ArdipusillosideⅠ诱导胶质母细胞瘤细胞凋亡实验研究

目的研究开发诱导胶质母细胞瘤细胞凋亡的新型抗肿瘤药物并探讨其机制。方法以U87MG、原代培养的人源性胶质母细胞瘤株和SVGp12细胞为研究对象,采用甲基噻唑基四唑（MTF）法检测ardipusilloside Ⅰ作用后细胞的增殖活性,通过流式细胞仪分析细胞周期,Hoechst33342细胞核染色,透射电子显微镜观察ardipusillosideⅠ作用后细胞形态学的改变。Western blot检测细胞内FasL、Fas、caspase-8和caspase-3的蛋白表达情况。结果ArdipusillosideⅠ以时间和浓度依赖的方式显著抑制了人胶质母细胞瘤U87MG细胞和原代培养人源性胶质母细胞瘤细胞的增殖活性。随着时间的延长和浓度梯度的增加,处理组逐渐显示出典型的凋亡细胞形态学特征。ArdipusillosideⅠ明显地改变了胶质母细胞瘤的细胞周期。结论ArdipusillosideⅠ成功诱导了人脑胶质母细胞瘤U87MG细胞和原代培养的人源性胶质母细胞瘤细胞发生凋亡。     

下调Homer—1 b／c基因对机械性损伤神经元存活率的影响

目的既往研究表明,Homer-1b／c在神经元损伤后恒定表达,但下调Homer—1b／c能否对损伤的神经元具有保护作用尚不清楚,这也是本实验中待研究的问题。方法采用RNA干涉（RNAi）技术,抑制神经元Homer-1b／c基因及蛋白表达。通过Westernblot法分析神经元转染小干扰RNA（siRNA）后Homer—1b／c基因抑制效果。建立神经元机械性损伤模型,通过细胞存活率、乳酸脱氢酶（LDH）活性测定,研究下调Homer-1b／c基因对神经元损伤的保护作用。结果siRNA转染神经元后36h,Homer-1b／cmRNA和蛋白质表达明显被抑制。siRNA转染组神经元损伤后细胞存活率明显比阴性对照组、空载体组高（P〈0．05）。阴性对照组、空载体组和siRNA转染组神经元损伤前培养液LDH性无统计学差异（P〉0．05）,机械性损伤后24h,与阴性对照组及空载体组比较,siRNA转染组LDH活性明显降低（P〈0．05）。结论Homer—1b／csiRNA转染神经元效率较高,基因抑制效果显著。降低Homer-1b／c蛋白表达能够减少机械性损伤后继发性神经元损害,对神经元具有一定的保护作用。     

脊髓栓系综合征的显微外科治疗

目的: 探讨采用显微神经外科技术治疗脊髓栓系综合征的方法和疗效. 方法: 回顾性分析1996-01/2002-08由我科同一手术组收治的76例脊髓栓系综合征患者的临床表现、病理学特征、显微外科治疗方法以及疗效. 结果: 本组术后在住院期间内(5～15 d)54例(71%)患者症状得到改善. 52例获得随访,在随访期内(0.5～7.0 a)治愈者占17%,显效46%,好转23%,无效13%,总有效率为86%;无严重并发症. 结论: 采用显微神经外科技术治疗脊髓栓系综合征可明显提高手术效果,对成年患者及首次手术未治愈的患者均应采取积极的手术治疗.     

