010和P〈0．001）。在抗结核治疗各个时期,肺结核患者IFN十ELISPOT检测阳性率和斑点数（spot forming cells／10^6 cells,SFP）随着治疗的进行持续下降,由治疗前高水平（E6＋E7＋C14．ELISPOT阳性率92．5％、SFP计数中值M=381;E6＋E7-ELISPOT阳性率89．7％、SFP计数中值M=168）降至第6个月治疗结束时低水平（E6＋E7＋C14-ELISPOT43．6％、M=40;E6＋E7-ELISPOT38．1％、M=36）。痰涂阳性患者的SFP计数持续处在高位,且治疗6个月痰涂阳性患者的SFP计数显著高于痰涂阴性患者。结论两种混合多肽IFN-γ-ELISPOT可提高结核患者的诊断率,同时检测抗结核治疗患者的IFN-γ分泌水平以监测抗结核治疗的效果。     

用自制全细胞抗原检测肺炎支原体的本ABC—ELISA方法的建立及应用

用自制全细胞抗原建立了ＡＢＣ－ＥＬＩＳＡ检测ＭＰ－ＩｇＧ抗体方法，其敏感性高于常规ＥＬＩＳＡ和以美国产抗原建立的ＣＦ方法，特异性和重复性也好。应用该方法检测了６２例来自广州市两家医院儿科肺炎住院儿童的血清和７９例广州市某高 校健康大学生体检血清。