趋化性细胞因子及其受体与凋亡--喜忧参半

最新研究结果表明,趋化性细胞因子及其受体与凋亡之间存在着密切关系。它们可通过不同的途径对凋亡进行调节,即通过死亡受体途径、线粒体途径诱导某些细胞发生凋亡,或通过MAPK途径、PI3K途径、上调PEG10、APRIL等抗凋亡蛋白的表达增强其他一些细胞的抗凋亡活性。这一发现打破了传统的趋化性细胞因子主要介导趋化作用的观念,揭示了趋化性细胞因子及其受体生物学作用的多面性。一方面,趋化性细胞因子可通过这种调节机制促进某些疾病,如白血病的发生发展;另一方面,我们又可通过调控其中的关键分子对某些恶性肿瘤进行治疗,在临床上有广阔的应用前景。文章将集中探讨趋化性细胞因子及其受体与凋亡间关系的最新研究进展。     

CD34+造血祖细胞的聚集、CXCR3 mRNA的检测及CXCR3极化的研究

目的 研究新鲜分离的和粒细胞单核细胞－集落刺激因子（granulocyte macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)刺激下的CD34^ 造血祖细胞上CXC趋化性细胞因子受体3（CXC chemokine receptor 3,CXCR3)mRNA水平表达的区别,以及在γ-干扰素诱导蛋白10（IFN－γ inducible protein 10, γIP-10）和γ-－干扰素诱导的单核因子（monokine inducedby IFN-γ,Mig）的作用,GM－CSF刺激的CD34^ 造血祖细胞的聚集作用和CXCR3分布的变化。方法 采用Northern blotting检测CXCR3 mRNA水平的表达;24孔板细胞培养法观察细胞聚集作用;荧光标记抗体染色CXCR3后,以共聚焦免疫荧光显微镜观察CXCR3的极化现象。结果 GM－CSF刺激的CD34^ 造血祖细胞上CXCR3 mRNA表达水平明显高于新鲜分离的细胞;γIP－10和Mig能够诱导GM－CSF刺激的CD34^ 造血祖细胞发生聚集现象和CXCR3重新分布现象,CXCR3聚集成束,并指向特定的方向。结论 GM－CSF的刺激作用能够显著性提高CXCR3在CD34^＋造血祖细胞上的表达;γIP－10和Mig能够诱导GM－CSF刺激的CD34^ 造血祖细胞的聚集作用和CXCR3的极化现象。     

趋化因子及其受体对造血细胞的调节

近年趋化因子的研究进展很快,已经发现了50多种趋化因子和17种趋化因子受体。现已证实,它参与了体内众多生理和病理功能。本文介绍趋化因子及其受体对造血细胞的调节和一些对造血干细胞/祖细胞增殖具有抑制作用的趋化因子,并详细讨论SDF-1/PBSF和其受体CXCR4对造血细胞的调控。     

Jα33基因工程蛋白与多克隆抗体的制备及初步应用

为了获得同时识别人类和小鼠MAIT细胞的特异性抗体,我们制备了MAIT细胞TCRα链Jα33融合蛋白及其抗体,为MAIT细胞在炎症性肠道疾病(IBD)中作用的研究提供有利的工具。用Jα33的全长序列为引物经PCR扩增Jα33串联体,扩增的串联体片段连接进入T载体,阳性克隆转入pGEX-4T-1表达载体中原核表达GST-Jα33融合蛋白,纯化后的融合蛋白免疫新西兰大白兔制备anti-Jα33多克隆抗体。并分别用Western blot和RT-PCR检测IBD模型小鼠MAIT细胞Jα33的表达。成功获得分子量约为38 kD的融合蛋白,免疫大白兔后得到抗Jα33的多克隆抗体,Western blot结果显示Jα33多克隆抗体能检测到人外周血单个核淋巴细胞表面Jα33的表达,而HeLa中则无Jα33的表达;MAIT细胞Jα33在IBD小鼠肠组织中表达量明显低于正常对照。成功制备了能同时识别人类和小鼠MAIT细胞Jα33的多克隆抗体,为研究MAIT细胞的定位和功能开启了方便之门。     

遗传印记基因PEG 10转基因小鼠的建立及其皮下移植瘤生长和转移的变化

目的 建立PEG10转基因小鼠模型,研究PEG10对小鼠皮下移植瘤的生长和转移的影响. 方法 PCR阳性转基因鼠经RT-PCR、Western blot鉴定后,皮下注射H22细胞,连续测量肿瘤体积.12 d后取肿瘤和肝脏组织进行HE染色,肝脏组织进行SP染色,检测PEG10蛋白的表达.计量资料采用独立样本的f检验.结果 阳性首建鼠的肝脏中枪测到目的 基因和蛋白的表达.转皋因小鼠皮卜瘤的体积(4.08、4.23 cm3)及质量(6.89、6.48 g)均显著高于野生昔小鼠(1.61 cm3及1.63 g,P<0.05),均向周围组织侵袭并出现肝转移,肝脏中检测到PEG10蛋白;野生型小鼠的肿瘤组织有包膜,未出现肝转移. 结论构建的PEG10转基因小鼠模型可促进皮卜移植瘤的生长、侵袭和转移.     