抑癌基因PTEN诱导人脑胶质瘤SHG—44细胞凋亡

目的 研究外源性PTEN基因对人脑胶质瘤细胞系SHG－44凋亡的影响,探讨PTEN基因抑制肿瘤细胞增殖的机制。方法 以携有人PTEN基因的真核表达载体体外转染SHG－44细胞,筛选阳性转染的细胞克隆并扩增培养。以原位杂交和免疫组化染色法检测PTEN基因的表达。采用透射电镜、流式细胞仪和核DNA琼脂糖凝胶电泳,检测转染PTEN基因后SHG－44胶质细胞的凋亡。观察导入入PTEN基因对SHG－44细胞裸鼠致瘤能力的影响。结果 获得PTEN基因稳定转染的胶质瘤细胞SHG－44,并检测到PTEN基因和蛋白的表达。透射电镜下可见转染PTEN基因后细胞核染色质浓缩边集、胞浆浓缩、核碎裂及凋亡小体形成等典型的凋亡表面。流式细胞仪显示,细胞周期从G1期到S期发生抑制,并在G1期峰前出现1个明显的凋亡峰（12．9％）。细胞核DNA琼脂糖凝胶电泳显示凋亡细胞特朋的梯状条带。转染空载体及未转染的SHG－44细胞未见的凋亡表现。转染PTEN基因后,SHG－44细胞对裸鼠瘤能力明显降低。结论 将外源必PTEN基因导入SHG－44肿瘤细胞后,可诱导细胞凋亡,这可能是PTEN基因抑制肿瘤细胞增殖的重要机制之一。     

原位杂交检测EGFR和c-erbB-2基因在人脑胶质瘤中的表达

目的：探讨表皮生长因子受体（EGFR）和c-erbB-2基因表达与人脑胶质瘤发生发展的关系。方法：采用原位杂交方法检测52例人脑胶质瘤、2株人脑胶质瘤细胞系及8例正常人脑组织中EGFR和c-erbB-2基因mRNA的表达。结果：EGFRmRNA阳性率在高恶性度（Ⅲ～Ⅳ级）胶质瘤为79．2％,低恶性度（Ⅰ～Ⅱ级）胶质瘤为50．0％,二差异显（P＜0．05）;c-erbB-mRNA阳性率在高恶性胶质瘤为83．3％,低恶性度胶质瘤为71．4％,二无显差别（P＞0．05）;EGFR和c-erbB-2mRNA表达均随胶质瘤恶性程度增高而增强（P＜0．01）。EGFR和c-erbB-2mRNA在2株人脑胶持瘤细胞系中均有表达,在8例正常人脑组织中均无表达。EGFR和c-erbB-mRNA表达结果密切相关（P＜0．05）。结论：EGFR和c-erbB-2基因在人脑胶质中普遍表达,且随胶质瘤恶性程度增高而表达增强,EGFR和c-erbB-2基因共表达在人脑胶质瘤发生发展过程中发挥重要作用。     

人内皮抑素基因的克隆与表达及其抑瘤作用的实验研究

目的 克隆人内皮抑素基因,检测其表达蛋白的生物学活性,应用该蛋白治疗裸鼠皮下人脑胶质瘤。方法 从人肝组织提取mRNA,用反转录聚合酶链反应技术克隆人内皮抑素基因,将其重组人pUC19,双氰末端终止法测定其核苷酸序列。构建非融合表达载体pDH-endo,使其在DH5α内经温度诱导表达,纯化该表达蛋白并用鸡胚绒毛膜尿囊膜实验和内皮细胞抑制实验检测其活性。经荷瘤裸鼠皮下注射该蛋白治疗人脑胶质瘤。结果 成功获得551bp的人内皮抑素基因,测序正确。该诱导表达蛋白分子量为20000,具有抑制血管生成活性。该蛋白每天5、10或20mg/kg裸鼠皮下注射可抑制荷瘤裸鼠皮下人脑胶质瘤血管生成和肿瘤生长（抑瘤率分别为34．5％,76．1％和80．2％）。结论 人内皮抑素基因和表达和初步应用,为采用抗血管生成方法治疗脑胶质瘤等实体瘤研究奠定了实验基础。     