076树突状细胞的形成、功能及可能的应用

树突状细胞(DC)是目前发现的最有效的抗原呈递细胞(APC).根据其来源及功能特性,DC可分为髓系DC(DC1)和淋巴系DC(DC2)两大类.本文就二类DC的形成、功能及可能的临床应用等作一简要综述,包括DC1/DC2形成途径、对机体免疫的调控、其在肿瘤治疗、AIDS及疫苗设计等方面的可能应用.     

干燥综合征患者外周血CD5~+ B细胞、CD5 mRNA变化的研究

目的:了解干燥综合征患者外周血中CD5+B细胞的变化及其B淋巴细胞CD5在基因水平上的表达,探讨CD5+B细胞与干燥综合征的关系。方法:采用免疫荧光双标记技术和流式细胞仪检测了20例干燥综合征患者和10例健康对照者外周血中CD5+B细胞(CD5+CD19+)的百分率。应用流式细胞仪分选B淋巴细胞的基础上,运用Real-time RT-PCR方法检测7例干燥综合征患者外周血CD5 mRNA的表达水平。结果:干燥综合征患者外周血CD5+B(CD5+CD19+)细胞的百分率高于健康对照组(P<0.05)。86%的患者CD5 mRNA高于正常人水平。结论:干燥综合征患者外周血CD5+B细胞及CDS转录水平和干燥综合征的发病有一定的关联。     

Syk或ZAP-70信号途径诱导脐带血CD4~+T细胞极化

目的:探讨IL-2或IL-4和基质细胞源因子(SDF)-1α协同刺激下,脐带血CD4+T细胞极化的作用及其与非受体型蛋白质酪氨酸激酶的关系。方法:流式细胞术、实时定量RT-PCR检测IL-2或IL-4和SDF-1α协同刺激下,CD4+T细胞中胞内Th1型和Th2型细胞因子的表达;免疫复合物激酶分析法和免疫印迹法检测Th细胞极化过程中非受体型蛋白酪氨酸激酶Syk和ZAP-70的磷酸化;反义肽核酸(PNA)技术探讨Syk和ZAP-70在协同刺激Th细胞极化过程中的作用。结果:L-2或IL-4和SDF-1α协同作用可通过Syk或ZAP-70磷酸化诱导CD4+T细胞极化;Syk或ZAP-70 PNA可明显阻断Syk或ZAP-70磷酸化以及CD4+T细胞极化。结论:Syk和ZAP-70磷酸化对于IL-2或IL-4和SDF-1α协同诱导CD4+T细胞极化十分重要。     

半枝莲提取物诱导白血病K562细胞凋亡

目的 :探讨中药半枝莲诱导人类慢性髓性白血病K5 6 2细胞株的凋亡作用。方法 :采用MTT法检测半枝莲乙醇提取物对K5 6 2细胞的增殖抑制作用 ;HT荧光染色观察细胞形态变化 ;琼脂糖凝胶电泳测定凋亡细胞DNA的片段化 ;caspase 3单克隆抗体检测半枝莲提取物作用后K5 6 2细胞内caspase 3的表达。结果 :半枝莲提取物能明显抑制K5 6 2细胞增殖 ,使K5 6 2细胞出现凋亡所具有的形态学及生物化学特征 ,同时对K5 6 2细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用具有一定的浓度依赖性 ,经半枝莲提取物作用后的K5 6 2细胞内caspase 3表达增加。结论 :中药半枝莲提取物能诱导K5 6 2细胞凋亡 ,抑制肿瘤细胞增殖呈一定的浓度依赖关系 ,其作用机制可能与caspase 3的表达升高和活化有关。     

NKT细胞发育及功能研究进展

自然杀伤T细胞(Natural killer T cells,NKT细胞)是一类天然存在的介导先天性免疫和获得性免疫的重要淋巴细胞,参与机体的抗感染、抗肿瘤、移植免疫和自身免疫调节作用。NKT细胞的来源、选择分化和成熟过程及其调控研究有了很大的进展,同时在这些过程中仍存在一些备受争议和值得深入研究的问题。清楚了解NKT细胞的分化发育过程和调控机制,结合NKT细胞的生物学功能特征,将对临床预防和治疗相关的免疫性疾病具有重要的指导意义。