重型颅脑损伤高压氧治疗后脑血流的改变

1　临床资料　我院神经外科收治伤后 2 4h内重型颅脑损伤 ,除外复合伤和开放性颅脑损伤 ,GCS≤ 8分者 35例 ,经手术和 /或初期的抢救治疗 ,病情稳定后 ,于伤后 3d ,行高压氧(HBO)治疗 2 0例 ,另 1 5例行脱水、激素、抗炎等对症治疗作为对照 .两组患者在年龄、性别、GCS计分、CT表现及治疗等无明显差异 .HBO治疗采用XYC 2 0 0 0 6型高压氧仓 (山东平度生产 ) ,治疗压力为 0 .2 5MPa ,吸纯氧 6 0min ,每日 1次 ,1 0d为 1疗程 ;间隔 3d再行下 1疗程 ;平均治疗 3～ 4个疗程 .两组患者伤后 3d (HBO治疗前 ) ,2wk (HBO治疗 1疗程后 ) ,…     

西学东渐——新译“Glasgow coma scale”

西方的科学研究成果大多来源于英语的语言文化环境,把西方的科学研究成果介绍到中国,必须重视英语的语言文化环境和汉语的语言文化环境的不同,这样才能使国人准确、方便地应用西方的科学研究成果,西学东渐。格拉斯哥昏迷评分（Glasgow coma scale）被翻译、介绍到国内已有数十年,但汉语版的“Glasgow coma scale”多种多样。容易造成初学者和使用者的迷惑。本文复习有关“Glasgow coma scale”的原始英式英文文献、美式英语英文文献和以往的几个主要的汉语翻译版。结合英式英语、美式英语和汉语的语言文化特点,新译了“Glasgow coma scale”,以方便医护人员使用。     

大鼠弥漫性轴索损伤后海马Homer1蛋白各亚型的表达及意义

目的 研究侧向旋转致大鼠脑弥漫性轴索损伤(DAI)后海马Homer1蛋白各哑型的表达规律及其意义.方法 成年雄性SD大鼠95只,随机分为对照组(NC组,n=10)、假手术组(SOC组,n=10)和DAI组(n=70),DAI组又根据致伤后时间分为1、3、6、12、24、48、72h共7个亚组,应用侧向瞬时旋转的方法建立大鼠脑DAI模型,取海马组织分别行Homer1蛋白各哑型(Homer1a、Homer1b/c)的免疫组化染色、Western blotting和实时荧光定量RT-PCR检测.结果 实验过程中5只动物死亡,其余90只进入结果分析.3种检测方法均发现DAI组神经组织中Homer1a蛋白和mRNA水平自伤后1h开始表达,至24h表达量最高(P＜0.01),持续至72h仍维持较高水平(P＜0.05),NC组该蛋白仅有极少量表达;而Homer1b/c在NC组、SOC组和DAI组均可见明确的阳性表达,但3组的表达量差异无统计学意义(P＞0.05).结论 Homer1a在DAI损伤急性期即于海马组织中表达,Homer1b/c则在损伤前后均有表达.Homer1蛋白的两种亚型可能在DAI中均发挥着要作用,抑制Homer1b/c或促进Homer1a表达可能对DAI损伤后神经元具有保护作用.     

三七总皂苷对过氧化氢诱导HT22 细胞氧化损伤的保护作用

目的 研究三七总皂苷（PNS）对氧化氢H2O2 损伤后海马神经元HT22 细胞的保护作用。 方法 采用CCK-8 法检测作用PNSHT22 细胞后细胞生长活性的变化,并通H2O2 刺激HT22 细胞,观察 PNS 对HT22 细胞活性的影响及形态变化。采用乳酸脱氢酶检测细胞损伤情况,流式细胞仪检测细胞的凋 亡比例。结果 PNS 在有效浓度范围内对HT22 细胞无毒性,且能增加细胞活性,减轻H2O2 对其损伤程度。 结论 PNS 能通过增强细胞内抗氧化活性,提高HT22 细胞的存活率,从而保护细胞抗氧化损伤。